2025年免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范答案及解析一、單項(xiàng)選擇題1.免疫熒光技術(shù)中，常用的熒光素是（）A.異硫氰酸熒光素B.四甲基異硫氰酸羅丹明C.藻紅蛋白D.以上都是2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）中，最常用的酶是（）A.辣根過氧化物酶B.堿性磷酸酶C.葡萄糖氧化酶D.脲酶3.免疫印跡法（Westernblotting）主要用于檢測(cè)（）A.蛋白質(zhì)B.核酸C.多糖D.細(xì)胞表面抗原4.流式細(xì)胞術(shù)可用于檢測(cè)（）A.細(xì)胞表面標(biāo)志物B.細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子C.細(xì)胞周期D.以上都是5.免疫沉淀試驗(yàn)中，常用的沉淀劑是（）A.硫酸銨B.聚乙二醇C.氯化鈉D.硫酸鈉6.免疫比濁法的原理是（）A.抗原抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物，使溶液濁度增加B.抗原抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物，使溶液濁度降低C.抗原抗體非特異性結(jié)合形成復(fù)合物，使溶液濁度增加D.抗原抗體非特異性結(jié)合形成復(fù)合物，使溶液濁度降低7.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，補(bǔ)體的作用是（）A.溶解紅細(xì)胞B.溶解抗原抗體復(fù)合物C.促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬D.增強(qiáng)抗體的免疫活性8.免疫組化技術(shù)中，常用的標(biāo)記物是（）A.熒光素B.酶C.放射性核素D.以上都是9.凝集試驗(yàn)中，顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)的現(xiàn)象是（）A.沉淀B.凝集C.溶血D.渾濁10.免疫擴(kuò)散試驗(yàn)中，抗原抗體在瓊脂凝膠中擴(kuò)散的速度取決于（）A.抗原抗體的分子量B.抗原抗體的濃度C.抗原抗體的電荷D.以上都是二、多項(xiàng)選擇題1.以下屬于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的有（）A.免疫熒光技術(shù)B.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)C.免疫印跡法D.流式細(xì)胞術(shù)E.免疫沉淀試驗(yàn)2.免疫熒光技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)有（）A.特異性高B.靈敏度高C.可定位D.可同時(shí)檢測(cè)多種抗原E.操作簡(jiǎn)單3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的類型有（）A.雙抗體夾心法B.間接法C.競(jìng)爭(zhēng)法D.捕獲法E.以上都是4.免疫印跡法的基本步驟包括（）A.蛋白質(zhì)樣品的制備B.SDS電泳C.轉(zhuǎn)膜D.免疫反應(yīng)E.顯色5.流式細(xì)胞術(shù)可用于（）A.細(xì)胞分選B.細(xì)胞凋亡檢測(cè)C.細(xì)胞增殖檢測(cè)D.細(xì)胞免疫表型分析E.以上都是三、填空題1.免疫熒光技術(shù)中，常用的熒光顯微鏡有_____和_____。2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，常用的固相載體有_____和_____。3.免疫印跡法中，轉(zhuǎn)膜的方法有_____和_____。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物時(shí)，常用的熒光染料有_____和_____。5.免疫沉淀試驗(yàn)中，常用的抗體有_____和_____。四、判斷題（√/×）1.免疫熒光技術(shù)只能用于檢測(cè)細(xì)胞表面抗原。（）2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，酶標(biāo)抗體的作用是與抗原結(jié)合。（）3.免疫印跡法可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和分子量。（）4.流式細(xì)胞術(shù)可同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞表面標(biāo)志物。（）5.免疫沉淀試驗(yàn)只能用于檢測(cè)蛋白質(zhì)。（）6.免疫比濁法可用于檢測(cè)抗原或抗體的含量。（）7.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，抗原抗體復(fù)合物的形成是補(bǔ)體激活的前提。（）8.免疫組化技術(shù)可用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中的抗原。（）9.凝集試驗(yàn)中，抗體的效價(jià)越高，凝集現(xiàn)象越明顯。（）10.免疫擴(kuò)散試驗(yàn)中，抗原抗體在瓊脂凝膠中形成的沉淀線越清晰，說明抗原抗體的親和力越高。（）五、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述免疫熒光技術(shù)的基本原理。2.簡(jiǎn)述酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的操作步驟。六、案例分析患者，男性，45歲，因反復(fù)咳嗽、咳痰、喘息10年，加重1周入院?；颊?0年前開始出現(xiàn)咳嗽、咳痰，多為白色黏痰，每年發(fā)作3個(gè)月以上，冬春季加重。近1周來(lái)，咳嗽、咳痰加重，伴有喘息，活動(dòng)后明顯，夜間不能平臥。否認(rèn)高血壓、糖尿病等病史。吸煙史20年，每天20支。查體：T36.8℃，P100次/分，R25次/分，BP120/80mmHg。神志清楚，端坐位，呼吸急促，口唇發(fā)紺，桶狀胸，雙肺叩診過清音，雙肺呼吸音減弱，可聞及散在哮鳴音，未聞及濕啰音。心率100次/分，律齊，各瓣膜聽診區(qū)未聞及雜音。腹軟，無(wú)壓痛，肝脾肋下未觸及。雙下肢無(wú)水腫。輔助檢查：血常規(guī)：WBC10.5×10?/L，N0.80，L0.20。胸部X線片：雙肺紋理增多、紊亂，透亮度增加，肋間隙增寬，膈低平。肺功能檢查：FEV?/FVC60%，F(xiàn)EV?占預(yù)計(jì)值的50%。問題1：請(qǐng)寫出該患者的初步診斷及診斷依據(jù)。問題2：請(qǐng)列出該患者的鑒別診斷。試卷答案一、單項(xiàng)選擇題（答案）1.答案：D解析：免疫熒光技術(shù)中常用的熒光素包括異硫氰酸熒光素、四甲基異硫氰酸羅丹明、藻紅蛋白等。2.答案：A解析：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中最常用的酶是辣根過氧化物酶，其次是堿性磷酸酶。3.答案：A解析：免疫印跡法主要用于檢測(cè)蛋白質(zhì)，可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平、分子量、抗原性等。4.答案：D解析：流式細(xì)胞術(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等。5.答案：B解析：免疫沉淀試驗(yàn)中常用的沉淀劑是聚乙二醇，它可使抗原抗體復(fù)合物沉淀下來(lái)。6.答案：A解析：免疫比濁法的原理是抗原抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物，使溶液濁度增加，通過檢測(cè)濁度的變化來(lái)定量抗原或抗體。7.答案：B解析：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，補(bǔ)體的作用是溶解抗原抗體復(fù)合物，從而判斷抗原抗體是否特異性結(jié)合。8.答案：D解析：免疫組化技術(shù)中常用的標(biāo)記物有熒光素、酶、放射性核素等，可根據(jù)不同的檢測(cè)目的選擇合適的標(biāo)記物。9.答案：B解析：凝集試驗(yàn)中，顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，可用于檢測(cè)抗原或抗體。10.答案：D解析：免疫擴(kuò)散試驗(yàn)中，抗原抗體在瓊脂凝膠中擴(kuò)散的速度取決于抗原抗體的分子量、濃度、電荷等因素。二、多項(xiàng)選擇題（答案）1.答案：ABCDE解析：免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫印跡法、流式細(xì)胞術(shù)、免疫沉淀試驗(yàn)等都屬于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。2.答案：ABCD解析：免疫熒光技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)包括特異性高、靈敏度高、可定位、可同時(shí)檢測(cè)多種抗原等，但操作相對(duì)復(fù)雜。3.答案：ABCDE解析：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的類型包括雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法等，可根據(jù)不同的檢測(cè)目的選擇合適的方法。4.答案：ABCDE解析：免疫印跡法的基本步驟包括蛋白質(zhì)樣品的制備、SDS電泳、轉(zhuǎn)膜、免疫反應(yīng)、顯色等。5.答案：ABCDE解析：流式細(xì)胞術(shù)可用于細(xì)胞分選、細(xì)胞凋亡檢測(cè)、細(xì)胞增殖檢測(cè)、細(xì)胞免疫表型分析等。三、填空題（答案）1.答案：普通熒光顯微鏡；激光共聚焦熒光顯微鏡解析：免疫熒光技術(shù)中常用的熒光顯微鏡有普通熒光顯微鏡和激光共聚焦熒光顯微鏡，激光共聚焦熒光顯微鏡可提高分辨率和定位準(zhǔn)確性。2.答案：聚苯乙烯微孔板；硝酸纖維素膜解析：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中常用的固相載體有聚苯乙烯微孔板和硝酸纖維素膜，聚苯乙烯微孔板常用于定量檢測(cè)，硝酸纖維素膜常用于定性檢測(cè)。3.答案：濕轉(zhuǎn)法；半干轉(zhuǎn)法解析：免疫印跡法中轉(zhuǎn)膜的方法有濕轉(zhuǎn)法和半干轉(zhuǎn)法，濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜效率高，但操作較復(fù)雜，半干轉(zhuǎn)法操作簡(jiǎn)單，但轉(zhuǎn)膜效率較低。4.答案：異硫氰酸熒光素；藻紅蛋白解析：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物時(shí)，常用的熒光染料有異硫氰酸熒光素和藻紅蛋白等，可根據(jù)不同的檢測(cè)需求選擇合適的熒光染料。5.答案：?jiǎn)慰寺】贵w；多克隆抗體解析：免疫沉淀試驗(yàn)中常用的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體特異性高，多克隆抗體親和力高。四、判斷題（答案）1.答案：×解析：免疫熒光技術(shù)不僅可用于檢測(cè)細(xì)胞表面抗原，還可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原。2.答案：×解析：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，酶標(biāo)抗體的作用是與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，而不是與抗原結(jié)合。3.答案：√解析：免疫印跡法可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和分子量，通過與標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白比較可確定目的蛋白的分子量。4.答案：√解析：流式細(xì)胞術(shù)可同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞表面標(biāo)志物，通過使用不同顏色的熒光染料標(biāo)記不同的抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)。5.答案：×解析：免疫沉淀試驗(yàn)不僅可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)，還可用于檢測(cè)核酸等其他生物分子。6.答案：√解析：免疫比濁法可用于檢測(cè)抗原或抗體的含量，通過檢測(cè)濁度的變化來(lái)定量抗原或抗體。7.答案：√解析：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，抗原抗體復(fù)合物的形成是補(bǔ)體激活的前提，補(bǔ)體激活后可溶解抗原抗體復(fù)合物。8.答案：√解析：免疫組化技術(shù)可用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中的抗原，通過使用特異性抗體與抗原結(jié)合，再用標(biāo)記物標(biāo)記抗體來(lái)顯示抗原的位置和分布。9.答案：√解析：凝集試驗(yàn)中，抗體的效價(jià)越高，說明抗體的濃度越高，與抗原結(jié)合的能力越強(qiáng)，凝集現(xiàn)象越明顯。10.答案：√解析：免疫擴(kuò)散試驗(yàn)中，抗原抗體在瓊脂凝膠中形成的沉淀線越清晰，說明抗原抗體的親和力越高，結(jié)合越緊密。五、簡(jiǎn)答題（答案）1.答：免疫熒光技術(shù)的基本原理是將熒光素標(biāo)記在抗體上，然后用標(biāo)記的抗體與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察熒光的位置和強(qiáng)度，從而確定抗原的存在和分布。2.答：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的操作步驟包括：①包被：將抗原或抗體包被在固相載體上；②封閉：用無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)封閉固相載體上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)；③加樣：加入待檢樣品和酶標(biāo)抗體；④孵育：使抗原抗體反應(yīng)充分進(jìn)行；⑤洗滌：去除未結(jié)合的物質(zhì)；⑥顯色：加入底物，使酶催化底物顯色；⑦終止反應(yīng)：加入終止液，終止顯色反應(yīng)；⑧測(cè)定：用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中抗原或抗體的含量。六、案例分析（答案）1.答：初步診斷：慢性阻塞性肺疾?。–OPD）急性加重期。診斷依據(jù)：①患者有反復(fù)咳嗽、咳痰、喘息10年，每年發(fā)作3個(gè)月以上，冬春季加重，符合COPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②近1周來(lái)，咳嗽、咳痰加重，伴有喘息，活動(dòng)后明顯，夜間不能平臥，提示病情急性加重；③查體：桶狀胸，雙肺叩診過清音，雙肺呼吸音減弱，可聞及散在哮鳴音，未聞及濕啰音，符合COPD的體征；④胸部X線片：雙肺紋理增多、紊亂，透亮度增加，肋間隙增寬，膈低平，符合COPD的影像學(xué)表現(xiàn)；⑤肺功能檢查：FEV?/FVC60%，F(xiàn)EV?占預(yù)計(jì)值的50%，提示存在氣流受限，且不完全可逆，符合COPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)。2.答：鑒別診斷：①支氣管哮喘：多在兒童或青少年期起病，常有家族史和過敏史，發(fā)作時(shí)雙肺可聞及廣泛的哮鳴音，緩解期可無(wú)異常，肺功能檢查提示可逆性氣流受限；②支氣管擴(kuò)張：多有反復(fù)咳嗽、咳大量膿痰和（或）咯血病史，胸部X線片或CT可見支氣管擴(kuò)張的表現(xiàn)；③肺