ICS11.200

B41DB32

備案號：58785-2018

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3395-2018

雞孵化廠菌落總數(shù)檢測與評判

Detectionandevaluationofthetotalnumberofcoloniesinincubationplant

2018-5-10發(fā)布2018-6-10實施

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3395—2018

雞孵化廠菌落總數(shù)檢測與評判

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了孵化廠的種蛋表面、空氣、水質(zhì)、絨毛和其它設(shè)施設(shè)備表面的菌落總數(shù)檢測方法與評

判標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于孵化廠內(nèi)部的菌落總數(shù)檢測與評判。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修訂版）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

NY5027-2008無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)

3種蛋表面

3.1采樣與檢測

3.1.1采樣位置：對于消毒前種蛋，在一個蛋車的最上面一層蛋盤、最中間一層蛋盤、最下面一層蛋盤

各取每個蛋盤最中間一枚種蛋，共采取5個蛋車的樣本。5個蛋車共計采樣15枚種蛋。種蛋消毒過后，

采用同樣的方法采樣。

3.1.2采樣方法：將特制規(guī)板的圓形部分（直徑為3.5cm，面積為9.62㎝2）進行火焰滅菌，待冷卻后將

規(guī)板套在待檢測種蛋的大頭部分，在裝有5mL滅菌生理鹽水的玻璃試管中浸濕滅菌的棉簽，在玻璃試

管壁上擠去多余的鹽水，然后在規(guī)板范圍內(nèi)滾動棉簽，涂抹待檢測蛋表面30s完成一個采樣。規(guī)板圖示

見附錄A。折去棉簽手持部位，使采樣部位落入5mL滅菌生理鹽水玻璃試管中，并與生理鹽水充分混

合，帶回實驗室檢驗。

3.1.3檢測要求：對于消毒前種蛋，吸取用滅菌生理鹽水稀釋10倍的樣品水溶液0.5mL，注入直徑9cm

的滅菌平皿中，然后傾注20mL已融化并冷卻到40℃~50℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使水

溶液與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗時，應(yīng)用單獨一個平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作空白對照。對于消毒

后的種蛋，直接吸取0.5mL樣品水溶液，處理方法同前。在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，進行細菌計數(shù)。

3.2菌落總數(shù)計數(shù)（CFU/㎝2）

3.2.1消毒前種蛋單位面積菌落總數(shù)計算方法如下：

N=（A×100）/9.62

備注:式中

5

DB32/T3395—2018

N：種蛋表面每平方厘米菌落總數(shù)

A：培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)

3.2.2消毒后種蛋單位面積菌落總數(shù)計算方法如下：

N=（A×10）/9.62

備注:式中

N：種蛋表面每平方厘米菌落總數(shù)

A：培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)

3.3判定

判定標(biāo)準(zhǔn)詳見表1

表1種蛋菌落總數(shù)判定標(biāo)準(zhǔn)

采樣每平方厘米菌落總數(shù)（CFU/㎝2）判定

<400合格

消毒前種蛋

≥400不合格

<8.7合格

消毒后種蛋

≥8.7不合格

4.空氣

4.1采樣位置及方法

4.1.1采樣位置

在以下位置進行空氣采樣：

a)孵化機：入口和出口

b)孵化廳：兩頭和中間

c)出雛機：左右兩邊

d)出雛廳：兩頭和中間

e)苗雞房：四角和中央

f)疫苗間：四角和中央

g)種蛋室：四角和中央

4.1.2采樣器皿

提前24h用平板制作好普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，密閉備用。

4.1.3采樣方法

5

DB32/T3395—2018

在上述采樣位置，各放置一直徑9cm的普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿，打開培養(yǎng)皿蓋暴露15min后蓋好蓋子回

收。

4.2檢測

4.2.1回收的平板在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

4.2.2計算平板上的菌落數(shù)。

4.2.3菌落總數(shù)判定標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2空氣菌落總數(shù)判定標(biāo)準(zhǔn)

采樣菌落總數(shù)（CFU/㎝2）判定

<350合格

苗雞房

≥350不合格

<30合格

出雛機/出雛廳

≥30不合格

<20合格

孵化機/種蛋室/疫苗間/孵化廳

≥20不合格

5雛雞絨毛

5.1采樣方法：使用滅菌樣品袋采集出雛機內(nèi)的絨毛2g~3g，帶回化驗室檢測。

5.2細菌培養(yǎng)：無菌稱取0.5g絨毛與50mL無菌蒸餾水混合1h，過濾去除絨毛。取1mL過濾后的水

溶液倒在營養(yǎng)瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

5.3判定標(biāo)準(zhǔn)：單位面積菌落總數(shù)小于1.0×104CFU/cm2，判定為合格。

6加濕水

加濕水按照NY5027標(biāo)準(zhǔn)進行判定，菌落總數(shù)小于10MPN/100mL判定為合格用水。

7其它孵化設(shè)施設(shè)備表面

7.1采樣位置

5

DB32/T3395—2018

其它設(shè)施設(shè)備表面在以下位置表面進行采樣：

a)孵化機內(nèi)壁

b)孵化機蛋架

c)孵化機蛋車

d)孵化機胚蛋表面（1胚齡-3胚齡或15胚齡-17胚齡）

e)出雛機內(nèi)壁

f)出雛機蛋盤

g)疫苗間墻壁

h)疫苗用容器

i)疫苗間工作臺面

j)蛋筐

k)蛋托

l)苗雞箱墊紙（消毒前和消毒后）

7.2檢測

7.2.1當(dāng)待檢測部位的面積較大時，用特制規(guī)板的圓形部分（直徑為3.5cm，面積為9.62㎝2）；否則

用特制規(guī)板的正方形部分（邊長為1cm，面積為1.0㎝2），檢測方法同3.1.2和3.1.3。

7.2.2判定

判定合格指標(biāo)見表4。

表3其它孵化設(shè)施設(shè)備表面菌落總數(shù)判定合格指標(biāo)

采樣合格指標(biāo)（CFU/㎝2）

孵化機內(nèi)壁、孵化機蛋架、孵化機蛋車、孵化機胚蛋表面、出雛機內(nèi)壁、出雛機蛋盤、蛋筐、

≤12

蛋托、苗雞箱墊紙

疫苗間墻壁、疫苗用容器、疫苗間工作臺面≤4

8孵化廠菌落總數(shù)檢測頻率

以上項目每20天檢測一次，遇特殊異常情況，需要增加檢測頻率。孵化廠內(nèi)部檢測項目見附錄

B。

5

DB32/T3395—2018

附錄A

（規(guī)范性附錄）

規(guī)板圖示

A.1規(guī)板圖示見圖A1

圖A1規(guī)板圖

5

DB32/T3395—2018

附錄B

（規(guī)范性附錄）

孵化廠內(nèi)部檢測項目

B.1孵化廠內(nèi)部檢測項目見表B1。

表B1孵化廠內(nèi)部檢測項目

檢測項目采樣地點采樣位置采樣數(shù)量培養(yǎng)基類別

種蛋表面蛋盤中15個×1普通

孵化機入口、出口2個×2普通

孵化廳兩頭、中間3普通

出雛機左、右2個×2普通

空氣出雛廳兩頭、中間3普通

苗雞房四角、中央5普通

疫苗間四角、中央5普通

種蛋室四角、中央5普通

雛雞絨毛出雛機內(nèi)部2-3克普通

加濕水加濕器1普通

孵化機左右內(nèi)壁2個普通

孵化機蛋架2個普通

孵化機蛋車2個普通

孵化機胚蛋表面2個×2普通

出雛機內(nèi)壁2普通

出雛機蛋盤對角