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備案號：DB42Verificationofgenuinenessforsweetpotato—ISSR湖北省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 4本標準主要起草人：楊新筍、王連軍、雷劍、蘇文瑾、柴沙沙、焦春海1甘薯品種真實性鑒定ISSR法2.1聚合酶鏈式反應polymerasechainreaction,是利用單鏈寡核苷酸引物對特異DNA片段進行體外快速擴2.2簡單重復序列區(qū)間inter-simplesequencerepeat,設計出一系列特異引物，通過PCR反應擴增微衛(wèi)星位點間隔的堿基序列20.5μL，ddH2O補充體系至50μL。引物清單見附錄A。將適量的瓊脂糖加入1×TAE緩沖液中，加熱將其溶解，配至50℃-60℃,加入核酸染料，混勻，將其倒入制膠磨具，室溫下凝固成凝膠后，放入TAE緩沖液中。取PCR擴增產物和加樣緩沖液按照5:1比例混勻，點樣，其中一個泳道中加入DNA分子量標準品，接通電源進行電泳。以5V/cm電壓電泳，待溴酚藍距凝膠前緣2cm要時可以增加其他方法佐證。湖北省主栽品種相應指紋圖譜見342000200075050025075050025052000250

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