WSWS/T805—2022BasictechnicalstandardforclinicalmicrobiologylaboratoryWS/T805—2022I 2 3 4 4 5 8 WS/T805—2022本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院、中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院、北京醫(yī)院/國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、北京大學(xué)人民醫(yī)院、安徽省立本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：沈定霞、孫自鏞、胡繼紅、徐英春、胡云建、王輝、馬筱玲、簡(jiǎn)WS/T805—20221臨床微生物檢驗(yàn)基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)將目標(biāo)微生物轉(zhuǎn)移至適于生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基或活的生物體內(nèi)的方法。熒光淬滅fluorescencequWS/T805—2022），4無(wú)菌操作及消毒滅菌技術(shù)要求4.1無(wú)菌操作技術(shù)要求c)用于微生物培養(yǎng)的各類培養(yǎng)基在使用d)接種標(biāo)本或轉(zhuǎn)種菌株應(yīng)將接種環(huán)（針）加熱滅菌，或使用一）；4.2消毒滅菌技術(shù)要求紫外燈的數(shù)量≥1.5W/m3，照射時(shí)間≥30min。無(wú)人狀態(tài)下，紫外燈消毒：紫外燈輻照強(qiáng)下，采用循環(huán)風(fēng)紫外線空氣消毒器或靜電//培養(yǎng)基經(jīng)煮沸10min；SS培養(yǎng)基煮沸1//WS/T805—202235.1標(biāo)本處理的技術(shù)要求微生物實(shí)驗(yàn)室根據(jù)標(biāo)本類型、性狀以及目標(biāo)微生物種類進(jìn)行標(biāo)本處理的技術(shù)要求見(jiàn)表對(duì)肉眼所見(jiàn)清亮的體液標(biāo)本，使用普通離心機(jī)離心后取沉淀進(jìn)行接種及涂片；對(duì)腦用細(xì)胞離心機(jī)（1500g～2500g,15min）進(jìn)行甩片離心；進(jìn)行結(jié)核對(duì)塊狀組織標(biāo)本，用無(wú)菌組織研磨器或研缽和杵，加入適量的生理鹽水或營(yíng)養(yǎng)肉湯進(jìn)行研磨。研磨后對(duì)可能存在目標(biāo)菌之外的污染菌的標(biāo)本，進(jìn)行去污染處理。如從痰標(biāo)本中分離軍團(tuán)菌可采用K（難梭菌），可采用與標(biāo)本等量的無(wú)水（或95％）乙醇混合標(biāo)本，室溫（25℃）放置1h，或采用80℃5.2制片的技術(shù)要求養(yǎng)物影響革蘭染色的染色性；3）所形成涂膜的大小通常1cm×2cm，厚度以透過(guò)涂膜能辨認(rèn)報(bào)紙上的文字熱固定時(shí)，載玻片要迅速通過(guò)酒精燈的外焰，來(lái)回3次；利用電熱滅菌器固定時(shí)，不要將載玻片緊貼電WS/T805—20224微生物實(shí)驗(yàn)室常用的染色方法、技術(shù)要求及質(zhì)量控色色新型隱球菌具有厚莢膜，并可見(jiàn)芽生細(xì)a)在油鏡下觀察菌體形態(tài)、排列、染色性，以及細(xì)菌是否在白細(xì)胞內(nèi)或白細(xì)b)將血液及腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本革蘭染色鏡檢結(jié)果作為危急值報(bào)告；對(duì)于痰及氣管抽吸物標(biāo)本宜根據(jù)低倍鏡下鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量及白細(xì)胞數(shù)量判斷是否合格；未離心尿液中，若每個(gè)油鏡視野看到1個(gè)c)若在低倍鏡下發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子，應(yīng)轉(zhuǎn)換至WS/T805—20225a)觀察抗酸染色標(biāo)本時(shí)，要將玻片按一定方向及順序移動(dòng)，做到不漏檢、不重復(fù)。連續(xù)觀察300b）觀察弱抗酸染色標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意盡可能全范圍、多視野進(jìn)行b）KOH濕片：注意觀察真菌結(jié)構(gòu)，如酵母細(xì)胞、菌絲和橫隔等。菌陰性；熒光染色觀察真菌時(shí)，應(yīng)注意具有不同熒光顏色和熒光強(qiáng)度的真菌孢子和菌8.1微生物不同接種方式的技術(shù)要求分三區(qū)（或四區(qū)）劃線，后面一區(qū)劃線的起始處與前一劃線有所重疊，以先將培養(yǎng)基熔化并冷卻至45℃~50℃，再加入一定量標(biāo)本，混勻后傾入滅菌空平板內(nèi)，待凝將標(biāo)本或菌種采用單點(diǎn)或多點(diǎn)接種至平板或斜面培養(yǎng)基表面。同一塊平板上僅6采用自動(dòng)化接種儀進(jìn)行接種時(shí)，需提前對(duì)痰、糞便等黏稠標(biāo)本進(jìn)行液化處理；a）臨床微生物標(biāo)本接種應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行（參見(jiàn)GB19489和WS/T442）。標(biāo)本接種過(guò)程b）實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)盡快接種。如果不能及時(shí)接種，應(yīng)根據(jù)所培養(yǎng)的目標(biāo)細(xì)菌選擇合適的標(biāo)本8.3初次分離用培養(yǎng)基的選擇及接種的技術(shù)要求針對(duì)微生物檢測(cè)項(xiàng)目和標(biāo)本類型，應(yīng)適當(dāng)選擇初次分離用的培養(yǎng)基種類，接種的技術(shù)要求見(jiàn)表表6不同送檢項(xiàng)目和標(biāo)本類型所需的培養(yǎng)基種類與接A,C，腦心浸液或血培養(yǎng)瓶。A，C，增菌肉湯或血培養(yǎng)瓶。A,B,C.A,B,C.等A，無(wú)乳鏈球菌顯色平板，選擇性WS/T805—20228等注：A：血平板；B：中國(guó)藍(lán)/麥康凱平板；C：不加萬(wàn)古霉素巧克力平板生素的沙保弱平板或斜面；CCFA：環(huán)絲氨酸頭孢西9培養(yǎng)技術(shù)要求9.1微生物主要培養(yǎng)方式的技術(shù)要求針對(duì)微生物的主要培養(yǎng)方式，技術(shù)要求（營(yíng)養(yǎng)條件、氣體環(huán)境、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等）見(jiàn)表空氣，含510%22（）；9.2微生物定量培養(yǎng)技術(shù)要求9.2.1尿液定量培養(yǎng)的技術(shù)要求a)采用中段尿、膀胱穿刺尿、導(dǎo)管直接導(dǎo)出的尿液或夾住導(dǎo)尿管遠(yuǎn)端從導(dǎo)尿管穿刺出來(lái)的尿液進(jìn)行定量培養(yǎng)，不可使用導(dǎo)管導(dǎo)出至尿袋中的尿液進(jìn)e)接種好的平板放入含510％的CO2孵箱，35℃±2℃培養(yǎng)24h，觀察并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。若無(wú)菌生長(zhǎng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至48h觀察并計(jì)數(shù)，報(bào)告計(jì)數(shù)單位為每毫升菌落形9.2.2支氣管肺泡灌洗液定量培養(yǎng)的技術(shù)要求b)盡可能將病原菌鑒定到種（或?qū)伲刹捎靡环N或多種鑒定方法。若實(shí)驗(yàn)室不具備對(duì)特殊重要致病菌的鑒定能力，應(yīng)將其送至有能力鑒定的實(shí)驗(yàn)室或所屬的臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)一步WS/T805—20229b）根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色性、手工生化反應(yīng)（如葡萄糖發(fā)酵、氧化酶、觸酶等）c）進(jìn)行生化鑒定試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)挑取純菌落，進(jìn)行觸酶試驗(yàn)時(shí)，不要取到血平板上的瓊脂，進(jìn)d)注意培養(yǎng)時(shí)間對(duì)鑒定試驗(yàn)結(jié)果的影響。如芽管試驗(yàn)因孵育時(shí)間超過(guò)3h，非白念珠菌會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)表8常用手工法鑒定試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)、要化；平板法：將氧化酶試劑直接滴到平板中的挑取純培養(yǎng)物接種蛋白胨液體培養(yǎng)基，于35℃~37℃培養(yǎng)1d~采用紙片法、瓊脂或肉湯培養(yǎng)基法檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)生22℃~25℃培養(yǎng)24h～72h后觀察培養(yǎng)基的顏色變化，或在不），葡萄球菌、微球菌及芽孢桿菌屬為陽(yáng)）：）：），蓋子，菌落面朝上，置35℃±2℃孵育15mi，＜），25℃~30℃培養(yǎng)72h，取生長(zhǎng)的酵母菌涂在載玻片上，蓋上蓋注3：試管法較平板法更為敏感；極個(gè)別肺炎鏈球菌菌株由于失去了莢膜，不被膽鹽溶解；陳舊培c)每一批鑒定卡應(yīng)按要求進(jìn)行質(zhì)控，使用前檢查包裝是否有破損，是a)待鑒定菌的培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)足夠，以滿足其達(dá)到所需的量和菌株生長(zhǎng)狀態(tài)WS/T805—2022血清不凝集，應(yīng)考慮K抗原存在。可將新制成的菌懸液放入沸水浴中加熱15min～30min，冷卻后再次d)注意商品化血清試劑盒的局限性。若不能分等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)，以核酸雜交為核心的基因芯微生物檢測(cè)。用于微生物分子檢測(cè)的技術(shù)類型和特點(diǎn)見(jiàn)表9。分子診斷技術(shù)因其高靈敏性的特點(diǎn)，需要）；b）用于分子檢測(cè)的標(biāo)本宜單獨(dú)送檢，并注意避免污染。不能及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本需要進(jìn)行適當(dāng)保c)對(duì)提取的核酸，宜采取適當(dāng)?shù)姆椒ù_認(rèn)核酸片段的完整性、核酸的產(chǎn)率e)工作結(jié)束后應(yīng)立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔，必要WS/T805—2022），毒素）及真菌｛（1-3）－β-D葡聚糖｝等。各免疫學(xué)方法的檢測(cè)敏感性與技a)選擇適宜的標(biāo)本類型進(jìn)行相關(guān)微生物的免b)設(shè)置與檢測(cè)方法相適應(yīng)的質(zhì)控及對(duì)照；），表10針對(duì)細(xì)菌及真菌進(jìn)行微生物免疫學(xué)檢測(cè)的標(biāo)本類型、檢測(cè)方法a）臨床微生物檢驗(yàn)人員、設(shè)備、設(shè)施、試劑、耗材、環(huán)境等的質(zhì)量和數(shù)量應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定，滿足所提供服務(wù)的需要。PCR實(shí)驗(yàn)室需通過(guò)資質(zhì)認(rèn)證。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的性能驗(yàn)證及質(zhì)量控制，并保存記WS/T805—2022c）應(yīng)定期進(jìn)行人員能力評(píng)估。由多名專業(yè)人員實(shí)施的手工檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)定期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定標(biāo)本接收和拒收標(biāo)準(zhǔn)。拒收時(shí)立即反饋，以便應(yīng)告知臨床醫(yī)生標(biāo)本到達(dá)實(shí)驗(yàn)室至發(fā)出報(bào)告a)未經(jīng)修改的已確認(rèn)的檢驗(yàn)方法（也稱為檢驗(yàn)程序，已確認(rèn)的檢驗(yàn)方法包括經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生管理部門b)經(jīng)修改的已確認(rèn)的檢驗(yàn)方法或?qū)嶒?yàn)室自檢方法，在性能確認(rèn)滿足要求后，方可用于患者標(biāo)本檢對(duì)臨床微生物檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)，需要a)通過(guò)參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或?qū)嶒?yàn)室間比對(duì)活動(dòng)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。不能進(jìn)行室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或b)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)應(yīng)由從事常規(guī)工作的人員使用與患者標(biāo)本相同的檢驗(yàn)方法進(jìn)行。不可與其b）按確定的“危急值”清單，及時(shí)報(bào)告危急值結(jié)果，保留報(bào)告記錄；d）應(yīng)向臨床提供聯(lián)系方式以便其對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)WS/T805—2022WS/T805—2022[1]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局、中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用要求：GB/T22576.1-2臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的要求：GB/T2京：人民衛(wèi)生出版社，2015.[7]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).下呼吸道感染細(xì)菌培養(yǎng)操作指南:WS/