凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程(SOP文獻(xiàn))

1目的

作為介質(zhì)輔助用于完全抗體及不完全抗體H勺臨床篩選檢

測(cè)及輔助用于臨床交叉配血試驗(yàn)。

2檢查原理

紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以防止其產(chǎn)生自發(fā)性匯

集，當(dāng)紅細(xì)胞懸浮在電解質(zhì)時(shí)，陽(yáng)離子會(huì)被紅細(xì)胞的負(fù)電荷

所吸引，此時(shí)紅細(xì)胞則被擴(kuò)散的雙層離子云所圍繞，而形成

Zeta電位，Zeta電位決定紅細(xì)胞之間口勺排斥作用。

凝聚胺技術(shù)首先運(yùn)用低離子溶液(LIM),減少介質(zhì)的離子

強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，以增進(jìn)紅細(xì)胞和血清(血

漿)中的抗體結(jié)合。

其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一種高價(jià)陽(yáng)離

子多聚物、肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生諸多正電荷，可以中

和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞Zeta電位減少，縮

短紅細(xì)胞之間日勺距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。最終,

加入懸浮液(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺

(Polybrene)陽(yáng)離子的作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝聚

散開(kāi)，試驗(yàn)成果為陰性；但假如紅細(xì)胞被對(duì)應(yīng)的抗體致敏，

則會(huì)被凝聚胺凝結(jié)，凝集就不會(huì)散開(kāi)，試驗(yàn)成果為陽(yáng)性。

3儲(chǔ)存條件及有效期

未開(kāi)封試劑應(yīng)貯存于2℃~25℃、相對(duì)濕度不不小于80%,

無(wú)腐蝕性氣體口勺室內(nèi)；己開(kāi)封試劑應(yīng)貯存于相對(duì)濕度不不小

于80%,無(wú)腐蝕性氣體和通風(fēng)良好的室溫環(huán)境，試劑用后應(yīng)

及時(shí)擰緊瓶蓋保留；未開(kāi)封試劑的有效期為二年，在有效期

內(nèi)的已開(kāi)封試劑應(yīng)在開(kāi)封后的6個(gè)月內(nèi)使用完。

4樣本規(guī)定

4.1新鮮血清，含EDTA抗凝血漿、3%~5%的紅細(xì)胞懸液。

4.2不能使用溶血標(biāo)本及含枸椽酸鈉、肝素抗凝血漿標(biāo)本。

5檢查措施

輔助交叉配血試驗(yàn)

5.1取試管二支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2

滴，加供血者紅細(xì)胞懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴,

次側(cè)管反之。

5.2各加LIMO.65ml,混合均勻后，再各加Polybrene溶液2

滴，并混合均勻0

5.3用離心機(jī)3400轉(zhuǎn)/min（相稱于1000g離心力）離心10秒,

然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。

5.4輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，則必

須要重做。

5.5最終加入Resuspending2滴，輕輕搖動(dòng)試管混合并同步

觀測(cè)成果。假如在60秒內(nèi)凝集散開(kāi)，代表是由Polybrene

引起的非特異性匯集，配血成果相合；如凝集不散開(kāi)，則為

紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合歐I特異性反應(yīng)，配血成果不相合。如反

應(yīng)可疑，可深入倒在玻片上用顯微鏡觀測(cè)。

6注意事項(xiàng)

6.1可以用含EDTA之血漿替代血清使用。

6.2若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加4?6

滴Polybrene溶液以中和肝素。

6.3本試劑盒的操作措施也合用于抗體鑒定。

6.4若試劑使用前為低溫貯存，請(qǐng)答復(fù)室溫再行操作。

6.5加做輔助性抗人球蛋白試驗(yàn)，目的是增長(zhǎng)檢測(cè)抗-K的

敏感性。

6.6在冬天室溫極低日勺狀況下，操作交叉配血試驗(yàn)，某些病

人血清中也許具有冷凝集素等原因，而導(dǎo)致假陽(yáng)性的成果出

現(xiàn)。若有此懷疑，提議在最終滴入Resuspending時(shí)，將試

管立即置入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)試管混合，并在60秒內(nèi)

觀測(cè)成果。

6.7紅細(xì)胞抗原檢測(cè)環(huán)節(jié)同抗體篩檢試驗(yàn)，其檢測(cè)原則血清

用已知原則血清。

6.8顧客可使用IgG抗D抗體（效價(jià)264）與RhD陽(yáng)性紅細(xì)

胞反應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，測(cè)試本試劑日勺有效性。

0——

AB4-+

注：“+”有凝集反應(yīng)，”無(wú)凝集反應(yīng)

6檢查成果時(shí)解釋

將已知日勺抗A、抗B血型定型試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合

時(shí)，與抗A血型定型試劑發(fā)生凝集者即為A型血型，與抗B

血型定型試劑發(fā)生凝集者即為B型血型，與抗A、抗B血型

定型試劑均發(fā)生凝集者即為AB型血型，與抗A、抗B血型定

型試劑均不發(fā)生凝集者即為0型血型。

7注意事項(xiàng)

7.1對(duì)具有較多自身冷凝集的受檢者，在鑒定血型時(shí)往往

被誤認(rèn)為AB血型，碰到此種狀況，需用37。生理氯化鈉溶

液洗滌受檢者細(xì)胞2-3次，以清除吸附在紅細(xì)胞卜?的凝集素,

然后再鑒定血型。

7.2在做配型試驗(yàn)時(shí)，如發(fā)既有不配合現(xiàn)象，則取受檢者

血清，用已知A血型或B血型細(xì)胞進(jìn)行反定型試驗(yàn)，以核算

原鑒定日勺血型與否對(duì)的。

7.3用立即試管法不能測(cè)出亞型（如Ax）,需延長(zhǎng)作用時(shí)

間。

7.4本品如出現(xiàn)渾濁或變色則不能使用，若開(kāi)瓶使用時(shí)間

較長(zhǎng)后，最佳用已知ABO血型紅細(xì)胞檢查成果與否與己婦血

型相符，以防制品污染，變質(zhì)失效，而導(dǎo)致鑒定錯(cuò)誤。

7.5在有效期內(nèi)使用。

ABO血型反定型操作規(guī)程（SOP文獻(xiàn)）

1目的

用于ABO血型日勺反定型檢測(cè)，該產(chǎn)品不用于血源篩查。

2檢查原理

本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和0型合格人紅

細(xì)胞經(jīng)洗滌后懸浮于紅細(xì)胞保留液中配制而成。采用凝集試

驗(yàn)原理，用已知的Al,B,0型紅細(xì)胞測(cè)定被檢者血清/血漿

中有無(wú)對(duì)應(yīng)日勺抗A或抗B抗體（反定型試驗(yàn)），結(jié)合正定型

成果鑒定ABO血型。

3檢查措施

試管法

3.1取被檢者血清/血漿各50ul分別加入3支標(biāo)識(shí)好日勺試管

中；

3.2分別各加50ulAl、B、0試劑紅細(xì)胞;

3.3搖動(dòng)試管，混勻。于900g離心15s,或室溫靜止lh;

3.4首先檢查與否溶血，（溶血也許是陽(yáng)性成果，或是細(xì)菌污

染。）輕輕搖動(dòng)懸浮紅細(xì)胞。

3.5觀測(cè)凝集狀況，并立即記錄成果。必要時(shí)可借助顯微鏡

觀測(cè)。

4檢查成果時(shí)解釋

ABO血型正反定型反應(yīng)格局表

正定型反定型血型

抗A試劑抗B試劑A1細(xì)胞B細(xì)胞。細(xì)胞

十——十—A

—++——B

一—++一0

++———AB

注：“+”有凝集反應(yīng)，“-”無(wú)凝集反應(yīng)

5注意事項(xiàng)

5.1假如在反定型試驗(yàn)中，受檢者的血清/血漿與0血型紅細(xì)

胞試劑產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，則需要添加自身對(duì)照試驗(yàn)。假如自身

對(duì)照為陽(yáng)性，表明是冷凝集素導(dǎo)致。假如自身對(duì)照為陰性，

則表明被檢者血清或血漿中也許存在ABO系統(tǒng)以外的其他血

型系統(tǒng)的抗體干擾定型。請(qǐng)按照有關(guān)的試驗(yàn)措施處理上述定

型問(wèn)題。

5.2本品如出現(xiàn)紅細(xì)胞顏色變成暗紫色或紅細(xì)胞自發(fā)凝集，

出現(xiàn)菌落或溶血，則不能使用。若開(kāi)瓶使用時(shí)間較長(zhǎng)后，最

佳用注冊(cè)上市H勺抗A、抗B血型定型試劑檢查成果與否與已

知血型相符，以防制品污染、變質(zhì)失效、而導(dǎo)致檢定錯(cuò)誤。

5.3為了便于鑒別，A1血型紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為藍(lán)色，B血型

紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為黃色，0血型紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為紅色。

乙型肝炎病毒表面抗原操作規(guī)程（SOP文獻(xiàn)）

1.目日勺

用于血液日勺篩查和臨床乙型肝炎病毒感染日勺輔助診斷。

2.檢查原理

本品系用乙型肝炎表面抗體（抗TIBs）包被的微孔板和酶

標(biāo)識(shí)抗TIBs及其他試劑制成，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原

理檢測(cè)人血清和血漿中時(shí)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）

3,合用儀器

微量移液器；37c恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶；

計(jì)時(shí)器;酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長(zhǎng)450nm,參照波長(zhǎng)630nln。

4.樣本規(guī)定

4.1樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)搜集血

液，全血樣本最佳先放置37℃處理2小時(shí)，再將血樣本充足

離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不具

有或很少具有血細(xì)胞。假如為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充足

離心后，最佳再放置室溫2小時(shí)以上。

4.2樣本中具有疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)的成果，高度溶血的樣

本、沒(méi)完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本也許會(huì)引

起錯(cuò)誤的成果。

4.3新鮮的（樣本在2、8℃無(wú)菌條件下可保留一周，新鮮樣本

可長(zhǎng)期貯存在-20℃或如下，防止反復(fù)凍融。

5.檢查措施

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡

30分鐘，同步將洗滌液進(jìn)行1:40倍稀釋。

5.2設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，空白對(duì)照1孔。

5.3加樣：在陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照孔內(nèi)分別加入陽(yáng)性對(duì)照、

陰性對(duì)照50ul,其他每孔加待測(cè)血清或血漿50ulo蓋上封

孔膠片，置37℃水浴孵育60分鐘。

5.4洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液持續(xù)洗滌5

次后，拍干孔內(nèi)液體。

5.5加酶結(jié)合物:空白孔除外,每孔各加酶結(jié)合物50ul。

蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。

5.6洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液持續(xù)洗滌5

次后，拍干孔內(nèi)液體。

5.7加底物液：每孔先加底物液A50ul,再加底物液B50J1,

混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色30分鐘后，

加終止液50uL混勻，終止反應(yīng)。

6.參照值（參照范圍）

終止后盡快測(cè)定，波長(zhǎng)450nm,先用空白孔校零，測(cè)0D值。

假如選用雙波長(zhǎng)測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公式計(jì)

算：

C0V二陰性對(duì)照平均0D值X2.1倍

陰性對(duì)照平均0D值低于或等于0.05,按0.05計(jì)算；高

于0.05時(shí)，按照實(shí)際0D值計(jì)算。

7.檢查成果日勺解釋

樣品0D值S/C0V21時(shí)，待測(cè)樣本HBsAg為陽(yáng)性；

樣品OD值S/COV<1時(shí)，待測(cè)樣本HBsAg為陰性。

8.注意事項(xiàng)

8.1本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢

測(cè)成果作為診斷指標(biāo)之一。

8.2使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘

后，方可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保留，備

用。

8.3成果鑒定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

8.4封孔膠片不得反復(fù)使用。

8.5在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試

驗(yàn)成果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不一樣批號(hào)不得混用。

8.6陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)呈陽(yáng)性，否則所有試驗(yàn)無(wú)效。

8.7保證樣本加樣量的精確，假如加樣不精確也許會(huì)導(dǎo)致

錯(cuò)誤的試驗(yàn)成果。

8.8使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。

8.9在操作過(guò)程中應(yīng)盡量防止反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。

8.10精確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。

8.11洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量應(yīng)注意控

制，既防止洗液過(guò)量而溢出，又能充斥反應(yīng)微孔，并常常檢

查加液頭與否堵塞；2洗板機(jī)最佳每次使用前、后沖洗潔凈,

防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。

8.12本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳

染性物質(zhì)，請(qǐng)按有關(guān)試驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。

9.參照文獻(xiàn)

《中國(guó)藥典》2023年版三部；

《體外診斷試劑闡明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)食藥監(jiān)械

[2023]240號(hào)）

梅毒螺旋抗體操作規(guī)程（SOP文獻(xiàn)）

1.目的

本試劑盒定性檢測(cè)人血清或血漿中H勺梅毒螺旋體抗體。合

用于血液日勺篩查及臨床梅毒螺旋體感染日勺輔助診斷。

2.檢查原理

本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理。在微

孔條上預(yù)包被梅毒螺旋抗體時(shí)基因重組抗原，配以酶標(biāo)識(shí)抗

原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺

旋體抗體。

3.合用儀器

加樣器、溫箱、洗板機(jī)、含波長(zhǎng)450nmH勺酶標(biāo)儀。

4.樣本規(guī)定

4.1本試劑使用樣品為人血清或血漿，具有EDTA、檸檬酸

鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本試驗(yàn)。

4.2不能檢測(cè)含懸浮纖維蛋白或匯集物、重度溶血的樣品。

4.3樣品中應(yīng)無(wú)微生物，可在2、8℃儲(chǔ)存1周，長(zhǎng)期儲(chǔ)存應(yīng)

低溫凍存，防止反復(fù)凍融。

4.4使用前請(qǐng)將樣品室溫平衡30分鐘以上，冷凍樣品試驗(yàn)

前需混勻。

5.檢查措施

5.1配液：將濃縮洗滌液用蒸饋水或去離子水20倍稀釋。

5.2編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔板按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照

3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔和空白對(duì)照1孔。（用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，可不

設(shè)空白對(duì)照孔）。

5.3加樣：分別在對(duì)應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或陰性、陽(yáng)性對(duì)照

lOOulo

5.4溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育60±2分鐘。

5.5洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍，最終一次

盡量扣干。

5.6加酶:酶孔加入酶標(biāo)試劑100ul,空白孔除外。

5.7溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育30±1分鐘。

5.8洗板：操作同環(huán)節(jié)5.5

5.9顯色:沒(méi)孔加入顯色劑A.B液各50uL輕輕震蕩混勻,

37±1℃避光顯色30±1分鐘。

6.參照值

臨界值(CUTOFF)計(jì)算臨界值二陰性對(duì)照孔A均值NC+0.18.

7.檢查成果日勺解釋

7.1陰性對(duì)照孔A值W0.10,陽(yáng)性對(duì)照孔A值20.80.否則

試驗(yàn)無(wú)效。

7.2若有1孔陰性對(duì)照A值不小于0.1應(yīng)舍棄，若兩孔或兩

孔以上陰性對(duì)照A值不小于0.1,應(yīng)反復(fù)試驗(yàn)。

7.3陰性鑒定:樣品A值V臨界值(CUTOFF)者為TP陰性。

7.4陽(yáng)性鑒定：樣品A值2臨界值(CUTOFF)者為TP陽(yáng)性(注

意：初試陽(yáng)性應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試)。

8.注意事項(xiàng)

8.1本品僅用于體外診斷，操作應(yīng)按闡明書嚴(yán)格進(jìn)行。封板

膜不能反復(fù)使用，不一樣批號(hào)酶標(biāo)板。酶標(biāo)試劑和陰性、陽(yáng)

性對(duì)照不可混用，不能與其他廠家試劑混用。

8.2防止在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑(如84消毒劑)

歐I環(huán)境下操作。

8.3使用前請(qǐng)將試劑平衡至室溫(平衡30分鐘以上)，試驗(yàn)

前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回2?8℃。未用完的

微孔板條與干燥劑儀器用自封袋密封2~8℃保留。過(guò)期試劑

請(qǐng)勿使用。

8.4加液時(shí)必須用加樣器，并常常校對(duì)加樣器的精確性。加

入不一樣樣品或不一樣試劑組分時(shí)，應(yīng)更換加樣器吸頭和加

樣槽，以防出現(xiàn)交叉污染。

8.5洗滌時(shí)各孔均需加滿洗液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗

凈。使用洗板機(jī)應(yīng)設(shè)定30飛0秒侵泡時(shí)間。在洗板結(jié)束后，

必須立即進(jìn)行下一步，不可使酶標(biāo)板干燥。防止長(zhǎng)時(shí)間的中

斷試驗(yàn)環(huán)節(jié)，以保證每孔試驗(yàn)條件日勺均一。

8.6成果鑒定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。讀取成果時(shí)，應(yīng)擦干

酶標(biāo)板底部，且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，

指印或劃痕都也許影響板孔的讀值。

8.7所用樣品、廢液和廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為

硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

8.8顯色時(shí)必須加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色

過(guò)低。

8.9由于ELISA反應(yīng)原理日勺限制，本試劑檢測(cè)陰性并不排除

TP感染的也許。檢測(cè)的陽(yáng)性成果必須結(jié)合臨床信息進(jìn)行分

析。

甲型肝炎病毒IgM抗體操作規(guī)程

（SOP文獻(xiàn)）

1.目的

用本試劑盒檢測(cè)人血清或血漿中的抗-HAVIgM,用于甲型肝

炎的初期診斷。

2.檢查原理

本品系用抗人IgM（u鏈）包被的微孔板、甲型肝炎病毒（HAV）

抗原和酣標(biāo)識(shí)抗甲型肝炎病毒（抗-HAV）及其他試劑制成，

應(yīng)用捕捉法原理檢測(cè)人血清或血漿中H勺抗-HAVIgM,用于甲

型肝炎的初期診斷。

3.合用儀器

微量移液器；37℃恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶；

計(jì)時(shí)器；酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長(zhǎng)450nm,參照波長(zhǎng)630nm。

4.樣本規(guī)定

4.1樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)搜集血

液，全血樣本最佳先放置37℃處理2小時(shí)，再將血樣本充足

離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不具

有或很少具有血細(xì)胞。假如為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充足

離心后，最佳再放置室溫2小時(shí)以上。

4.2樣本中具有疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)的成果，高度溶血的樣

本、沒(méi)完全收縮內(nèi)血清樣本或有微生物污染的樣本也許會(huì)引

起錯(cuò)誤的成果。

4.3新鮮的樣本在2?8℃無(wú)菌條件下可保留一周，新鮮樣本

可長(zhǎng)期貯存在-20℃或如下，防止反復(fù)凍融。

5.檢查措施

二步法

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡

30分鐘，同步將洗滌液進(jìn)行1:40倍稀釋。

5.2設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，空白對(duì)照1孔。

5.3加樣：在陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照孔內(nèi)分別加入陽(yáng)性對(duì)照、

陰性對(duì)照50uL其他每孔加待測(cè)血清或血漿50ul（或?qū)⒋?/p>

測(cè)血清或血漿用生理鹽水1:1000稀釋后，加入到反應(yīng)孔內(nèi)）,

蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。

5.4洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液持續(xù)洗滌5

次后，拍干孔內(nèi)液體。

5.5加酶結(jié)合物：取出酶結(jié)合物，充足混勻，每孔加50ul

（空白孔除外），蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。

5.6洗板：同5.4

5.7加底物液：每孔先加底物液A50ul,再加底物液B50al,

混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色15分鐘后，

加終止液50ul,混勻，終止反應(yīng)。

6.參照值（參照范圍）

終止后盡快測(cè)定，波長(zhǎng)450nm,空白孔調(diào)零，測(cè)0D值。假

如選用雙波長(zhǎng)測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公式計(jì)算:

C0V二陰性對(duì)照平均0D值X2.1倍

樣品0D值S/C0V21時(shí)為陽(yáng)性

樣品0D值S/COV<1時(shí)為陰性

注：陰性對(duì)照平均0D值低于或等于0.05,按0.05計(jì)算;

高于0.05時(shí)，按照實(shí)際0D值計(jì)算。

7.檢查成果H勺解釋

7.1陰性成果表明樣本中不具有抗-HAVIgM或抗-HAVIgM

含量低于試劑盒的檢測(cè)范圍。

7.2陽(yáng)性成果表明樣本中具有抗-HAVIgM或產(chǎn)生非特異反

應(yīng)。

7.3樣本的檢查成果與臨床體現(xiàn)不符或存在疑問(wèn)時(shí)應(yīng)采用

合適的措施進(jìn)行確認(rèn)。

7.4對(duì)于待檢血清或血漿直接進(jìn)行50ul加樣，成果判為陽(yáng)

性的標(biāo)本，應(yīng)對(duì)其用生理鹽水1:1000稀釋后反復(fù)試驗(yàn)并鑒

定成果。

8.注意事項(xiàng)

8.1本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢測(cè)

成果作為診斷指標(biāo)之一。

8.2使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘

后，方可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保留，備

用。

8.3成果鑒定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

8.4封孔膠片不得反復(fù)使用。

8.5在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試

驗(yàn)成果。

8.6試劑盒在有效期內(nèi)使用，不一樣批號(hào)不得混用。

8.7保證樣本加樣量的精確，假如加樣不精確也許會(huì)導(dǎo)致

錯(cuò)誤的試驗(yàn)成果。

8.8使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本；

假如采用滴瓶滴加時(shí)，請(qǐng)將滴瓶中液體搖勻，并棄去2滴后

垂直均速滴加，要防止組分中的液體觸到或?yàn)R到微孔邊緣

上，尤其是酶結(jié)合物。

8.9在操作過(guò)程中應(yīng)盡量防止反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。

8.10精確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。

8.11洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量應(yīng)注意控

制，既防止洗液過(guò)量而溢出，又能充斥反應(yīng)微孔，并常常檢

查加液頭與否堵塞；2洗板機(jī)最佳每次使用前、后沖洗潔凈,

防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。

8.12本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳

染性物質(zhì)，請(qǐng)按有關(guān)試驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。

9.參照文獻(xiàn)

《中國(guó)生物制品規(guī)程》2023年版

丙型肝炎病毒抗體操作規(guī)程（SOP文獻(xiàn)）

1.目日勺

用于血液日勺篩查和臨床丙型肝炎病毒感染日勺輔助診斷

2.檢查原理

本品系用丙型肝炎病毒（HCV）抗原包被口勺微孔板和酶標(biāo)識(shí)

抗人IgG及其他試劑制成，應(yīng)用簡(jiǎn)接酶聯(lián)免疫法原理檢測(cè)人

血清或血漿樣品中的HCV抗體。

3.合用儀器

微量移液器；37℃恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶；

計(jì)時(shí)器；酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長(zhǎng)450nm,參照波長(zhǎng)630nm。

4.樣本規(guī)定

4.1樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正?？谏撞裳夹g(shù)搜集

血液，全血樣本最佳先放置37C處理2小時(shí)，再將血樣本充

足離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不

具有或很少具有血細(xì)胞。假如為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充

足離心后，最佳再放置室溫2小時(shí)以上。

4.2樣本中具有疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)日勺成果，高度溶血的樣

本、沒(méi)完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本也許會(huì)引

起錯(cuò)誤日勺成果。

4.3新鮮的樣本在2~8℃無(wú)菌條件下可保留一周，新鮮樣本

可長(zhǎng)期貯存在-20℃或如下，防止反復(fù)凍融。

5.檢查措施

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡

30分鐘，同步將洗滌液進(jìn)行1:40倍稀釋。

5.2設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，不加樣品稀釋液,

直接加入陽(yáng)性對(duì)照。陰性對(duì)照100U1,另設(shè)空白對(duì)照1孔（只

加底物液及終止液）。

5.3加樣：在其他每孔加先加樣品稀釋液100ul,再加待

檢血清或血漿10ul（空白孔除外），充足混勻，蓋上封孔膠

片，置37℃水浴孵育60分鐘。

5.4洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的I洗滌液持續(xù)洗滌5

次后，拍干孔內(nèi)液體。

5.5加酶結(jié)合物:空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物lOOuL

蓋上封孔膠片，置37C水浴孵育30分鐘。

5.6洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液持續(xù)洗滌5

次后，拍干孔內(nèi)液體。

5.7加底物液：每孔先加底物液A50uL再加底物液B50al,

混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色30分鐘后，

加終止液50uL混勻，終止反應(yīng)。

6.參照值

終止后盡快測(cè)定，波長(zhǎng)450nm,空白孔調(diào)零，測(cè)0D值。假

如選用雙波長(zhǎng)測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公式計(jì)算:

COV二陰性對(duì)照平均0D值X2.1倍

陰性對(duì)照平均0D值低于或等于0.1,按0.1計(jì)算；高于0.1,

按照實(shí)際0D值計(jì)算。

7成果判斷

樣品0D值S/COV^l時(shí)，待測(cè)樣本為陽(yáng)性;

樣品0D值S/COV<1時(shí)，待測(cè)樣本為陰性。

8.注意事項(xiàng)

8.1本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢測(cè)

成果作為診斷指標(biāo)之一。

8.2使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘

后，方可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保留，備

用。

8.3成果鑒定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

8.4封孔膠片不得反復(fù)使用。

8.5在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試

驗(yàn)成果。

8.6試劑盒在有效期內(nèi)使用，不一樣批號(hào)不得混用。

8.7保證樣本加樣量的精確，假如加樣不精確也許會(huì)導(dǎo)致

錯(cuò)誤日勺試驗(yàn)成果。

8.8使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。

8.9在操作過(guò)程中應(yīng)盡量防止反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。

8.10精確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。

8.11洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)H勺加液量應(yīng)注意控

制，既防止洗液過(guò)量而溢出，又能充斥反應(yīng)微孔，并常常檢

查加液頭與否堵塞；2洗板機(jī)最佳每次使用前、后沖洗潔凈,

防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時(shí)所用代I吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。

8.12本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳

染性物質(zhì)，請(qǐng)按有關(guān)試驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。

9,參照文獻(xiàn)

《中國(guó)藥典》2023年版三部

《體外診斷試劑闡明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)食藥監(jiān)械【2023】

240號(hào)）

HIV抗體初篩試驗(yàn)室操作規(guī)程（SOP文獻(xiàn)）

1.檢查目的

檢查人體血清中與否感染HIV病毒

2.檢查原理

本產(chǎn)品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和

“2”（HIV-1和HIV-2）抗原包被的微孔板和酶聯(lián)記日勺HIV-1

和HIV-2抗原及其他試劑構(gòu)成試劑盒，應(yīng)用雙原夾心法原理

檢測(cè)人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒抗體，用于獻(xiàn)血員

及高危人群中人類免疫缺陷病毒的篩查。

3.檢查條件

3.1操作人員對(duì)本試驗(yàn)應(yīng)心中有數(shù)，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程。

3.2洗板機(jī)，酶標(biāo)儀，加樣器必須定期校正。試劑按規(guī)

定保留。

4.標(biāo)本采集

4.1門診病人由檢查科人員無(wú)菌抽取靜脈血2ml分離血

清備用。

4.2住院病人由護(hù)士采血送檢查科。

4.3要防止溶血。

5.設(shè)備和試劑

5.1設(shè)備全自動(dòng)ZDMX型酶標(biāo)洗板機(jī)，MR-96A酶標(biāo)儀。

5.2試劑珠海麗珠試劑股份有限企業(yè)生產(chǎn)的抗HIV診

斷試劑盒。

6.操作措施

6.1試驗(yàn)準(zhǔn)備從冷環(huán)境中取出試劑盒，室溫平衡半小

時(shí)，同步將濃縮洗液用蒸儲(chǔ)水作1:20稀釋備用。

6.2編號(hào)每板應(yīng)設(shè)空白對(duì)照1孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰

性對(duì)照2孔，質(zhì)控1孔。

6.3加樣每孔加入50ul樣品稀釋液，并分別在對(duì)應(yīng)孔

中加入待測(cè)樣品或陰、陽(yáng)對(duì)照、質(zhì)控品50ul?？瞻卓變?nèi)只加

稀釋液。

6.4溫育用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

6.5加酶除空白對(duì)照孔外，每孔加50ul酶標(biāo)識(shí)物，輕

輕震動(dòng)混勻，用封板膜將板孔封好，置37℃溫育30分鐘。

6.6洗板小心將封板膜揭掉，選擇6次的程序洗板，

最終排干。

6.7顯色每孔先加顯色劑A再加顯色劑B各50ul,