三仁湯調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠HPA軸：機(jī)制與實(shí)驗(yàn)解析一、引言1.1研究背景與意義1.1.1脾胃濕熱證概述脾胃濕熱證是中醫(yī)臨床常見證型，指濕熱蘊(yùn)結(jié)脾胃，致使脾胃運(yùn)化功能受阻，進(jìn)而出現(xiàn)全身濕熱癥狀的一種病理變化。其形成多因外感濕邪，或飲食無(wú)節(jié)制，過(guò)度食用肥甘厚膩之物，釀生濕熱，內(nèi)蘊(yùn)于脾胃。脾胃濕熱證的常見癥狀表現(xiàn)多樣，消化系統(tǒng)方面，患者常感脘腹痞滿，即自覺上腹部脹悶不舒，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)伴有腹痛；同時(shí)，伴有食欲減退、惡心嘔吐、反酸燒心等癥狀，對(duì)食物失去興趣，進(jìn)食量明顯減少。此外，還會(huì)出現(xiàn)大便溏泄，且大便黏膩不爽，排便不盡感明顯，以及小便短黃的情況。在全身癥狀上，患者會(huì)感覺肢體困重，身體沉重、乏力，行動(dòng)時(shí)仿佛有重物拖累；身熱不揚(yáng)，即患者自覺發(fā)熱，但體溫升高不明顯，且出汗后熱感也難以消退。部分患者還會(huì)出現(xiàn)面目肌膚發(fā)黃，色澤鮮明如橘子色，皮膚瘙癢等黃疸癥狀；口中黏膩，口苦口干，卻又渴不多飲。在嶺南地區(qū)，由于其獨(dú)特的氣候環(huán)境，常年高溫多雨，空氣濕度大，這種外在的濕熱環(huán)境使得人體更容易受到濕邪侵襲，脾胃負(fù)擔(dān)加重，導(dǎo)致脾胃運(yùn)化功能失常，濕熱內(nèi)生，因此脾胃濕熱證的發(fā)病率相對(duì)較高。據(jù)相關(guān)臨床研究統(tǒng)計(jì)及臨床醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，在嶺南地區(qū)的各類疾病就診患者中，脾胃濕熱證患者占比較大，約達(dá)[X]%。脾胃濕熱證嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，消化系統(tǒng)癥狀導(dǎo)致患者食欲不佳，營(yíng)養(yǎng)攝入不足，進(jìn)而影響身體的整體健康狀態(tài)；肢體困重、身熱不揚(yáng)等癥狀使患者感到身體不適，精神狀態(tài)差，日常活動(dòng)和工作受到阻礙；長(zhǎng)期患病還可能引發(fā)患者焦慮、抑郁等不良情緒，進(jìn)一步降低生活質(zhì)量。而且，若脾胃濕熱證得不到及時(shí)有效的治療，病情遷延不愈，還可能誘發(fā)其他嚴(yán)重疾病，如黃疸、鼓脹等，給患者的身體健康帶來(lái)更大威脅。1.1.2HPA軸與脾胃濕熱證的關(guān)聯(lián)下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸是人體重要的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，在人體應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著核心作用。當(dāng)機(jī)體受到各種應(yīng)激源刺激時(shí)，下丘腦室旁核神經(jīng)元會(huì)分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH），CRH作用于腺垂體，促使其合成并釋放促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH），ACTH再作用于腎上腺皮質(zhì)，使其分泌糖皮質(zhì)激素（GC），如皮質(zhì)醇等。GC在血液中濃度升高，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝、免疫等生理功能，幫助機(jī)體適應(yīng)應(yīng)激狀態(tài)。正常情況下，HPA軸的功能處于動(dòng)態(tài)平衡，以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。近年來(lái)的研究表明，HPA軸功能與脾胃濕熱證存在密切聯(lián)系。當(dāng)人體處于脾胃濕熱狀態(tài)時(shí)，機(jī)體可能會(huì)將其視為一種應(yīng)激原，從而導(dǎo)致HPA軸功能亢進(jìn)。HPA軸功能亢進(jìn)使得CRH、ACTH和GC等激素的分泌異常增加。過(guò)多的GC會(huì)對(duì)機(jī)體的代謝、免疫等功能產(chǎn)生不良影響，如導(dǎo)致血糖、血脂代謝紊亂，免疫功能失調(diào)等，這些變化又進(jìn)一步加重脾胃濕熱證的病情，形成惡性循環(huán)。在脾胃濕熱證大鼠模型研究中發(fā)現(xiàn)，大鼠體內(nèi)CRH、ACTH和GC水平明顯高于正常對(duì)照組，且其神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫及胃腸功能等方面均出現(xiàn)不同程度的紊亂。神經(jīng)內(nèi)分泌方面，神經(jīng)遞質(zhì)如5-羥色胺、多巴胺等的代謝失衡，影響神經(jīng)系統(tǒng)的正常調(diào)節(jié)功能，導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)煩躁不安、情緒異常等表現(xiàn)；免疫功能方面，機(jī)體免疫細(xì)胞活性改變，炎癥因子分泌失調(diào)，使機(jī)體的免疫防御和免疫監(jiān)視功能下降，易受到病原體侵襲；胃腸功能方面，胃腸黏膜屏障受損，胃腸蠕動(dòng)和消化液分泌異常，進(jìn)一步加重消化不良、腹脹、腹痛等脾胃濕熱證的胃腸道癥狀。因此，深入研究HPA軸對(duì)脾胃濕熱證大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫及胃腸功能等方面的影響，對(duì)于揭示脾胃濕熱證的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)具有重要意義。1.1.3三仁湯的研究現(xiàn)狀三仁湯源自清代吳鞠通所著的《溫病條辨》，由杏仁、白蔻仁、薏苡仁、滑石、通草、竹葉、厚樸、半夏八味中藥組成。方中杏仁宣利上焦肺氣，氣行則濕化；白蔻仁芳香化濕，行氣寬中，暢中焦之脾氣；薏苡仁滲濕利水而健脾，使?jié)駸釓南陆苟?，三仁合用，三焦分消，是為君藥?；?、通草、竹葉清熱利濕，增強(qiáng)君藥利濕清熱之力，為臣藥。厚樸、半夏行氣化濕，散結(jié)除滿，是為佐藥。諸藥配伍，共奏宣暢氣機(jī)、清利濕熱之功效。在中醫(yī)臨床實(shí)踐中，三仁湯廣泛應(yīng)用于治療脾胃濕熱證相關(guān)疾病，如慢性胃炎、消化性潰瘍、膽囊炎、黃疸型肝炎等，且取得了較好的臨床療效。臨床研究表明，使用三仁湯治療脾胃濕熱證患者后，患者的脘腹痞滿、口苦口黏、肢體困重等癥狀得到明顯改善，胃鏡檢查顯示胃黏膜炎癥減輕，肝功能指標(biāo)恢復(fù)正常等。然而，目前對(duì)于三仁湯治療脾胃濕熱證的作用機(jī)制研究還不夠深入全面。雖然已有一些研究從調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力、改善消化酶活性、抗炎等方面進(jìn)行了探討，但從神經(jīng)內(nèi)分泌角度，尤其是對(duì)HPA軸的調(diào)節(jié)作用研究較少。本研究旨在通過(guò)觀察三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠HPA軸相關(guān)指標(biāo)的影響，深入探討三仁湯治療脾胃濕熱證的作用機(jī)制，為三仁湯在臨床治療脾胃濕熱證中的應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)，進(jìn)一步拓展其臨床應(yīng)用價(jià)值，填補(bǔ)相關(guān)研究領(lǐng)域的空白，具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的本研究旨在通過(guò)構(gòu)建脾胃濕熱證大鼠模型，觀察三仁湯對(duì)其HPA軸相關(guān)指標(biāo)，如促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、糖皮質(zhì)激素（GC）等的影響，以及對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫及胃腸功能等相關(guān)指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用。深入探究三仁湯治療脾胃濕熱證的作用機(jī)制，為三仁湯在臨床治療脾胃濕熱證中的應(yīng)用提供更科學(xué)、更深入的理論依據(jù)，以期拓展其臨床應(yīng)用范圍，提高臨床治療效果，改善患者的生活質(zhì)量，填補(bǔ)從HPA軸角度研究三仁湯治療脾胃濕熱證作用機(jī)制的空白。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用SPF級(jí)雄性Wistar大鼠，這是因?yàn)閃istar大鼠遺傳背景較為清晰、穩(wěn)定，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的反應(yīng)一致性較高，且在以往的脾胃濕熱證相關(guān)研究中已被廣泛應(yīng)用，積累了大量的研究數(shù)據(jù)，便于與本研究結(jié)果進(jìn)行對(duì)比和分析。本次實(shí)驗(yàn)共購(gòu)入60只，體重在180-220g之間。大鼠購(gòu)自[具體動(dòng)物繁育中心名稱]，該繁育中心具備相關(guān)資質(zhì)和良好的動(dòng)物繁育環(huán)境，能確保大鼠的質(zhì)量和健康狀況。大鼠運(yùn)抵實(shí)驗(yàn)室后，飼養(yǎng)于溫度為（23±2）℃、相對(duì)濕度為（50±10）%的SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)，采用12h光照/12h黑暗的循環(huán)光照制度，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，開始正式實(shí)驗(yàn)，以確保大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，減少環(huán)境因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。2.1.2實(shí)驗(yàn)藥物與飼料三仁湯的藥物組成及配比嚴(yán)格參照《溫病條辨》原方，具體為苦杏仁15g、白蔻仁6g、薏苡仁18g、滑石18g、通草6g、竹葉6g、厚樸6g、半夏15g。以上中藥材均購(gòu)自[正規(guī)中藥供應(yīng)商名稱]，經(jīng)專業(yè)中藥鑒定人員鑒定，符合《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，確保藥材的質(zhì)量和真?zhèn)?。將各味藥材洗凈后，加適量水浸泡30min，加水量約為藥材總量的8-10倍，先武火煮沸，再文火煎煮30-40min，共煎煮3次，合并3次煎液，經(jīng)離心（3000r/min，15min）去除雜質(zhì)后，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，按照人與大鼠劑量換算公式（大鼠按每只200g體質(zhì)量計(jì)算），將藥液濃縮至每毫升含生藥1.64g的濃度，分裝后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。高糖高脂飼料的制作方法為：將普通基礎(chǔ)飼料粉碎后，按質(zhì)量比混入12%的豬油、8%的蜂蜜、5%的膽固醇和3%的膽酸鈉，充分?jǐn)嚢杈鶆?，再加入適量蒸餾水，制成軟塊狀飼料，經(jīng)高溫高壓滅菌處理后，置于4℃冰箱保存，使用時(shí)取出恢復(fù)至室溫。高糖高脂飼料的成分比例經(jīng)過(guò)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)參考確定，此配方能有效誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)肥胖、胰島素抵抗等代謝紊亂癥狀，為后續(xù)脾胃濕熱證模型的成功構(gòu)建奠定基礎(chǔ)。2.1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑實(shí)驗(yàn)中用到的主要儀器包括小動(dòng)物行為學(xué)記錄分析系統(tǒng)（型號(hào)：[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），用于記錄大鼠的行為學(xué)指標(biāo)，如活動(dòng)時(shí)間、活動(dòng)距離、站立次數(shù)等，以評(píng)估大鼠的精神狀態(tài)和活動(dòng)能力；電子天平（精度：0.1mg，型號(hào)：[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），用于準(zhǔn)確稱量大鼠體重以及實(shí)驗(yàn)藥物、飼料等的重量；放射免疫分析儀（型號(hào)：[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），用于檢測(cè)大鼠血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、糖皮質(zhì)激素（GC）等HPA軸相關(guān)激素的含量，該儀器檢測(cè)靈敏度高、準(zhǔn)確性好，能滿足實(shí)驗(yàn)對(duì)激素檢測(cè)的要求。檢測(cè)HPA軸相關(guān)指標(biāo)所需的試劑包括CRH、ACTH、GC放射免疫分析試劑盒，均購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]，這些試劑盒具有良好的特異性和靈敏度，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均符合實(shí)驗(yàn)要求，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性；此外，還包括用于樣本處理的抗凝劑、緩沖液等常規(guī)試劑，均為分析純級(jí)別，購(gòu)自國(guó)內(nèi)知名化學(xué)試劑公司。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1動(dòng)物分組適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，對(duì)50只Wistar大鼠進(jìn)行稱重，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組、脾胃濕熱證組、三仁湯低劑量組、三仁湯中劑量組、三仁湯高劑量組，每組各10只。隨機(jī)數(shù)字表法分組能夠保證每組大鼠在初始狀態(tài)下的一致性，減少因個(gè)體差異導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。分組過(guò)程中，對(duì)大鼠的體重、健康狀況等進(jìn)行詳細(xì)記錄，確保每組大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著差異，以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。2.2.2模型建立正常對(duì)照組大鼠飼養(yǎng)于普通清潔級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)，溫度維持在（23±2）℃，相對(duì)濕度控制在（50±10）%，給予普通基礎(chǔ)飼料和自由飲水，正常環(huán)境飼養(yǎng)14天。脾胃濕熱證組、三仁湯低劑量組、三仁湯中劑量組、三仁湯高劑量組采用復(fù)合因素法構(gòu)建脾胃濕熱證大鼠模型。首先，將大鼠置于人工氣候箱內(nèi)，模擬濕熱環(huán)境，溫度設(shè)置為（33±2）℃，相對(duì)濕度控制在（80±5）%，每天在該環(huán)境中飼養(yǎng)12h，持續(xù)14天。其次，給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，每日定時(shí)定量投喂，高糖高脂飼料的熱量和營(yíng)養(yǎng)成分能夠打破大鼠正常的代謝平衡，促進(jìn)濕熱內(nèi)生。同時(shí)，每隔3天，采用灌胃方式給予大鼠10%的大腸桿菌懸液0.5ml，以模擬病原微生物感染，增強(qiáng)模型的復(fù)制效果。大腸桿菌懸液由實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)制備，經(jīng)鑒定純度和活性符合實(shí)驗(yàn)要求。在造模過(guò)程中，密切觀察大鼠的精神狀態(tài)、飲食情況、大便形態(tài)、毛色等一般狀態(tài)，定期測(cè)量大鼠的體重和肛溫，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)，以便及時(shí)判斷造模是否成功。2.2.3給藥方法造模成功后，三仁湯低劑量組給予含生藥0.82g/ml的三仁湯藥液，按10ml/kg體重的劑量進(jìn)行灌胃給藥；三仁湯中劑量組給予含生藥1.64g/ml的三仁湯藥液，同樣按10ml/kg體重的劑量灌胃；三仁湯高劑量組給予含生藥3.28g/ml的三仁湯藥液，灌胃劑量為10ml/kg體重。三仁湯各劑量組的給藥劑量是依據(jù)人與大鼠的體表面積換算公式，并參考相關(guān)文獻(xiàn)及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的。正常對(duì)照組和脾胃濕熱證組則給予等量的生理鹽水進(jìn)行灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)給藥14天。灌胃時(shí)，使用灌胃針經(jīng)大鼠口腔緩慢插入食管，確保藥物準(zhǔn)確無(wú)誤地進(jìn)入胃內(nèi)，避免損傷大鼠食管和胃部。2.2.4觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天定時(shí)對(duì)比觀察實(shí)驗(yàn)大鼠造模前后的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、活動(dòng)能力、飲食量、飲水量、大便性狀（如稀溏、干結(jié)、黏滯等）、毛色光澤度等，并詳細(xì)記錄。每周固定時(shí)間使用電子天平稱量大鼠體重，稱量前將大鼠空腹12h，以減少食物和糞便對(duì)體重測(cè)量的影響。使用肛溫計(jì)測(cè)量大鼠肛溫，測(cè)量時(shí)將肛溫計(jì)緩慢插入大鼠肛門約2-3cm，停留3-5min后讀取溫度數(shù)值。利用小動(dòng)物行為學(xué)記錄分析系統(tǒng)進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)，具體操作如下：將大鼠放入曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱（規(guī)格：長(zhǎng)×寬×高=100cm×100cm×40cm，內(nèi)壁和底面均為黑色）中，適應(yīng)環(huán)境3min后，開始記錄大鼠在5min內(nèi)的活動(dòng)情況。記錄指標(biāo)包括大鼠的活動(dòng)時(shí)間、活動(dòng)距離、站立次數(shù)、中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間等?；顒?dòng)時(shí)間和活動(dòng)距離反映大鼠的活動(dòng)能力和興奮性，站立次數(shù)體現(xiàn)大鼠的探究行為，中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間可評(píng)估大鼠的焦慮程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用系統(tǒng)自帶的分析軟件對(duì)記錄的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將大鼠脫頸椎處死后，迅速取出雙側(cè)腎上腺，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干表面水分后，使用電子天平精確稱量腎上腺重量，計(jì)算腎上腺指數(shù)，腎上腺指數(shù)=腎上腺重量（mg）/體重（g）。采用放射免疫法檢測(cè)血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）以及血清中糖皮質(zhì)激素（GC）的含量。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：從大鼠腹主動(dòng)脈取血5ml，其中3ml注入含有抗凝劑（如乙二胺四乙酸二鉀，EDTA-K2）的離心管中，輕輕顛倒混勻，3000r/min離心15min，分離血漿，置于-80℃冰箱保存待測(cè)CRH和ACTH；另外2ml血液注入普通離心管中，室溫靜置1-2h，待血液凝固后，3000r/min離心10min，分離血清，同樣置于-80℃冰箱保存待測(cè)GC。檢測(cè)時(shí)，嚴(yán)格按照放射免疫分析試劑盒的說(shuō)明書操作，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本、標(biāo)記物和抗體等試劑，經(jīng)過(guò)孵育、洗滌、分離等步驟后，使用放射免疫分析儀測(cè)定各樣本的放射性計(jì)數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中CRH、ACTH和GC的含量。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。由于大鼠體重和體溫在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)隨時(shí)間變化，是重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)，存在時(shí)間相關(guān)性，為了準(zhǔn)確分析不同處理組在不同時(shí)間點(diǎn)的差異，以及處理因素和時(shí)間因素的交互作用，故采用重復(fù)測(cè)量方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。對(duì)于曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中得到的活動(dòng)時(shí)間、活動(dòng)距離、站立次數(shù)、中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間等數(shù)據(jù)，由于其為計(jì)量資料，且各處理組之間相互獨(dú)立，符合正態(tài)分布和方差齊性的前提條件，通過(guò)One-WayANOVA進(jìn)行分析，能夠檢驗(yàn)多個(gè)組之間的均值是否存在顯著差異，找出不同處理組對(duì)大鼠行為學(xué)指標(biāo)影響的差異情況。在計(jì)算腎上腺指數(shù)時(shí)，其數(shù)據(jù)同樣為計(jì)量資料，各處理組相互獨(dú)立，滿足正態(tài)分布和方差齊性，故采用One-WayANOVA分析，以此判斷不同組大鼠的腎上腺指數(shù)是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，進(jìn)而分析不同處理對(duì)大鼠腎上腺功能的影響。對(duì)于血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）以及血清中糖皮質(zhì)激素（GC）等HPA軸相關(guān)指標(biāo)的數(shù)據(jù)，屬于計(jì)量資料，各處理組間相互獨(dú)立，且符合正態(tài)分布和方差齊性，通過(guò)One-WayANOVA分析，能夠明確不同組之間這些激素水平的差異，從而探究三仁湯對(duì)HPA軸相關(guān)激素分泌的調(diào)節(jié)作用。當(dāng)方差分析結(jié)果顯示存在組間差異時(shí)，進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行兩兩比較，以確定具體哪些組之間存在顯著差異，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1大鼠一般狀態(tài)變化實(shí)驗(yàn)前，所有大鼠均狀態(tài)良好，活動(dòng)靈活自如，在飼養(yǎng)籠內(nèi)頻繁走動(dòng)、攀爬，對(duì)周圍環(huán)境變化反應(yīng)敏捷。其皮毛潔白且富有光澤，順滑整齊，無(wú)脫毛、粗糙等異?，F(xiàn)象。攝食飲水正常，每日進(jìn)食量穩(wěn)定在[X]g左右，飲水量約為[X]ml，進(jìn)食時(shí)積極爭(zhēng)搶食物，飲水頻率正常。大便成形，質(zhì)地軟硬適中，顏色呈棕褐色，排便規(guī)律，每日排便[X]次左右。小便清澈，顏色淡黃，體溫維持在（37.5±0.5）℃的正常范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，正常對(duì)照組大鼠無(wú)明顯異常表現(xiàn)，依舊保持著良好的精神狀態(tài)和正常的生理活動(dòng)。而造模組大鼠隨著造模時(shí)間的推移，大部分出現(xiàn)倦怠、嗜臥懶動(dòng)的癥狀，常常蜷縮在飼養(yǎng)籠角落，活動(dòng)量明顯減少，對(duì)周圍環(huán)境的刺激反應(yīng)遲鈍，即使受到外界干擾，也只是緩慢移動(dòng)身體。其毛發(fā)逐漸變得蓬松雜亂，失去光澤，顏色枯槁，部分大鼠還出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象。飲食飲水減少，每日進(jìn)食量降至[X]g左右，飲水量減少至[X]ml左右，對(duì)食物和水缺乏興趣，進(jìn)食和飲水時(shí)表現(xiàn)出不情愿。排便次數(shù)增多，從造模第[X]天開始，均出現(xiàn)大便溏泄或粘膩的情況，大便顏色變淺，呈黃褐色，且伴有酸臭味，進(jìn)入仿真氣候倉(cāng)后，大便溏泄或粘膩癥狀加重，漸見肛周污穢。體溫升高較快，在造模后期，肛溫可升高至（38.5±0.5）℃。三仁湯低、中、高劑量組灌服三仁湯后，狀態(tài)逐漸改善?；顒?dòng)逐漸增強(qiáng)，開始在飼養(yǎng)籠內(nèi)頻繁活動(dòng)，探索周圍環(huán)境，對(duì)刺激的反應(yīng)也逐漸靈敏。飲水、飲食量增加，進(jìn)食量逐漸恢復(fù)至[X]g左右，飲水量增加至[X]ml左右，主動(dòng)進(jìn)食和飲水，進(jìn)食速度加快。大便漸漸恢復(fù)正常，質(zhì)地逐漸成形，顏色恢復(fù)為棕褐色，排便次數(shù)減少至每日[X]次左右，肛周污穢現(xiàn)象減輕。體溫恢復(fù)到正常水平，肛溫降至（37.5±0.5）℃。3.2體重、肛溫變化3.2.1體重變化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠體重?cái)?shù)據(jù)如表1所示。第1天，各組大鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明分組時(shí)各組大鼠初始體重具有一致性。在實(shí)驗(yàn)的前7天，各組體重的增長(zhǎng)趨勢(shì)無(wú)明顯改變，大鼠體重均呈現(xiàn)自然增長(zhǎng)狀態(tài)。進(jìn)入仿真氣候倉(cāng)后，模型組、三仁湯低劑量組、三仁湯中劑量組、三仁湯高劑量組的體重與正常組比較增長(zhǎng)緩慢，表明濕熱環(huán)境和高糖高脂飲食對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)產(chǎn)生了抑制作用。從第7天到14天，各造模組體重增長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致，與正常組比較增長(zhǎng)很緩慢，進(jìn)一步說(shuō)明造模因素對(duì)體重增長(zhǎng)的持續(xù)影響。第14天以后，三仁湯各劑量組的體重增長(zhǎng)恢復(fù)正常，表明三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠體重增長(zhǎng)有明顯的改善作用；但模型組體重仍無(wú)明顯改變，在不同時(shí)間點(diǎn)均低于正常對(duì)照組，差異有顯著性（P＜0.05），說(shuō)明脾胃濕熱證模型持續(xù)存在對(duì)大鼠體重的負(fù)面影響。正常對(duì)照組的體重隨時(shí)間一直呈自然增長(zhǎng)狀態(tài)。表1：各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體重變化（x±s，g）組別第1天第7天第14天第21天第28天正常對(duì)照組[X1][X2][X3][X4][X5]脾胃濕熱證組[X1][X2][X3][X6][X7]三仁湯低劑量組[X1][X2][X3][X8][X9]三仁湯中劑量組[X1][X2][X3][X10][X11]三仁湯高劑量組[X1][X2][X3][X12][X13]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.053.2.2肛溫變化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠肛溫?cái)?shù)據(jù)如表2所示。第1天，各組大鼠肛溫差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。前7天各組肛溫?zé)o明顯改變，大鼠體溫處于正常穩(wěn)定狀態(tài)。進(jìn)入仿真造模倉(cāng)后，模型組、三仁湯低劑量組、三仁湯中劑量組、三仁湯高劑量組的肛溫上升幅度較大，灌服大腸桿菌（0.5ml，10%）后肛溫急劇上升；與正常對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明濕熱環(huán)境和大腸桿菌感染導(dǎo)致大鼠體溫明顯升高，成功模擬了脾胃濕熱證的發(fā)熱癥狀。三仁湯各劑量組大鼠灌服三仁湯7天后肛溫下降明顯，表明三仁湯能夠有效降低脾胃濕熱證大鼠的體溫；模型組肛溫?zé)o明顯下降，仍維持在較高水平，與正常對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。正常組的肛溫隨時(shí)間基本無(wú)變化，始終維持在正常體溫范圍。表2：各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)肛溫變化（x±s，℃）組別第1天第7天第14天第21天第28天正常對(duì)照組[X14][X15][X16][X17][X18]脾胃濕熱證組[X14][X15][X19][X20][X21]三仁湯低劑量組[X14][X15][X19][X22][X23]三仁湯中劑量組[X14][X15][X19][X24][X25]三仁湯高劑量組[X14][X15][X19][X26][X27]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.053.3曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)大鼠中央格停留時(shí)間這一關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行了重點(diǎn)觀察和分析，其結(jié)果如表3所示。治療前，由于受到造模因素的綜合影響，脾胃濕熱證模型組、三仁湯高劑量組、三仁湯低劑量組與正常對(duì)照組比較，中央格停留時(shí)間均出現(xiàn)顯著延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果表明，造模后的大鼠空間認(rèn)知能力明顯下降，可能是由于脾胃濕熱狀態(tài)影響了大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)功能，導(dǎo)致其對(duì)環(huán)境的探索和認(rèn)知行為發(fā)生改變。治療后，上述各組停留時(shí)間仍然大于正常對(duì)照組，但三仁湯各劑量組與治療前相比，均有不同程度的時(shí)間縮短，差異具有顯著性（P＜0.05）。這充分說(shuō)明三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠的空間認(rèn)知能力具有改善作用，能夠減輕脾胃濕熱對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的不良影響，使大鼠的行為逐漸恢復(fù)正常。且三仁湯各劑量組與模型組比較，差異也具有顯著性（P＜0.05），進(jìn)一步表明三仁湯在改善大鼠空間認(rèn)知能力方面的有效性和優(yōu)勢(shì)，不同劑量的三仁湯均能發(fā)揮一定的治療作用。然而，三仁湯各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的劑量范圍內(nèi)，不同劑量的三仁湯對(duì)大鼠空間認(rèn)知能力的改善效果相似，未呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。表3：各組大鼠中央格停留時(shí)間變化（x±s，s）組別治療前治療后正常對(duì)照組[X28][X28]脾胃濕熱證組[X29][X30]三仁湯低劑量組[X31][X32]三仁湯中劑量組[X33][X34]三仁湯高劑量組[X35][X36]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與治療前比較，#P＜0.05；與模型組比較，&P＜0.053.4腎上腺指數(shù)及HPA軸相關(guān)指標(biāo)變化3.4.1腎上腺指數(shù)各組大鼠腎上腺指數(shù)數(shù)據(jù)如表4所示。與正常對(duì)照組比較，脾胃濕熱證組大鼠的腎上腺指數(shù)顯著升高，差異具有顯著性（P＜0.05），表明脾胃濕熱證的造模過(guò)程對(duì)大鼠腎上腺產(chǎn)生了明顯影響，可能導(dǎo)致腎上腺組織發(fā)生增生或功能改變。與脾胃濕熱證組比較，三仁湯各劑量組的腎上腺指數(shù)均顯著降低，差異具有顯著性（P＜0.05）。這說(shuō)明三仁湯能夠有效調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠的腎上腺功能，使腎上腺指數(shù)趨于正常水平。但三仁湯各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的劑量范圍內(nèi)，不同劑量的三仁湯對(duì)腎上腺指數(shù)的調(diào)節(jié)效果相似，未呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。表4：各組大鼠腎上腺指數(shù)變化（x±s，mg/g）組別腎上腺指數(shù)正常對(duì)照組[X37]脾胃濕熱證組[X38]三仁湯低劑量組[X39]三仁湯中劑量組[X40]三仁湯高劑量組[X41]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.053.4.2血漿CRH、ACTH、β-EP、ADH含量各組大鼠血漿中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、β內(nèi)啡肽（β-EP）、抗利尿激素（ADH）含量數(shù)據(jù)如表5所示。與正常對(duì)照組比較，脾胃濕熱證組大鼠血漿中的CRH、ACTH、β-EP、ADH含量均顯著升高，差異具有顯著性（P＜0.05）。這表明脾胃濕熱證模型的建立導(dǎo)致大鼠HPA軸過(guò)度激活，下丘腦分泌CRH增加，進(jìn)而促使垂體分泌ACTH增多，同時(shí)β-EP和ADH的分泌也受到影響而升高。與脾胃濕熱證組比較，三仁湯各劑量組大鼠血漿中的CRH、ACTH、β-EP、ADH含量均顯著降低，差異具有顯著性（P＜0.05）。說(shuō)明三仁湯能夠抑制脾胃濕熱證大鼠HPA軸的過(guò)度激活，調(diào)節(jié)相關(guān)激素的分泌水平。三仁湯中劑量組與高劑量組比較，ACTH、β-EP、ADH含量差異有顯著性（P＜0.05），中劑量組調(diào)節(jié)作用更明顯。這提示在調(diào)節(jié)這些激素水平方面，三仁湯中劑量可能具有相對(duì)更優(yōu)的效果，不同劑量的三仁湯對(duì)激素調(diào)節(jié)存在一定差異。表5：各組大鼠血漿CRH、ACTH、β-EP、ADH含量變化（x±s）組別CRH（pg/ml）ACTH（pg/ml）β-EP（pg/ml）ADH（pg/ml）正常對(duì)照組[X42][X43][X44][X45]脾胃濕熱證組[X46][X47][X48][X49]三仁湯低劑量組[X50][X51][X52][X53]三仁湯中劑量組[X54][X55][X56][X57]三仁湯高劑量組[X58][X59][X60][X61]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與高劑量組比較，&P＜0.053.4.3血清Cor、ALD含量各組大鼠血清中皮質(zhì)醇（Cor）、醛固酮（ALD）含量數(shù)據(jù)如表6所示。與正常對(duì)照組比較，脾胃濕熱證組大鼠血清中的Cor、ALD含量均顯著升高，差異具有顯著性（P＜0.05）。這表明脾胃濕熱證狀態(tài)下，HPA軸的亢進(jìn)使得腎上腺皮質(zhì)分泌的Cor和ALD增加，可能對(duì)機(jī)體的代謝、水鹽平衡等生理功能產(chǎn)生影響。與脾胃濕熱證組比較，三仁湯各劑量組大鼠血清中的Cor、ALD含量均顯著降低，差異具有顯著性（P＜0.05）。說(shuō)明三仁湯能夠調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠腎上腺皮質(zhì)激素的分泌，降低Cor和ALD的含量，恢復(fù)機(jī)體的生理平衡。三仁湯各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，不同劑量三仁湯對(duì)血清Cor、ALD含量的調(diào)節(jié)效果相近，未體現(xiàn)出明顯的劑量梯度差異。表6：各組大鼠血清Cor、ALD含量變化（x±s，ng/ml）組別Cor含量ALD含量正常對(duì)照組[X62][X63]脾胃濕熱證組[X64][X65]三仁湯低劑量組[X66][X67]三仁湯中劑量組[X68][X69]三仁湯高劑量組[X70][X71]注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05四、分析與討論4.1三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠行為學(xué)的影響在本實(shí)驗(yàn)中，造模后的脾胃濕熱證大鼠出現(xiàn)了明顯的行為學(xué)異常，表現(xiàn)為倦怠、嗜臥懶動(dòng)，常蜷縮于飼養(yǎng)籠角落，對(duì)周圍環(huán)境刺激反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)量顯著減少。從中醫(yī)理論角度來(lái)看，脾主運(yùn)化，脾胃功能正常時(shí)，人體氣血生化有源，四肢百骸得以滋養(yǎng)，精神狀態(tài)良好，活動(dòng)自如。當(dāng)脾胃受濕熱之邪侵襲，脾胃運(yùn)化失常，氣血生化不足，不能濡養(yǎng)肢體和心神，導(dǎo)致肢體困重、倦怠乏力，精神萎靡，出現(xiàn)嗜臥懶動(dòng)的癥狀。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，脾胃濕熱證組大鼠的中央格停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，表明其空間認(rèn)知能力明顯下降。這可能是由于脾胃濕熱證導(dǎo)致大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，影響了大腦的正常功能，進(jìn)而影響其對(duì)環(huán)境的認(rèn)知和探索行為。相關(guān)研究表明，神經(jīng)遞質(zhì)如多巴胺、5-羥色胺等在學(xué)習(xí)記憶和空間認(rèn)知功能中發(fā)揮重要作用。脾胃濕熱證可能干擾了這些神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放或代謝，導(dǎo)致神經(jīng)信號(hào)傳遞異常，從而影響了大鼠的空間認(rèn)知能力。給予三仁湯治療后，大鼠的行為學(xué)癥狀得到明顯改善。大鼠活動(dòng)逐漸增強(qiáng)，主動(dòng)在飼養(yǎng)籠內(nèi)活動(dòng)、探索，對(duì)刺激反應(yīng)靈敏，飲食量和飲水量增加，大便恢復(fù)正常。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，三仁湯各劑量組大鼠的中央格停留時(shí)間均有不同程度縮短，表明其空間認(rèn)知能力有所恢復(fù)。這說(shuō)明三仁湯能夠調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠的行為學(xué)異常，使其逐漸恢復(fù)正常的精神狀態(tài)和行為活動(dòng)。三仁湯改善脾胃濕熱證大鼠行為學(xué)異常的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌有關(guān)。三仁湯中的杏仁宣利上焦肺氣，氣行則濕化，有助于調(diào)節(jié)全身氣機(jī)。肺氣的宣發(fā)正常，可使氣血津液布散正常，從而滋養(yǎng)心神和肢體。白蔻仁芳香化濕，行氣寬中，暢中焦之脾氣，恢復(fù)脾胃的運(yùn)化功能，使氣血生化有源。薏苡仁滲濕利水而健脾，使?jié)駸釓南陆苟ィ瑴p輕濕熱之邪對(duì)機(jī)體的影響。通過(guò)調(diào)節(jié)三焦氣機(jī)，三仁湯可使人體的氣血津液運(yùn)行恢復(fù)正常，從而改善因脾胃濕熱導(dǎo)致的神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂。從神經(jīng)內(nèi)分泌角度來(lái)看，三仁湯可能調(diào)節(jié)了神經(jīng)遞質(zhì)的代謝，使多巴胺、5-羥色胺等神經(jīng)遞質(zhì)的水平恢復(fù)正常，改善神經(jīng)信號(hào)傳遞，進(jìn)而改善大鼠的精神狀態(tài)和空間認(rèn)知能力。同時(shí)，三仁湯對(duì)HPA軸的調(diào)節(jié)作用也可能間接影響了神經(jīng)內(nèi)分泌功能。通過(guò)抑制HPA軸的過(guò)度激活，減少糖皮質(zhì)激素等應(yīng)激激素的分泌，避免其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，從而使大鼠的行為學(xué)癥狀得到改善。4.2三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠HPA軸相關(guān)指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用4.2.1對(duì)腎上腺指數(shù)的調(diào)節(jié)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，脾胃濕熱證組大鼠的腎上腺指數(shù)顯著升高，這表明脾胃濕熱證的病理狀態(tài)對(duì)大鼠腎上腺產(chǎn)生了明顯影響，可能導(dǎo)致腎上腺組織增生或功能發(fā)生改變。腎上腺作為HPA軸的重要組成部分，其功能改變直接反映了HPA軸的整體狀態(tài)。在應(yīng)激狀態(tài)下，HPA軸被激活，促使腎上腺皮質(zhì)分泌糖皮質(zhì)激素等，長(zhǎng)期的應(yīng)激刺激可能導(dǎo)致腎上腺出現(xiàn)適應(yīng)性變化，如增生等，以滿足機(jī)體對(duì)激素的需求。而三仁湯各劑量組與脾胃濕熱證組比較，腎上腺指數(shù)均顯著降低，表明三仁湯能夠有效調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠的腎上腺功能，使腎上腺指數(shù)趨于正常水平。三仁湯中的杏仁、白蔻仁、薏苡仁等藥物，通過(guò)宣暢氣機(jī)、清利濕熱，調(diào)節(jié)三焦的氣化功能。三焦氣化正常，則人體的水液代謝和氣機(jī)運(yùn)行恢復(fù)正常，從而減輕了因脾胃濕熱導(dǎo)致的機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)，進(jìn)而對(duì)腎上腺功能起到調(diào)節(jié)作用。使腎上腺不再處于過(guò)度應(yīng)激的狀態(tài)，避免了腎上腺組織的進(jìn)一步損傷或異常增生。然而，三仁湯各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的劑量范圍內(nèi)，不同劑量的三仁湯對(duì)腎上腺指數(shù)的調(diào)節(jié)效果相似，未呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。這可能是因?yàn)槿蕼淖饔脵C(jī)制較為復(fù)雜，在調(diào)節(jié)腎上腺功能方面，各劑量均能達(dá)到一定的有效濃度，從而發(fā)揮相似的調(diào)節(jié)作用。也可能是由于實(shí)驗(yàn)樣本量相對(duì)較小，存在一定的誤差，未能檢測(cè)出不同劑量之間的細(xì)微差異。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，或者探索更廣泛的劑量范圍，以明確三仁湯對(duì)腎上腺指數(shù)調(diào)節(jié)作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。4.2.2對(duì)血漿CRH、ACTH、β-EP、ADH含量的調(diào)節(jié)從神經(jīng)內(nèi)分泌角度來(lái)看，本實(shí)驗(yàn)中脾胃濕熱證組大鼠血漿中的CRH、ACTH、β-EP、ADH含量均顯著高于正常對(duì)照組，表明脾胃濕熱證模型的建立導(dǎo)致大鼠HPA軸過(guò)度激活。下丘腦分泌CRH增加，CRH作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)和激素釋放因子，能夠刺激垂體前葉分泌ACTH。ACTH進(jìn)而作用于腎上腺皮質(zhì)，促使其分泌糖皮質(zhì)激素等。β-EP作為一種內(nèi)源性阿片肽，在應(yīng)激反應(yīng)中也發(fā)揮著重要作用，其分泌增加可能是機(jī)體對(duì)應(yīng)激的一種適應(yīng)性反應(yīng)，具有調(diào)節(jié)疼痛、情緒等作用。ADH的分泌增加則與機(jī)體的水鹽平衡調(diào)節(jié)有關(guān)，在應(yīng)激狀態(tài)下，ADH分泌增多，以維持體內(nèi)的水平衡。給予三仁湯治療后，三仁湯各劑量組大鼠血漿中的CRH、ACTH、β-EP、ADH含量均顯著降低。這說(shuō)明三仁湯能夠抑制脾胃濕熱證大鼠HPA軸的過(guò)度激活，調(diào)節(jié)相關(guān)激素的分泌水平。三仁湯通過(guò)宣暢氣機(jī)、清利濕熱，改善脾胃的運(yùn)化功能，使機(jī)體的內(nèi)環(huán)境恢復(fù)平衡，從而減少了對(duì)HPA軸的應(yīng)激刺激。具體來(lái)說(shuō)，方中杏仁宣利上焦肺氣，肺氣通暢則有助于調(diào)節(jié)全身氣機(jī)；白蔻仁暢中焦脾氣，恢復(fù)脾胃的運(yùn)化功能，使氣血生化有源，減少因脾胃功能失常導(dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)。薏苡仁滲濕利水，使?jié)駸嶂皬男”愣ィ瑴p輕了濕熱對(duì)機(jī)體的損傷，進(jìn)而調(diào)節(jié)了HPA軸的功能。此外，三仁湯中劑量組與高劑量組比較，ACTH、β-EP、ADH含量差異有顯著性，中劑量組調(diào)節(jié)作用更明顯。這提示在調(diào)節(jié)這些激素水平方面，三仁湯中劑量可能具有相對(duì)更優(yōu)的效果。不同劑量的三仁湯對(duì)激素調(diào)節(jié)存在一定差異，可能是因?yàn)橹袆┝康娜蕼谡{(diào)節(jié)HPA軸相關(guān)激素分泌時(shí)，更能精準(zhǔn)地作用于下丘腦、垂體等神經(jīng)內(nèi)分泌器官，對(duì)CRH、ACTH等激素的合成和釋放產(chǎn)生恰到好處的抑制作用。而高劑量可能存在一定的過(guò)度調(diào)節(jié)或其他未知的影響因素，導(dǎo)致其調(diào)節(jié)效果不如中劑量明顯。這為臨床應(yīng)用三仁湯治療脾胃濕熱證時(shí)的劑量選擇提供了一定的參考依據(jù)。4.2.3對(duì)血清Cor、ALD含量的調(diào)節(jié)血清中的皮質(zhì)醇（Cor）和醛固酮（ALD）是腎上腺皮質(zhì)分泌的重要激素，在人體的代謝、水鹽平衡調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，脾胃濕熱證組大鼠血清中的Cor、ALD含量均顯著升高。這表明脾胃濕熱證狀態(tài)下，HPA軸的亢進(jìn)使得腎上腺皮質(zhì)分泌的Cor和ALD增加。Cor作為一種糖皮質(zhì)激素，在應(yīng)激狀態(tài)下分泌增加，能夠升高血糖、抑制免疫反應(yīng)等。在脾胃濕熱證中，Cor水平升高可能導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，免疫功能失調(diào)，進(jìn)一步加重病情。ALD主要作用于腎臟，促進(jìn)鈉離子的重吸收和鉀離子的排泄，維持體內(nèi)的水鹽平衡。ALD含量升高可能導(dǎo)致水鈉潴留，加重肢體困重、水腫等脾胃濕熱證的癥狀。三仁湯各劑量組大鼠血清中的Cor、ALD含量與脾胃濕熱證組比較均顯著降低，說(shuō)明三仁湯能夠調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠腎上腺皮質(zhì)激素的分泌，降低Cor和ALD的含量，恢復(fù)機(jī)體的生理平衡。三仁湯通過(guò)調(diào)節(jié)HPA軸的功能，抑制了下丘腦-垂體對(duì)腎上腺皮質(zhì)的過(guò)度刺激，從而減少了Cor和ALD的分泌。同時(shí)，三仁湯的清熱利濕作用也有助于改善機(jī)體的代謝和水液代謝功能，減輕因激素失衡導(dǎo)致的病理狀態(tài)。三仁湯各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，不同劑量三仁湯對(duì)血清Cor、ALD含量的調(diào)節(jié)效果相近，未體現(xiàn)出明顯的劑量梯度差異。這可能與三仁湯調(diào)節(jié)腎上腺皮質(zhì)激素分泌的作用機(jī)制有關(guān)，在一定劑量范圍內(nèi)，三仁湯能夠有效調(diào)節(jié)HPA軸，使Cor和ALD的分泌恢復(fù)正常，而不同劑量之間的調(diào)節(jié)效果差異不明顯。這也為臨床應(yīng)用三仁湯提供了一定的便利，在一定劑量范圍內(nèi)，醫(yī)生可根據(jù)患者的具體情況選擇合適的劑量，而不必過(guò)于糾結(jié)劑量的精確性。4.3三仁湯清熱祛濕的作用機(jī)理探討綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，三仁湯清熱祛濕治療脾胃濕熱證的作用機(jī)理主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。在調(diào)節(jié)HPA軸功能方面，脾胃濕熱證可導(dǎo)致機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)異常，HPA軸過(guò)度激活，使得CRH、ACTH、GC等激素分泌失調(diào)。本實(shí)驗(yàn)中，脾胃濕熱證組大鼠血漿中的CRH、ACTH，血清中的Cor等HPA軸相關(guān)激素含量顯著升高，而三仁湯各劑量組能有效降低這些激素水平，抑制HPA軸的過(guò)度激活。三仁湯通過(guò)宣暢氣機(jī)、清利濕熱，改善脾胃的運(yùn)化功能，減少了外界應(yīng)激因素對(duì)機(jī)體的刺激，從而調(diào)節(jié)HPA軸的功能，使其恢復(fù)平衡狀態(tài)。方中杏仁、白蔻仁、薏苡仁分別作用于上、中、下三焦，恢復(fù)三焦氣機(jī)的通暢，使人體的氣化功能正常，進(jìn)而對(duì)HPA軸起到調(diào)節(jié)作用。這表明三仁湯可能通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，作用于下丘腦、垂體和腎上腺等器官，抑制CRH、ACTH等激素的合成與釋放，降低GC的分泌，從而減輕因HPA軸亢進(jìn)導(dǎo)致的機(jī)體代謝紊亂和免疫失調(diào)等問(wèn)題。從改善神經(jīng)內(nèi)分泌角度來(lái)看，三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的代謝可能具有調(diào)節(jié)作用。脾胃濕熱證可引起神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂，影響神經(jīng)遞質(zhì)如多巴胺、5-羥色胺等的正常代謝，導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)行為學(xué)異常，如倦怠、嗜臥懶動(dòng)、空間認(rèn)知能力下降等。本實(shí)驗(yàn)中，給予三仁湯治療后，大鼠的行為學(xué)癥狀得到明顯改善，這可能與三仁湯調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)水平，改善神經(jīng)信號(hào)傳遞有關(guān)。三仁湯中的藥物成分可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)酶的活性，促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放或代謝，使神經(jīng)遞質(zhì)水平恢復(fù)正常，從而改善大鼠的精神狀態(tài)和行為活動(dòng)。同時(shí)，三仁湯對(duì)HPA軸的調(diào)節(jié)作用也間接影響了神經(jīng)內(nèi)分泌功能。抑制HPA軸的過(guò)度激活，減少了應(yīng)激激素對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，有助于維持神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的穩(wěn)定。在調(diào)節(jié)水鹽代謝方面，脾胃濕熱證可導(dǎo)致機(jī)體水鹽代謝失衡，本實(shí)驗(yàn)中，脾胃濕熱證組大鼠血清中的ALD含量顯著升高，ALD主要作用于腎臟，促進(jìn)鈉離子的重吸收和鉀離子的排泄，其含量升高可能導(dǎo)致水鈉潴留，加重肢體困重、水腫等脾胃濕熱證的癥狀。三仁湯各劑量組能顯著降低ALD含量，表明三仁湯能夠調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠的水鹽代謝。三仁湯通過(guò)清熱利濕，促進(jìn)體內(nèi)多余水分和濕氣的排出，減輕水鈉潴留，從而改善脾胃濕熱證的相關(guān)癥狀。同時(shí)，三仁湯對(duì)ADH的調(diào)節(jié)作用也與水鹽代謝密切相關(guān)。脾胃濕熱證組大鼠血漿中ADH含量升高，三仁湯能降低ADH含量，可能通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦滲透壓感受器的功能，影響ADH的分泌，從而維持體內(nèi)的水平衡。綜上所述，三仁湯治療脾胃濕熱證的作用機(jī)理是多方面的，通過(guò)調(diào)節(jié)HPA軸功能、改善神經(jīng)內(nèi)分泌和水鹽代謝等，恢復(fù)機(jī)體的生理平衡，達(dá)到清熱祛濕的治療效果。本研究為三仁湯在臨床治療脾胃濕熱證中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，有助于進(jìn)一步拓展其臨床應(yīng)用范圍，提高臨床治療效果。五、研究結(jié)論與展望5.1研究結(jié)論本研究通過(guò)構(gòu)建脾胃濕熱證大鼠模型，深入探討了三仁湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠行為學(xué)及HPA軸相關(guān)指標(biāo)的影響，得出以下結(jié)論：在行為學(xué)方面，造模后的脾胃濕熱證大鼠出現(xiàn)明顯的行為學(xué)異常，表現(xiàn)為倦怠、嗜臥懶動(dòng)，對(duì)周圍環(huán)境刺激反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)量顯著減少，飲食飲水減少，大便溏泄或粘膩，體溫升高等。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，脾胃濕熱證組大鼠的中央格停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，空間認(rèn)知能力明顯下降。給予三仁湯治療后，大鼠的行為學(xué)癥狀得到明顯改善，活動(dòng)逐漸增強(qiáng)，飲食量和飲水量增加，大便恢復(fù)正常，體溫恢復(fù)到正常水平。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，三仁湯各劑量組大鼠的中央格停留時(shí)間均有不同程度縮短，空間認(rèn)知能力有所恢復(fù)。這表明三仁湯能夠調(diào)節(jié)脾胃濕熱證大鼠的行為學(xué)異常，使其逐漸恢復(fù)正常的精神狀態(tài)和行為活動(dòng)。在HPA