受理號：CSZ2400290體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術審評報告ⅠHIV-1檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）產(chǎn)品管理類別：第三類申請人名稱：廣州海力特生物科技有限公司國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心目錄基本信息.........................................................................................................3一、申請人名稱.............................................................................................3二、申請人住所.............................................................................................3三、生產(chǎn)地址.................................................................................................3技術審評概述.................................................................................................4一、產(chǎn)品概述.................................................................................................4二、臨床前研究概述...................................................................................5三、臨床評價概述.........................................................................................9四、產(chǎn)品受益風險判定................................................................................11綜合評價意見................................................................................................13基本信息一、申請人名稱廣州海力特生物科技有限公司二、申請人住所廣州高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學城攬月路80號D區(qū)第二層218-220、219-221單元三、生產(chǎn)地址廣州高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學城開源大道號新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學城攬月路號D區(qū)第二層218-220、219-221單元技術審評概述一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分試劑盒的主要組成成分見下表：序號試劑名稱規(guī)格與數(shù)量主要成分1PCRHIV-1DNA）1.1×2管dNTPsPCR2酶系42μ×1管熱啟動Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UDG定值的人類基因組3HIVDNA定量參考品150μ×1管（含有單拷貝整合的缺陷HIV-1前病毒）4HIVDNA弱陽性質控品1mL1管8E55HIVDNA強陽性質控品1mL1管8E56HIVDNA陰性質控品1mL1管生理鹽水7參考品稀釋液200L1管TE緩沖液備注：不同批號試劑盒中各組份不可以互換或混用。（二）產(chǎn)品預期用途本試劑盒用于體外定量檢測人全血中人類免疫缺陷病毒I型（）M組的DNA。檢測結果用于感染者抗病毒治療效果的評價。檢測結果不作為患者病情評價的唯一指標，必須結合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。本試劑盒不得用于血源篩查。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格48測試（四）產(chǎn)品檢驗原理本試劑盒針對M組亞型的高度保守區(qū)域設計引物和特異性探針（探針），配以反應液、耐熱dNTPs體外擴增法定量檢測DNA。本試劑盒設置了內標和細胞定量體系，用于控制假陰性及定量樣本中所含細胞或人類基因組數(shù)量。本試劑盒設置了dUTP/UDG反應體系，37℃預處理，利用酶將可能存在的二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品的主要原材料包括：引物、探針、酶、尿嘧啶糖dN(U)TPs通過外購和自行制備的方式獲得。申請人對主要原材料進行了供應商的選擇，通過功能性試驗，篩選出合格供應商，制定了主要原材料的技術要求和質量標準并經(jīng)檢驗合格。2.企業(yè)參考品和對照品的設置情況本產(chǎn)品的企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、線性參考品、最低檢出限參考品及精密度參考品。參考品采用臨床標本和細胞制備而成。陽性參考品12HIV-1陽性全血樣本。陰性參考品10HIV-1康人全血樣本及乙型肝炎病毒核酸陽性樣本等其他病原體陽性樣本。線性參考品及檢出限參考品7支，由HIV-1DNA陰性人類細胞梯度稀釋含有待測靶標的細胞制備而成。精密度參考品2支，包含兩個濃度水平，由含有待測靶標的細胞制備而成。本產(chǎn)品設置了HIV-1DNA陰性質控品、HIV-1DNA強陽性質控品和HIV-1DNA弱陽性質控品，用于檢測過程中試劑盒和儀器的質量控制。（二）生產(chǎn)工藝及反應體系研究申請人對生產(chǎn)工藝及反應體系的研究包括引物/探針濃度、細胞（內標）引物/探針濃度、酶用量、反應體系體積、擴增反應溫度和時間、樣本用量等分別進行了優(yōu)化或研究。申請人通過企業(yè)內部研究試驗，最終確定了最佳的生產(chǎn)工藝和反應體系。（三）分析性能評估本產(chǎn)品分析性能研究主要包括檢出限與定量限、線性范圍、準確度、精密度、特異性（交叉反應、干擾物質）和核酸提取相關性能研究。1.檢出限與定量限申請人以梯度稀釋的DNA批試劑對系列濃度樣本進行檢測，確定該產(chǎn)品檢出限為copies/106cellscopies/106cells不同亞型臨床樣本進行檢出限與定量限的驗證，結果均符合檢出限與定量限的性能要求。2.線性范圍申請人采用梯度稀釋的DNA單拷貝整合細胞為樣本和臨床樣本，樣本濃度為1.0×102copies/106cells～1.0×106copies/106cells，分別使用三批試劑盒進行檢測，結果表明產(chǎn)品在×102copies/106cells1.0×106copies/106cells呈線性相關，線性相關系數(shù)r0.980。3.準確度申請人使用293T細胞和110110、1×10、×103和1102copies/106cells五個梯度樣本，分別使用三批試劑盒進行檢測，結果濃度對數(shù)值與理論值濃度對數(shù)值的絕對偏差均不超過±0.5，符合準確度的性能要求。4.精密度申請人使用三批試劑盒在不同適用機型上，對高低濃度的臨床陽性全血樣本進行重復檢測。批內、批間檢測結果的檢測精密度參考品CV均＜，符合精密度的性能要求。5.分析特異性在交叉反應研究中，申請人以乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒、巨細胞病毒、腺病毒、單純皰疹病毒型、病毒、人類免疫缺陷病毒血清為待測樣本，使用三批試劑盒在適用儀器上檢測，檢測結果均為陰性。在干擾物研究，采用三批試劑盒，對各種可能的干擾物質進行評228mg/dL（3000（40g/L）對試劑盒的檢測結果無影響。相關治療藥物，包括替諾福韋、齊多夫定、恩曲他濱、柰韋拉平等，對檢測結果無影響。6.核酸提取申請人使用陽性樣本，使用海力特公司的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20191421）和凱杰公司BloodMiniKit的提取試劑盒進行對比研究，結果顯示核酸提取或純化試劑均滿足申報產(chǎn)品性能要求。（四）陽性判斷值研究選擇已確認的陽性樣本87份和40陰性全血所有臨床確診感染樣本均檢出，最低檢測值為5.8copies/1×106cells50copies/1×106cells究資料確定本試劑盒的檢測下限為50copies/1×106cells。（五）穩(wěn)定性研究申請人對本產(chǎn)品的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性以及樣本穩(wěn)定性進行研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及樣本的有效保存時間。效期穩(wěn)定性：將三批試劑盒儲存于±℃條件下，分別在第0、2、、、、9、10、1213和14個月對試劑盒的外觀、陰陽性符合率、最低檢出限、定量限、準確度、精密度進行考察，各項±14個月后檢測性能穩(wěn)定。此外，申請人對產(chǎn)品的開封穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性分別進行了研究，結果顯示，產(chǎn)品的性能均滿足產(chǎn)品說明書聲稱的要求。三、臨床評價概述申請人在中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院、廣州市第八人民醫(yī)院、重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心共三家臨床機構完成了臨床試驗，臨床試驗包括兩部分。第一部分為產(chǎn)品用于治療效果評價的研究。依據(jù)《全國艾滋病檢測技術規(guī)范（年修訂版）》，DNA定量檢測可判定HIV儲存庫含量，為進一步療效評價提供新的技術手段。該部分研究入組感染病例例，每例樣本包括治療0w時點，以及治療12w、24w、或中至少2個時間點。每個病例均進行試驗體外診斷試劑檢測、檢測及+T0w12w24w、48w或98.39%95.80%、93.33%93.29%92.52%檢出率分別為98.39%64.71%、42.33%、28.52%、23.83%。病例經(jīng)過治療后針對陰性的病例，試驗體外診斷試劑檢測結果為陽性，試驗體外診斷試劑在HIV治療效果評價方面可以作為檢測的補充。對治療12w、24w48w或后的RNA檢測結果及試驗體外診斷試劑檢測結果進行分析，RNA量值變化趨勢與試驗體外診斷試劑變化趨勢一致。在24w和96w5計37例病人的考核試劑DNARNA和CD4+T細胞無缺SPSS的變化趨勢對病例治療后CD4+T淋巴細胞是否回復到正常水平進行臨床治療效果分析。結果顯示，在年齡、性別、和DNA與治療96w時CD4+T淋巴細胞是否回復到正常水平顯著相關，=0.023。對考核試劑DNA、與CD4+T細胞計數(shù)在0w和均無缺失值的病例各指標在病例治療后相對0w的變化量進行最小絕對殘差回歸分析，分析結果表明，考核試劑載量的變化與CD4+T細胞計數(shù)改變呈強負相關關系（2=0.9799）。第二部分為產(chǎn)品臨床檢測性能研究。該部分研究采用試驗體外診斷試劑與權威文獻報道的行業(yè)公認的實驗室檢測方法進行比較研究，對產(chǎn)品臨床檢測性能進行評價。入組樣本包括感染者的樣本，以及丙型肝炎、乙型肝炎病毒或巨細胞病毒等相關疾病感染者的干擾樣本。病例涵蓋不同藥物治療、不同年齡段感染者的樣本，陽性樣本覆蓋試劑線性范圍。臨床試驗共入組受試者518例，其中針對0w8w12w、24w48w或中至少21549例對定量分析，同時在試驗體外診斷試劑和對比方法線性范圍內的樣本790份樣本的檢測結果進行copies/106cells轉換后進行試驗體外診斷試劑與對比方法檢測結果的回歸分析，結果顯示回歸方程斜率為0.88，截距為0.42，相關系數(shù)為0.77。試驗體外診斷試劑和對比方法檢測具有相關性。綜上所述，該產(chǎn)品臨床試驗設計符合《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的相關要求。四、產(chǎn)品受益風險判定本產(chǎn)品根據(jù)YY/T0316-2016醫(yī)療器械風險管理對本產(chǎn)品的安全風險分析方式，對本產(chǎn)品進行風險分析。（一）受益評估本產(chǎn)品DNA定量檢測可以作為現(xiàn)有的水平和CD4+T淋巴細胞計數(shù)基礎上新的抗病毒治療效果評價的指標。抗病毒治療過程中，逐漸下降到極低或檢測不到水平，不能進一步定量評估抗病毒治療效果時，DNA水平和CD4+T淋巴細胞計數(shù)可以繼續(xù)評價抗病毒治療效果。（二）風險評估申請人對已知危險（源）進行風險評價，按照風險可接受準則判斷每個危險（源）的風險是否達到可接受水平，對合理可行降低的風對具體措施進行實施驗證，同時重新對采取措施后的風險進行評估，確認其風險水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對主要剩余風險的規(guī)避，需要在說明書中提示以下信息：1.預期用途本試劑盒用于體外定量檢測人全血中人類免疫缺陷病毒I型（）M組的。檢測結果用于感染者抗病毒治療效果的評價。檢測結果不作為患者病情評價的唯一指標，必須結合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。本試劑盒不得用于血源篩查。2.的局限性及注意事項。綜合評價意見本申報項目為境內第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊。申請人的注冊申報資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務院令第739號）、《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48建議準予注冊。2024年8月20日附件：產(chǎn)品說明書人類免疫缺陷病毒Ⅰ型（）DNA檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）產(chǎn)品說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：人類免疫缺陷病毒Ⅰ型（）DNA檢測試劑盒（熒光探針法）【包裝規(guī)格】測試/盒【預期用途】本試劑盒用于體外定量檢測人全血中人類免疫缺陷病毒I型（）M組的DNA。檢測結果用于感染者抗病毒治療效果的評價。檢測結果不作為患者病情評價的唯一指標，必須結合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。本試劑盒不得用于血源篩查。【檢測原理】本試劑盒針對M組所有亞型中高度保守的區(qū)域設計特異性引物和PCR熱DNA聚合酶（酶）、核苷酸單體（dNTPs）等成分，用PCR體外擴增法定量檢測DNA。本試劑盒設置了內標和細胞定量體系融合，用于控制假陰性及定量樣本中所含細胞或人類基因組數(shù)量。本試劑盒設置了dUTP/UDG反應體系，℃預處理，利用酶將可能存在的PCR產(chǎn)物污染充分降解，排除假陽性結果。【主要組成成分】序號試劑名稱規(guī)格與數(shù)量主要成分1PCR反應液（DNA）1.1mL×2管引物、探針、核苷酸單體（dNTPs）、緩沖液2酶系42管熱啟動DNA（UDG酶）定值的人類基因組DNA3DNA定量參考品150管（含有單拷貝整合的缺陷前病毒）DNA弱陽性質控41mL×1管品DNA強陽性質控51mL×1管品6DNA陰性質控品1mL×1管生理鹽水7參考品稀釋液200管TE緩沖液備注：1）不同批號試劑盒中各組份不可以互換或混用。21.5mL201001000【儲存條件及有效期】本試劑盒儲存于-20±51±℃條件下運輸，其運輸穩(wěn)定性為7天；試劑盒反復凍融應少于5【適用儀器】適用于ABI檢測儀，ABIQuantStudioTM實時熒光定量PCR儀，ABI7實時熒光定量儀，宏石SLAN-96實時熒光定量儀，CFX96實時熒光定量儀?！緲悠芬蟆?.適用標本類型：全血2.全血采集：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2毫升，注入含抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5~10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，密閉送檢。3.標本保存和運輸：新鮮采集標本在℃可保存4天，也可以保存于-20±5°C，保存期為3個月。標本在℃以下條件下運輸不超過7天，并符合生物安全。【檢驗方法】1.DNA提取SUPI-101520191421DNABloodMinit貨號：或按說明書操作提取DNA弱陽性質控品、DNA強陽性質控品、DNA陰性質控品及臨床標本基因組DNA。2.（）試劑準備：取出反應液（DNA）、酶系，室溫溶解后，瞬時離心；按比例【PCR反應液（DNA）44.2μL/測試+0.8μL/測試】取相應的反應液、酶系，充分混勻后按45μL/管分裝至0.2mLPCR管或反應板，備用。（）DNA定量參考品稀釋：將DNA定量參考品1用參考品稀釋液倍梯度稀釋（推薦：1μL定量參考品+9μL參考品稀釋液），分別標記為DNA定量參考品2~4（具體濃度請參照試劑盒內給定值）。（0.2mLPCR反應板中分別加入5μLDNA定量參考品1~4DNA強陽性質控品、DNA弱陽性質控品及DNA陰性質控品）。蓋好薄壁蓋或反應板膜，10002min擴增反應。（）反應管置于熒光定量儀上，設置循環(huán)參數(shù)：Stage137°C×5min95°C×10min；Stage295°C×15s65°C×15s72°C×20s5Stage395°C×15s62°C×15s72°C×20sStage4：95°C×15s，52°C×15s，72°C×32s(熒光采集)次熒光通道檢測選擇：DNA檢測選擇通道，細胞定量檢測選擇通道。3.結果分析反應結束后自動保存結果，對DNA的曲線和相應細胞擴增的曲線進行分別分析。根據(jù)分析后圖像調節(jié)Baseline的Start值、值以及Threshold的值（用戶可根據(jù)實際情況自行調整，值可以在1-10，值可以在5-20，調整陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊進行分析，使窗口下的標準曲線圖達到最佳，即Correlation數(shù)值介于-1.0~-0.98。然后到Plate窗口下記錄定量結果。細胞中DNA含量結果計算：2條標準曲線分別定量的DNAcopies/μLcells/μL106得出標本中每106個細胞中DNA含量（單位：copies/106cells）。4.質量控制（）DNA陰性質控品：DNA擴增曲線無CT值顯示；（）DNA弱陽性質控品：檢測值介于50~5000copies/106cells；（）DNA強陽性質控品：檢測值介于1×104~1×10copies/106cells；（）DNA定量參考品（通道和通道）的結果均為陽性，值＜302條標準曲線線性相關系數(shù)0.98r︱≤。以上要求需要在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行?！娟栃耘袛嘀祷蛘邊⒖紖^(qū)間】通過參考值的研究確定本試劑盒的檢測下限為copies/106cells，定量下限為copies/106cells，定量范圍是100~1×106copies/106cells?！緳z測結果的解釋】1.對于測定值在100~1×106copies/10cells之間的樣本，報告相應的測定結果。2.對于測定值＞1×106copies/106的樣本，報告注明＞1×106copies/106cells。如果需要精確定量結果，可將提取樣本稀釋至線性范圍內再檢測。3.對于測定值≥50copies/10cells100copies/106的樣本，同時細胞定量為陽性且CT30DNA考。4.對于測定值＜50copies/10cells＜30并對此樣本進行重復試驗。【檢測方法的局限性】1.由于該試劑盒是針對病原體核酸的擴增檢測，雖然在試劑盒設計時選擇相對保守片段進行擴增及檢測，由于病原體基因存在變異可能，盡管選擇擴增檢測的保守序列發(fā)生變異的幾率非常小，但理論上無法完全避免其可能性。2.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運輸和保存質量密切相關，其中任何失誤都將會導致結果不準確。如果樣本處理時沒有控制好交叉污染，可能出現(xiàn)假陽性結果。3.本試劑盒僅限于該說明書中規(guī)定的樣本類型以及適用機型，其他樣本類型以及機型未經(jīng)驗證?！井a(chǎn)品性能指標】本試劑盒檢測本公司自制備的DNA定量標準品，陰、陽性參考品符合率100%，線性及最低檢出量參考品全部檢測為陽性，定量范圍符合質量標準。1.靈敏度：本試劑盒檢出限：copies/106cells，定量范圍：100~1×106copies/106cells，線性范圍：100~1×106copies/106cells。2.特異性：血紅蛋白（），總膽紅素（<28mg/dL）、甘油三酯（<3000）、總（）以及終濃度為（<300mg/dL）對HBVHCVEBV(SLE)(RA)和無交叉反應。3.精密度：批內、批間重復性好，檢測濃度對數(shù)值的變異系數(shù)CV<5%。4.MM組AEBCB/和C亞型基因型最低檢出限為50copies/106cells100~1×106copies/106cells?！咀⒁馐马棥勘驹噭┖袃H用于DNA體外檢測。1.使用前請仔細閱讀本說明書。2.實驗請嚴格分區(qū)操作：PCR準備區(qū)——建立擴增體系；樣品處理區(qū)——待測樣品和對照品處理；PCR檢測區(qū)——擴增檢測。3.各區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，防止交叉污染，實驗后請立即清潔工作區(qū)域。4.試劑盒內各類試劑使用前，充分融化后請稍離心幾秒。5.于-20±5℃保存