微生物菌種保藏的方法主講教師：劉桂香蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院SuzhouAgriculturalVocationalandTechnicalCollege菌種保藏的目的0101菌種是一種極其重要和珍貴的生物資源。02菌種保藏是指通過(guò)適當(dāng)方法使微生物長(zhǎng)期存活，并保持原種的生物學(xué)性狀穩(wěn)定不變的一類措施。03菌種保藏同時(shí)能夠?yàn)檠芯亢蜕a(chǎn)提供方便。02菌種保藏的原理首先，挑選典型菌種或典型培養(yǎng)物的優(yōu)良純種，最好的形式是分生孢子、芽孢等休眠體；其次，創(chuàng)造降低微生物代謝活動(dòng)強(qiáng)度、生長(zhǎng)繁殖受抑制，難以發(fā)生突變的環(huán)境條件，例如：干燥、低溫、缺氧、避光、缺營(yíng)養(yǎng)以及添加保護(hù)劑或酸堿中和劑等。其中干燥和低溫是最重要的因素。02菌種保藏的原理（一）斜面低溫保藏法方法：菌種接種斜面，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期，然后置4℃冰箱保藏，定時(shí)傳代。原理：低溫下，微生物代謝強(qiáng)度明顯下降。保藏時(shí)間：細(xì)菌每個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。酵母菌兩個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、使用方便。缺點(diǎn)：保藏時(shí)間短。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可2～4個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。02菌種保藏的原理（二）超低溫冰箱保藏法冷凍保護(hù)劑：等體積的20％甘油或10％二甲亞砜或脫脂牛奶。液氮法：將菌種置于保護(hù)劑中，預(yù)凍后保存在液氮超低溫冰箱中（-196℃）。一般超低溫冷藏法：菌種置于保護(hù)劑中，在超低溫冰箱（－70℃）里保藏。適用于各種微生物的較理想的保藏方法。普通冷凍保藏：-20℃02菌種保藏的原理（三）真空冷凍干燥法方法：原理：保藏時(shí)間：優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：加有保護(hù)劑的菌懸液在凍結(jié)狀態(tài)下予以真空干燥。低溫、干燥、絕氧。數(shù)年至數(shù)10年。保藏時(shí)間長(zhǎng)。設(shè)備和操作麻煩。02菌種保藏的原理（四）液體石蠟低溫保藏法方法：斜面培養(yǎng)好后，橡皮塞取代棉塞、加石蠟油，1cm。置于室溫或4℃冰箱保藏。原理：低溫、絕氧。保藏時(shí)間：細(xì)菌和酵母菌1年。霉菌、放線菌、芽孢菌2年以上。優(yōu)點(diǎn)：制作簡(jiǎn)單、保藏時(shí)間較久。缺點(diǎn)：不方便攜帶，接種時(shí)灼燒接種環(huán)容易冒火花。02菌種保藏的原理（五）載體吸附保藏法方法：將菌種（一般選用孢子和芽孢）置于土壤、細(xì)紗、濾紙、硅膠等干燥材料上保藏。如砂土管法，適用于放線菌、芽孢菌和某些真菌保藏。原理：干燥、絕氧。保藏時(shí)間：幾至幾十年。優(yōu)點(diǎn)：較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備。02菌種保藏的原理載體質(zhì)粒等所攜帶的外源DNA片段的遺傳性狀不太穩(wěn)定、且其外源質(zhì)粒復(fù)制子很容易丟失；對(duì)于宿主細(xì)胞質(zhì)粒基因通常為生長(zhǎng)非必需；一般情況下當(dāng)細(xì)胞丟失這些質(zhì)粒時(shí)，生長(zhǎng)速度會(huì)加快；由質(zhì)粒編碼的抗生素抗性在富集含此類質(zhì)粒的細(xì)胞群體時(shí)極為有用；當(dāng)培養(yǎng)基中加入抗生素時(shí)，抗生素提供了一有利于攜帶質(zhì)粒的細(xì)胞群體的極有用的生長(zhǎng)選擇壓。而且在運(yùn)用基因工程菌進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，抗生素的加入可幫助維持質(zhì)粒復(fù)制與染色體復(fù)制的協(xié)調(diào)；（六）基因工程菌