CNAS-CL03-A001

能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則

在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明

(征求意見稿)

GuidanceontheApplicationofAccreditation

CriteriaforProficiencyTestingProvidersinthe

FieldofMicrobiology

中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)

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1范圍

本文件主要適用于食品、飲用水、飼料、化妝品、環(huán)境樣品、玩具、紡織品、

衛(wèi)生用品、消毒產(chǎn)品、抗菌材料等非醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域微生物能力驗(yàn)證提供者的認(rèn)可

活動(dòng)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日

期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件

GB/T27405實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢驗(yàn)

GB/T28043利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)進(jìn)行能力驗(yàn)證的統(tǒng)計(jì)方法（ISO13528,

IDT）

GB/T6379測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度和精密度）（ISO5725,IDT）

SN/T1800食品與動(dòng)物飼料微生物學(xué)微生物計(jì)數(shù)水平法30℃時(shí)的菌落計(jì)

數(shù)方法(ISO4833,IDT)

ISO/TS22117食品和動(dòng)物飼料微生物能力驗(yàn)證特定要求和指南

(Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Specificrequirementsand

guidanceforproficiencytestingbyinterlaboratorycomparison)

CNAS-CL01檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則

3術(shù)語(yǔ)和定義

3.1目標(biāo)微生物targetmicroorganism

能力驗(yàn)證樣品中作為指定分析物的微生物。

3.2背景菌群backgroundflora

能力驗(yàn)證樣品中與目標(biāo)微生物競(jìng)爭(zhēng)或相似的微生物。

3.3標(biāo)準(zhǔn)菌株referencestrain

至少定義到屬或種水平的菌株，按其特征分類和描述，有明確的來(lái)源（GB/T

27405）。

3.4檢出限limitofdetermination

進(jìn)行定性微生物檢測(cè)時(shí)，能檢測(cè)到但無(wú)法給出精確數(shù)值的微生物的最小量

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（GB/T27405）。

4技術(shù)要求

4.1總則

微生物能力驗(yàn)證提供者或其分包方，應(yīng)具有相應(yīng)微生物項(xiàng)目的檢測(cè)能力，且

滿足CNAS-CL01要求。

4.2人員

4.2.1無(wú)論樣品制備和樣品檢測(cè)是否分包，從事能力驗(yàn)證策劃、樣品制備、能力

評(píng)定崗位的關(guān)鍵技術(shù)人員要具有微生物樣品制備和檢測(cè)的技術(shù)能力。

4.2.2授權(quán)簽字人應(yīng)具備微生物學(xué)相關(guān)專業(yè)碩士研究生以上學(xué)歷，組織實(shí)施過(guò)3

次以上微生物實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)工作經(jīng)歷，中級(jí)以上（含中級(jí)）技術(shù)職稱。如果不滿

足以上學(xué)歷或職稱要求應(yīng)具備以下條件：

a)大專畢業(yè)后，從事專業(yè)技術(shù)工作7年以上；或

b)大學(xué)本科畢業(yè)，從事相關(guān)專業(yè)5年以上；或

c)碩士學(xué)位以上（含），從事相關(guān)專業(yè)2年以上

4.2.6人員培訓(xùn)和持續(xù)教育計(jì)劃應(yīng)包括微生物能力驗(yàn)證樣品制備、貯存、運(yùn)輸、

生物安全防護(hù)、微生物能力驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)分析和能力評(píng)定等知識(shí)內(nèi)容。

4.3設(shè)備、設(shè)施和環(huán)境

4.3.1涉及病原微生物的樣品制備和處理應(yīng)滿足所開展微生物制樣、檢測(cè)活動(dòng)生

物安全等級(jí)的要求。

4.3.3不同的功能區(qū)域應(yīng)有明確的標(biāo)識(shí)。應(yīng)正確使用與涉及生物安全等級(jí)相對(duì)應(yīng)

的生物危害標(biāo)識(shí)。應(yīng)對(duì)進(jìn)入的人員采取嚴(yán)格控制，并明確微生物能力驗(yàn)證樣品制

備區(qū)、檢測(cè)區(qū)、貯存區(qū)的特定用途和限制措施。

4.3.4樣品制備及貯存環(huán)境條件應(yīng)有明確的規(guī)定和相應(yīng)的監(jiān)控記錄。

4.4能力驗(yàn)證計(jì)劃的設(shè)計(jì)

4.4.1策劃

4.4.1.1開展新能力驗(yàn)證計(jì)劃前通常應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，預(yù)試驗(yàn)應(yīng)考慮微生物樣品的

設(shè)計(jì)和樣品制備的關(guān)鍵環(huán)節(jié)（直接影響能力驗(yàn)證計(jì)劃質(zhì)量的過(guò)程）。

4.4.1.3微生物能力驗(yàn)證方案中應(yīng)包括如下內(nèi)容：

4.4.1.3e）明確目標(biāo)微生物是定性檢測(cè)和/或定量檢測(cè)；

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4.4.1.3f）采用自然樣品還是人工污染樣品，以及樣品的基質(zhì)；

4.4.1.3g）采用人工污染樣品時(shí)，目標(biāo)微生物的來(lái)源和特性，背景菌群的組成，

目標(biāo)微生物和背景菌群的預(yù)期含量/范圍；

4.4.1.3i）能力驗(yàn)證樣品分發(fā)的特殊要求，如確保低溫和生物安全防護(hù)措施。穩(wěn)

定性試驗(yàn)的信息可用于選擇最佳的條件來(lái)分發(fā)樣品，比如是否需要使用干冰或冰

袋在樣品運(yùn)輸過(guò)程中來(lái)降溫，或判斷環(huán)境條件能否接受。

制備人工污染樣品時(shí)，對(duì)目標(biāo)微生物和背景菌群的要求：

——目標(biāo)微生物的來(lái)源和獲取途徑應(yīng)形成文件。目標(biāo)微生物應(yīng)使用來(lái)自有資

質(zhì)的菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的標(biāo)準(zhǔn)菌株，適用時(shí)，也可根據(jù)能力驗(yàn)證的目的使用經(jīng)過(guò)

鑒定和確認(rèn)的野生菌株。

——在使用前應(yīng)確認(rèn)目標(biāo)微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗(yàn)證的目標(biāo)采用適當(dāng)?shù)?/p>

標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法（如ISO標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)標(biāo)或行標(biāo)）進(jìn)行確認(rèn)。

——用于模擬背景菌群的菌株，其特性也應(yīng)經(jīng)過(guò)鑒定和確認(rèn)。

——能力驗(yàn)證樣品中存在背景菌群尤其是疑似目標(biāo)微生物時(shí)，提供者應(yīng)考

慮背菌群對(duì)目標(biāo)微生物檢測(cè)的影響，應(yīng)通過(guò)確認(rèn)試驗(yàn)保證樣品指定值的準(zhǔn)確可

靠。

4.4.1.3j）有防止串通或偽造結(jié)果的措施，如多水平、多樣本設(shè)計(jì)，參加者返回

分離到的目標(biāo)微生物等；

4.4.1.3u）病原性微生物樣品破損或泄露時(shí)應(yīng)采取的無(wú)害化處理方式。

4.4.1.5b）識(shí)別出制備均勻性和穩(wěn)定性滿足能力驗(yàn)證要求的微生物樣品的關(guān)鍵步

驟和主要問(wèn)題，以及解決這些問(wèn)題的措施。

4.4.2能力驗(yàn)證物品的制備

4.4.2.2應(yīng)建立微生物能力驗(yàn)證樣品的制備、貯存、處置的程序，包括檢畢樣品

和剩余樣品的處理。制備過(guò)程記錄內(nèi)容應(yīng)包括：

——能力驗(yàn)證樣品目標(biāo)菌、背景菌和所用的基質(zhì)及處理方式；——能力驗(yàn)

證樣品目標(biāo)菌和背景菌的確認(rèn)記錄；

——添加（污染）微生物的記錄；

——樣品制備的主要儀器設(shè)備名稱；

——制備工藝（樣品為凍干粉時(shí)應(yīng)包括冷凍干燥記錄）；

——樣品的數(shù)量（要考慮完成結(jié)果評(píng)價(jià)之后，參加者對(duì)能力驗(yàn)證樣品穩(wěn)定

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性質(zhì)疑時(shí)，自行復(fù)查或共同復(fù)查時(shí)對(duì)樣品的需求）；

——樣品制備環(huán)境監(jiān)測(cè)記錄；

——消毒滅菌記錄。

4.4.2.3當(dāng)自然樣品無(wú)法滿足能力驗(yàn)證目標(biāo)和目的要求時(shí)，應(yīng)采用人工污染樣品。

人工污染樣品中的目標(biāo)微生物和背景菌等應(yīng)盡可能與日常檢測(cè)樣品相似；設(shè)計(jì)目

標(biāo)微生物水平應(yīng)考慮微生物的方法檢出限和在同類樣品中微生物常規(guī)檢出水平；

當(dāng)目標(biāo)微生物是致病菌時(shí)，應(yīng)考慮對(duì)人體健康的危害水平和安全標(biāo)準(zhǔn)中微生物的

限量水平。

注：在定性計(jì)劃中設(shè)定目標(biāo)微生物方法檢出限時(shí)，由于微生物本身的特性和添加的技術(shù)

手段的局限性，目標(biāo)微生物水平通常設(shè)定在略高于常規(guī)方法的檢出限，以有利于準(zhǔn)確考察參

加者的能力。如果目標(biāo)微生物水平設(shè)定過(guò)高，不利于完整考察實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力，尤其是在

篩選、選擇分離和鑒定階段的能力。

定量計(jì)劃設(shè)定目標(biāo)微生物添加水平要考慮標(biāo)準(zhǔn)中的限量要求。必要時(shí)，考慮

采用同樣或相似的基質(zhì)。

4.4.3均勻性和穩(wěn)定性

4.4.3.1對(duì)定量和定性能力驗(yàn)證樣品，應(yīng)建立均勻性和穩(wěn)定性判定原則（附錄

A）。

——定量計(jì)劃：應(yīng)針對(duì)樣品中的微生物水平，采用適當(dāng)?shù)脑u(píng)定方法進(jìn)行均勻

性和穩(wěn)定性評(píng)定；均勻性評(píng)定可基于重復(fù)性條件下樣品間變異和樣品內(nèi)變異進(jìn)行

評(píng)定。

——定性計(jì)劃：適用時(shí)，采用目標(biāo)微生物和背景菌群計(jì)數(shù)來(lái)進(jìn)行均勻性和穩(wěn)

定性評(píng)定。

4.4.3.4微生物能力驗(yàn)證樣品應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)定。必要時(shí)，應(yīng)將穩(wěn)定性量化，并

考慮作為能力驗(yàn)證樣品指定值測(cè)量不確定度的補(bǔ)充分量，在能力評(píng)定中予以考

慮。穩(wěn)定性評(píng)定應(yīng)考慮貯存和運(yùn)輸期間的穩(wěn)定性：

——貯存穩(wěn)定性評(píng)定。穩(wěn)定性期限應(yīng)是從樣品制備起至規(guī)定的檢測(cè)日期或檢

測(cè)時(shí)段。應(yīng)在貯存期間定期核查低溫下（如－70℃、－18℃、4℃）貯存的樣品。

檢測(cè)時(shí)間間隔及頻次取決于已知的穩(wěn)定性信息和要求的穩(wěn)定時(shí)間。

——運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)定。應(yīng)確保樣品在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定，可通過(guò)模擬運(yùn)輸條

件或利用加速試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。要考慮到惡劣運(yùn)輸情況下或極限溫度運(yùn)輸

情況的穩(wěn)定性。必要時(shí)，在每個(gè)樣品包裝盒中放入溫度記錄器，記錄樣品在運(yùn)輸

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過(guò)程中的溫度變化。

4.4.4統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)

4.4.4.3統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)方案中，可包括以下內(nèi)容：

4.4.4.3a）統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)應(yīng)考慮微生物的水平和分布，同時(shí)應(yīng)考慮參加者的數(shù)量和不

同檢測(cè)方法上可能存在的差異。

注1：開展過(guò)多輪次定量微生物能力驗(yàn)證計(jì)劃的提供者，可使用經(jīng)驗(yàn)值作為能力評(píng)定標(biāo)

準(zhǔn)差來(lái)評(píng)價(jià)參加者的能力。

注2:通常最大可能數(shù)（mostprobablenumber,MPN）計(jì)數(shù)方法和平板菌落計(jì)數(shù)方法具

有不同的重復(fù)性。在同一定量計(jì)劃中，如兩種方法的重復(fù)性差異較大影響能力評(píng)定，需考慮

分開進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)。即使采用同一標(biāo)準(zhǔn)方法，以下因素也會(huì)影響計(jì)數(shù)結(jié)果：復(fù)蘇方法、平板

技術(shù)（如傾倒平板和螺旋加樣）、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度等。

注3:定性微生物能力驗(yàn)證計(jì)劃通常直接將參加者結(jié)果與指定值進(jìn)行比較，兩者相同能

力評(píng)價(jià)視為滿意，不相同視為不滿意。

4.4.4.3e）用于確定能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差（標(biāo)準(zhǔn)偏差、標(biāo)準(zhǔn)化四分位距、經(jīng)驗(yàn)值、方

法中給定的精密度或先期能力驗(yàn)證獲得的統(tǒng)計(jì)結(jié)果等）或其它評(píng)定準(zhǔn)則的程序；

4.4.5指定值

4.4.5.1提供者應(yīng)將確定微生物定性和定量計(jì)劃指定值（平均值、中位值、穩(wěn)健

平均值等）的程序形成文件，包括確定的原因。

4.5方法或程序的選擇

4.5.2若允許參加者使用自己選擇的方法，能力驗(yàn)證提供者應(yīng)：

a)適用時(shí)，制定政策并按程序?qū)Σ煌淼姆椒ǖ玫降慕Y(jié)果進(jìn)行比對(duì)。

4.6能力驗(yàn)證計(jì)劃的運(yùn)作

4.6.1給參加者的指導(dǎo)

4.6.1.2b）給參加者的指導(dǎo)書應(yīng)包括以下內(nèi)容：微生物的添加（污染）方式，

能力驗(yàn)證樣品基質(zhì)類型及其主要成份。如果樣品基質(zhì)含有抑制微生物復(fù)蘇的成分

（某些基質(zhì)材料能結(jié)合和滯留細(xì)胞，如脂性材料），或具有殺菌或抑菌性能，應(yīng)

在作業(yè)指導(dǎo)書中說(shuō)明。

4.6.1.2d)對(duì)于病原微生物能力驗(yàn)證計(jì)劃，提供者應(yīng)有文件化的政策，告知參加

者注意風(fēng)險(xiǎn)并確保給出相關(guān)安全建議。

4.6.3能力驗(yàn)證樣品的包裝、標(biāo)識(shí)和分發(fā)

4.6.3.1提供者應(yīng)控制微生物樣品的包裝，確保符合國(guó)家、地區(qū)或國(guó)際的安全和

運(yùn)輸要求，如符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》和國(guó)際航空運(yùn)輸協(xié)會(huì)

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（IATA）的航空要求。

4.7數(shù)據(jù)分析和能力驗(yàn)證計(jì)劃結(jié)果的評(píng)價(jià)

4.8報(bào)告

4.9與參加者的溝通

4.10保密

5管理要求

5.1組織

5.1.2涉及病原微生物的能力驗(yàn)證提供者，應(yīng)符合相應(yīng)國(guó)家、行業(yè)、地方的生物

安全標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定等。

5.1.5h）涉及病原微生物的能力驗(yàn)證提供者，應(yīng)設(shè)置生物安全責(zé)任人和生物安全

監(jiān)督員，負(fù)責(zé)生物安全。

5.2管理體系

5.2.1適用時(shí)，能力驗(yàn)證提供者應(yīng)制定病原微生物安全規(guī)章制度，確保生物安全。

5.3文件控制

5.3.2.2適用時(shí)，文件控制程序應(yīng)包括基于病原微生物安全考慮的現(xiàn)場(chǎng)文件的管

理。

5.4要求、標(biāo)書和合同的評(píng)審

5.5分包服務(wù)

5.5.1分包方也要符合該應(yīng)用說(shuō)明的要求。如微生物樣品制備分包，分包方應(yīng)提

供樣品制備的詳細(xì)記錄，見4.4.2.2能力驗(yàn)證樣品的制備過(guò)程記錄。制備樣品所

用的菌種要符合5.6服務(wù)和供應(yīng)品的采購(gòu)。

5.6服務(wù)和供應(yīng)品的采購(gòu)

5.6.2菌種的采購(gòu)和驗(yàn)收要符合如下要求：

——目標(biāo)微生物通常選用有資質(zhì)的菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的菌株，也可根據(jù)能力

驗(yàn)證的目的使用經(jīng)過(guò)鑒定和確認(rèn)的野生菌株。

——使用前應(yīng)確認(rèn)目標(biāo)微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗(yàn)證的目標(biāo)采用適當(dāng)?shù)臉?biāo)

準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（如ISO標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)標(biāo)或行標(biāo)）進(jìn)行確認(rèn)。當(dāng)采用野生菌株時(shí)，還應(yīng)

對(duì)其分類學(xué)地位進(jìn)行鑒定。

——用于模擬背景菌群的任何菌株，其特性也應(yīng)經(jīng)過(guò)鑒定和確認(rèn)。

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5.7服務(wù)客戶

5.7.1當(dāng)客戶對(duì)微生物能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性有疑問(wèn)時(shí)，提供者應(yīng)積極

與客戶合作。必要時(shí)，提供盡可能詳盡的材料（包括需要分包方提供的材料等）。

5.8投訴和申訴

5.9不符合工作的控制

5.10改進(jìn)

5.11糾正措施

5.12預(yù)防措施

5.13記錄的控制

5.13.1.2適用時(shí)，記錄控制程序應(yīng)包括基于病原微生物安全考慮的質(zhì)量/技術(shù)記

錄的管理。

5.14內(nèi)部審核

5.14.1適用時(shí)，內(nèi)部審核應(yīng)涵蓋能力驗(yàn)證提供者病原微生物安全的內(nèi)容。

5.15管理評(píng)審

5.15.1適用時(shí)，評(píng)審應(yīng)考慮到生物安全規(guī)章制度的執(zhí)行情況。

附錄A(資料性附錄)

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均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)

A.1定量計(jì)劃

A.1.1均勻性檢驗(yàn)

通常從微生物能力驗(yàn)證樣品總體中隨機(jī)抽取10個(gè)或10個(gè)以上樣品進(jìn)行均

勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下至少測(cè)試兩次。將測(cè)試數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為以10為底

的對(duì)數(shù)值后進(jìn)行均勻性評(píng)價(jià)。

微生物水平較高時(shí)，可使用單因子方差分析和Ss0.3準(zhǔn)則（Ss為樣品間

標(biāo)準(zhǔn)差,為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差）進(jìn)行評(píng)價(jià)（GB/T28043）。當(dāng)開展一項(xiàng)新的能力

驗(yàn)證計(jì)劃時(shí)，通常未知，可用單因子方差分析初步評(píng)價(jià)樣品的均勻性。通常在

參加者結(jié)果回報(bào)后獲得時(shí)應(yīng)再次利用Ss0.3確認(rèn)樣品是否均勻。如已知，

比如根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值或先期同類能力驗(yàn)證計(jì)劃獲得的值，可利用Ss0.3進(jìn)行評(píng)

價(jià)。

當(dāng)微生物水平較低時(shí)，樣品間微生物計(jì)數(shù)差異可能會(huì)比較大，可能不滿足

Ss0.3的要求，在后續(xù)評(píng)價(jià)參加者能力時(shí)可考慮在能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差中加入樣

品間差異這一分量。當(dāng)微生物水平非常低時(shí)（如10CFU/g），通常不宜作為定

量能力驗(yàn)證樣品進(jìn)行分發(fā)。

A.1.1.1單因子方差分析

為檢驗(yàn)樣品的均勻性，抽取i個(gè)樣品(i=1、2、……m)，每個(gè)樣在重復(fù)條件

下測(cè)試j次（j=1、2、……n）。

n

xixij/ni

每個(gè)樣品的測(cè)試平均值j1

m

xxi/m

全部樣品測(cè)試的總平均值i1

m

Nni

測(cè)試總次數(shù)i1

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第9頁(yè)共21頁(yè)

mSS

21

SS1ni(xix)MS1

樣品間平方和i1均方f1

mniSS

22

SS2(xijxi)MS2

樣品內(nèi)平方和i1j1均方f2

自由度n1m1n2Nm

MS

F1

統(tǒng)計(jì)量MS2

nn

若F＜自由度（1，2）及給定顯著性水平（通常=0.05）的臨界值

查表F分布表，則表明樣品內(nèi)樣品間無(wú)顯著差異，樣品是均勻的。

F(n1,n2)(1)

表1F分布表

P{F(n1,n2)F(n1,n2)}0.05

891011121314151617181920

n1

n2

93.233.183.143.103.073.053.033.012.992.972.962.952.94

103.073.022.982.942.912.892.862.852.832.812.802.792.77

112.952.902.852.822.792.762.742.722.702.692.672.662.65

122.852.802.752.722.692.662.642.622.602.582.572.562.54

132.772.712.672.632.602.582.552.532.512.502.482.472.46

142.702.652.602.572.532.512.482.462.442.432.412.402.39

152.642.592.542.512.482.452.422.402.382.372.352.342.33

162.592.542.492.462.422.402.372.352.332.322.302.292.28

172.552.492.452.412.382.352.332.312.292.272.262.242.23

182.512.462.412.372.342.312.292.272.252.232.222.202.19

192.482.422.382.342.312.282.262.232.212.202.182.172.16

202.452.392.352.312.282.252.232.202.182.172.152.142.12

（摘自GB4086.4-1983統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表F分布）

A.1.1.2Ss0.3準(zhǔn)則

從能力驗(yàn)證計(jì)劃制備的樣品中隨機(jī)抽取(i=1、2、……m)，每個(gè)樣品在重復(fù)

MSMS

性條件下測(cè)試j次（j=1、2、……n）。按A.1.1.1計(jì)算1、2。

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第10頁(yè)共21頁(yè)

若每個(gè)樣品的重復(fù)測(cè)試次數(shù)均為n次。按下式計(jì)算樣品之間的不均勻性標(biāo)準(zhǔn)

偏差Ss：

Ss(MS1MS2)/n

式中：MS1—樣品間均方；

MS2—樣品內(nèi)均方；

n—測(cè)量次數(shù)。

若Ss0.3，則使用的樣品可以認(rèn)為是均勻的。

A.1.2穩(wěn)定性檢驗(yàn)

通常從微生物能力驗(yàn)證樣品總體中隨機(jī)抽取足夠具有代表性的品進(jìn)行穩(wěn)定

性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下至少測(cè)試兩次。將測(cè)試數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為以10為底的

對(duì)數(shù)值后進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。

A.1.2.1t檢驗(yàn)法

按下式計(jì)算t值：

x2x1

t

(n1)s2(n1)s2nn

112212

n1n22n1n2

式中：x1—第一次測(cè)試數(shù)據(jù)的平均值；

x2—第二次測(cè)試數(shù)據(jù)的平均值；

s1—第一次測(cè)試數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；

s2—第二次測(cè)試數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；

n1—第一次測(cè)試次數(shù)；

n2—第二次測(cè)試次數(shù)

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第11頁(yè)共21頁(yè)

注：為了保證平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的準(zhǔn)確度，n1和n2均≥6。

tn1n22

若＜顯著性水平（通常=0.05）自由度為的臨界值t(nn2（)查

212

表2t分布表），則兩個(gè)平均值之間無(wú)顯著差異，表明樣品是穩(wěn)定的。

表2t分布表

P{t(n)t(n)}0.025（單側(cè)檢驗(yàn)）

自由度10111213141516171819

臨界值2.22812.20102.17882.16042.14482.13152.11992.10982.10092.0930

自由度20212223242526272829

臨界值2.08602.07962.07392.06872.06392.05952.05552.05182.04842.0452

自由度30313233343536373839

臨界值2.04232.03952.03692.03452.03222.03012.02812.02622.02442.0227

（摘自GB4086.3-1983統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表t分布）

xy0.3

A.1.2.2準(zhǔn)則

xy0.3

若成立，則認(rèn)為樣品是穩(wěn)定的。

式中：x1—均勻性檢驗(yàn)的總平均值

y—穩(wěn)定性檢驗(yàn)的測(cè)試平均值。

注：取樣數(shù)≥3，每次單獨(dú)取樣。測(cè)試方法與均勻性檢驗(yàn)相同。

A.2定性計(jì)劃

對(duì)于定性計(jì)劃樣品的均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)，其取樣和測(cè)試程序基本上和定量

計(jì)劃相同，通常核查測(cè)試結(jié)果是否和樣品制備時(shí)指定值一致，如一致可判定樣品

滿足要求，如不一致可判定為不滿足要求，需核查原因或重新制樣。另外，也可

利用以上定量計(jì)劃的評(píng)定準(zhǔn)則，采用目標(biāo)微生物和背景菌群計(jì)數(shù)來(lái)進(jìn)行均勻性和

穩(wěn)定性評(píng)定。

附錄B(資料性附錄)

統(tǒng)計(jì)分析和能力評(píng)定

B.1指定值和能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差的確定

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第12頁(yè)共21頁(yè)

對(duì)于微生物定量計(jì)劃，確定指定值最常用的方法是利用參加者的公議值來(lái)確

定，由所有參加者結(jié)果的穩(wěn)健平均值或中位值給出。能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差的確定有多

種方法，如標(biāo)準(zhǔn)偏差、標(biāo)準(zhǔn)化四分位距、經(jīng)驗(yàn)值或先期能力驗(yàn)證獲得的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

等。

對(duì)于定性計(jì)劃，指定值通常由能力驗(yàn)證提供者在樣品制備時(shí)確定。參加者結(jié)

果和指定值（陽(yáng)性/陰性）一致即為滿意，不一致即為不滿意。

B.2能力評(píng)定

微生物水平較高的定量計(jì)劃，參加者結(jié)果通常呈對(duì)數(shù)正態(tài)分布或近似對(duì)數(shù)正

態(tài)分布?？蓪⒓诱呓Y(jié)果轉(zhuǎn)換為以10為底的對(duì)數(shù)值后，通過(guò)計(jì)算統(tǒng)計(jì)量：Z值、

臨界值（CD值）、中位值±0.5來(lái)評(píng)定參加者的能力。

如參加者使用的是MPN計(jì)數(shù)方法，應(yīng)考慮和平板計(jì)數(shù)法的方法差異，可采

用經(jīng)驗(yàn)值進(jìn)行能力評(píng)定。

當(dāng)樣品中微生物水平較低時(shí)，如參加者結(jié)果（對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后）呈現(xiàn)非正態(tài)分布，

應(yīng)謹(jǐn)慎評(píng)定參加者的能力。

B.2.1利用Z值評(píng)定

Z值是參加者結(jié)果和指定值的差值與能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差的比值。該值絕對(duì)值

大小表示了參加者果與指定值的偏離程度，Z的“＋”與“－”表示偏離的方向。

Z值計(jì)算公式如下：

xX

z

其中x為參加的結(jié)果，X為指定值,能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。

應(yīng)用Z值評(píng)定準(zhǔn)則如下：

——|z|2.0滿意

——2.0|z|3.0有問(wèn)題

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第13頁(yè)共21頁(yè)

——|z|3.0不滿意

B.2.2利用臨界值（CD值）評(píng)定

當(dāng)參加者使用的測(cè)試方法有可靠的重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R時(shí),可根據(jù)GB/T

6379，按下式計(jì)算CD值：

1n1

CDR2r2()

2n

參加者在重復(fù)條件下n次測(cè)試的平均值x與指定值X之差|xX|小于臨界

值CD值，則參加者的結(jié)果為滿意結(jié)果，否則為不滿意結(jié)果。

注：重復(fù)性限r(nóng)2.8r，再現(xiàn)性限為R2.8R，r為測(cè)試方法的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差，R

為測(cè)試方法的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差。根據(jù)ISO4833，常規(guī)30℃需氧培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基上的菌落計(jì)

數(shù)，其方法重復(fù)性限r(nóng)為0.25，再現(xiàn)性限R為0.45，計(jì)算CD值約為0.29。

B.2.3利用中位值±0.5評(píng)定

通常，微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制要求重復(fù)計(jì)數(shù)不超過(guò)0.5對(duì)數(shù)單位，符合該要

求表明質(zhì)量控制良好。當(dāng)參加者使用的是平板菌落計(jì)數(shù)方法時(shí)，圍繞平均菌落計(jì)

數(shù)值的95%置信區(qū)間通常不超出±0.5對(duì)數(shù)單位。將這一質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)引入定量

微生物能力驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)，參加者結(jié)果在對(duì)數(shù)中位值±0.5范圍內(nèi)可認(rèn)為是滿意

結(jié)果（ISO/TS22117)。能力評(píng)定準(zhǔn)則如下：

——結(jié)果不超出對(duì)數(shù)中位值±0.5范圍：滿意

——結(jié)果落在對(duì)數(shù)中位值±0.5范圍外：不滿意

B.2.4MPN計(jì)數(shù)方法的結(jié)果評(píng)定

如果參加者使用的是MPN計(jì)數(shù)方法，對(duì)其結(jié)果評(píng)定應(yīng)考慮MPN方法重復(fù)

性。經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：對(duì)于3×3管方法，MPN結(jié)果對(duì)數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)差約為0.32；

對(duì)于3×5管方法，MPN結(jié)果對(duì)數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)差約為0.24。

在理想情況下，95%的結(jié)果將會(huì)落在指定值±2以內(nèi)，而超過(guò)99%的結(jié)果

會(huì)落在指定值±3以內(nèi)，為標(biāo)準(zhǔn)差。然而，實(shí)踐中仍存在實(shí)驗(yàn)室間變異。大

量分析數(shù)據(jù)顯示方差會(huì)擴(kuò)增至約2.5倍（因而標(biāo)準(zhǔn)差擴(kuò)增1.58倍），因此參加者

MPN計(jì)數(shù)結(jié)果的接受限應(yīng)增加到±3和±5（ISO/TS22117)。MPN對(duì)數(shù)值

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第14頁(yè)共21頁(yè)

接受限見表3。

表3MPN對(duì)數(shù)值接受限

接受限3×3管法3×5管法

±3±0.96±0.72

±5±1.60±1.20

MPN計(jì)數(shù)方法結(jié)果評(píng)定準(zhǔn)則如下：

——在指定值±3（含邊界）范圍內(nèi)：滿意

——在指定值±3和指定值±5（不含邊界）范圍內(nèi)：有疑問(wèn)

——在指定值±5（含邊界）范圍外：不滿意

注：隨著參加者對(duì)MPN計(jì)數(shù)方法的逐漸熟練和參加者總體水平的提高，參加者M(jìn)PN計(jì)數(shù)值

之間的變異會(huì)逐漸減小，趨近于方法本身的變異，評(píng)價(jià)參加者結(jié)果的MPN對(duì)數(shù)值接受限可根

據(jù)實(shí)際情況縮小。如英格蘭衛(wèi)生局經(jīng)過(guò)兩年多輪次能力驗(yàn)證計(jì)劃運(yùn)作之后，將參加者M(jìn)PN對(duì)

數(shù)值接受限分別縮小至±2.68和±4。

附錄C(資料性附錄)

微生物能力驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)分析示例

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第15頁(yè)共21頁(yè)

以某次乳粉中菌落總數(shù)測(cè)定能力驗(yàn)證為例。參加者使用的測(cè)試方法為ISO

4833菌落計(jì)數(shù)方法。

C.1均勻性檢驗(yàn)

能力驗(yàn)證樣品（凍干粉）分裝后隨機(jī)抽取10個(gè)樣品，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)試2

次，測(cè)定結(jié)果見表4。

表4菌落總數(shù)測(cè)試結(jié)果（CFU/g）

測(cè)試次數(shù)測(cè)試結(jié)果測(cè)試結(jié)果對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值

x1x2x1x2

樣品號(hào)

150000420004.6994.623

253000510004.7244.708

360000540004.7784.732

447000400004.6724.602

550000560004.6994.748

643000510004.6334.708

745000480004.6534.681

846000520004.6634.716

948000470004.6814.672

1043000500004.6994.623

總平均值4.685

單因子方差分析結(jié)果見表5。

表5方差分析結(jié)果

方差來(lái)源自由度平方和均方

F

樣品間90.0230.00251.67

樣品內(nèi)100.0150.0015

F

F臨界值0.05(9,10)=3.02。計(jì)算的F值為1.67，該值＜臨界值，這初步表明

在0.05顯著性水平時(shí)，樣品中的細(xì)菌分布是均勻的。

也可利用A.1.1.2Ss0.3準(zhǔn)則，計(jì)算樣品之間的不均勻性標(biāo)準(zhǔn)偏差Ss為

0.022。以經(jīng)驗(yàn)值0.25為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差，0.3為0.075，滿足Ss0.3準(zhǔn)則的

要求，可判斷樣品中的細(xì)菌分布是均勻的。

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第16頁(yè)共21頁(yè)

C.2穩(wěn)定性檢驗(yàn)

從總體樣品中隨機(jī)抽取5瓶進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)，將其均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)作為穩(wěn)定

性檢驗(yàn)的第一次測(cè)試數(shù)據(jù)。模擬運(yùn)輸條件放置30天后進(jìn)行第二次測(cè)試。每個(gè)樣

品在重復(fù)條件下測(cè)試兩次。測(cè)試結(jié)果見表6。

表6模擬運(yùn)輸條件放置30天后測(cè)試結(jié)果（CFU/g）

測(cè)試結(jié)果

樣品號(hào)

第1次第2次第1次對(duì)數(shù)值第2次對(duì)數(shù)值

142000440004.6234.643

248000500004.6814.699

345000500004.6534.699

451000490004.7084.690

556000530004.7484.724

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表7。

表7t檢驗(yàn)分析結(jié)果

ss

x1x212n1n2t

4.6854.6870.0450.03820100.12

t

在0.05顯著水平下，自由度為28的臨界值0.05(28)為2.05。根據(jù)A.1.2.1公

式計(jì)算t值為0.12，小于臨界值。第2次檢測(cè)值與第1次檢測(cè)值無(wú)顯著差異，說(shuō)

明樣品中細(xì)菌是穩(wěn)定存活的。

xy0.3

也可利用A.1.2.2準(zhǔn)則，計(jì)算均勻性檢驗(yàn)和穩(wěn)定性檢驗(yàn)總平均

xx

值的差值12為0.002。以經(jīng)驗(yàn)值0.25為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差，0.3為0.075，

xy0.3

滿足準(zhǔn)則的要求，可判斷樣品中的細(xì)菌是穩(wěn)定存活的。

C.3結(jié)果統(tǒng)計(jì)和能力評(píng)定

共有25家參加實(shí)驗(yàn)室提交了測(cè)試結(jié)果，參加者結(jié)果及能力評(píng)定見表8。

表8參加者結(jié)果及能力評(píng)定

參加實(shí)驗(yàn)參加實(shí)驗(yàn)室對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換Z值利用CD值對(duì)數(shù)中位值±

2019年XX月XX日發(fā)布2019年XX月XX日實(shí)施

CNAS-CL03-A001第17頁(yè)共21頁(yè)

室代碼結(jié)果值|xX|＜0.290.5規(guī)則

CFU/g

1710004.8511.45滿意滿意

2550004.7400.64滿意滿意

3420004.623-0.22滿意滿意

41800005.2554.39§不滿意不滿意

5430004.633-0.15滿意滿意

6280004.447-1.50滿意滿意

7410004.613-0.29滿意滿意

8500004.6990.34滿意滿意

9310004.491-1.18滿意滿意

10520004.7160.46滿意滿意