第50講微生物的培養(yǎng)技術及應用

課標內容（1）闡明在發(fā)酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前

提。（2）闡明無菌技術是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污

染的技術。（3）舉例說明通過調整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。

⑷概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的常用

方法。（5）概述稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數法是測定微生物數量的常用方

法。

考點一微生物的基本培養(yǎng)技術

基礎?精細梳理夯實必備知識

1.培養(yǎng)基的配制

（I）培養(yǎng)基的概念、類型和用途

行外人們按照微正物和得界物質的不同需求.配制

電少出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質

按物理「液體培養(yǎng)基:工業(yè)生產

性;嬴“他培養(yǎng)基:微生物分離、鑒定、活

-凝固劑：瓊脂菌計數

「選擇培養(yǎng)基：富集、分離出特定的微

坦山生仇

途分

L鑒別培養(yǎng)基:鑒別不同種類的微生物

力不補用以培養(yǎng)、分尚、鑒定、保存微生物或枳累其

一代謝物

⑵培養(yǎng)基的配方

①主要營養(yǎng)物質：水、碳遮、氮源、無機鹽。

②其他條件：pH、特殊營養(yǎng)物質和氧氣。如下表:

微生物乳酸菌霉菌細菌厭氧微生物

特殊需添加維生pH調至酸pH調至中性

無氧

求素性或弱堿性

2.無菌技術

（I）目的獲得純凈的培養(yǎng)物。

（2）關鍵防止雜菌污染。

(3)常用方法消毒和滅菌。

(4)無菌技術的主要方法及適用對象(連一連)

|耐操作府象|季玄

【.培養(yǎng)基①妁燒滅菌

a.消毒U.接種環(huán)②干熱火菌

M.掾作者③巴氏消毒

雙手

④紫外線消毒

h滅菌IV.培養(yǎng)皿

、'.無菌室⑤化學藥物消盤

\1.牛奶/⑥濕熱滅菌

3.微生物的純培養(yǎng)

⑴概念辨析

1,…］接種F培養(yǎng)基內,在介適條件下形成的

I跖養(yǎng)物J含特定種類微生物的群體

|純培"養(yǎng)物)?由單?個體繁殖所於得的微生物群體

,分散的微生物在適宜的生體培界它的面

廠嬴1?或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有二

----------定形態(tài)結構的子細胞群體

|純焉養(yǎng)］?獲得純培養(yǎng)物的過程

(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟

（0韋?］稱取去皮的馬鈴磐2（N）g、切塊一加水I000mL、

居I加熱煮沸一紗布過濾一加2。g葡萄糖一加

I0介制IB?2（）g瓊脂一用蒸溜水定容至I（）。（）mL

，廣培養(yǎng)基滅菌：濕熱滅菌（商壓蒸汽滅菌）法

直fb.培養(yǎng)皿火茵：丁熱火菌法

a.條件：待培養(yǎng)基冷卻至50七左右時，住酒精燈

火焰附近倒平板

b.操作步驟:

一

倒

平

板

c.I、II、III中的滅曲方法是灼燒滅菌

>

!d.IV中的操作需要等待培養(yǎng)基冷卻凝固后才能進行

接

種方法：方板劃線法

和

分

離原理：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表而連續(xù)劃線

一的操作，將密集的菌種逐步稀粒分散到培

養(yǎng)基的表面經數次劃線后培養(yǎng),可以分

慮得到單菌落

培方法：將接種后的平板和一個未接種的平板倒

養(yǎng)置,放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

群

母條件：空七左右

甫

一［時間:24-4?h

I情境推理

下圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請分析并回答

下列問題：

AB

⑴獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？.

⑵某同學在純化土壤中的細菌時，發(fā)現培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的

原因是什么？應當怎樣操作才可避免此種現象？

O

（3）接種操作為什么一定要在火焰附近進行？

提示（1）獲得圖A效果的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得圖B效果的接種方

法為平板劃線法

①將接種⑧將平板倒置,

環(huán)放在火放入培養(yǎng)箱中

焰上灼燒.培養(yǎng)

直到接種

環(huán)的金屬⑦灼燒接種環(huán).

絲燒紅待其冷卻后,從

第?次劃線的

末端開始作第

二次劃線。重

②在火焰夏以上操作，作

變冷卻接第三、四、五次

種環(huán),同劃線，注意不要

時，拔出將最后一次的

裝有酵母劃線與第一次

菌培養(yǎng)液的劃線相連

的試管的

棉塞⑥在火焰附

近將皿蓋打

③將試開一條縫隙,

管口通，用接種環(huán)在

過火焰培養(yǎng)基表面

迅速劃三至

八條平行線,

蓋上皿蓋

④在火焰

附近用接⑤將試管u

種環(huán)蘸取通過火焰，

一環(huán)菌液并塞上棉塞

(1)實驗成功關鍵點G

第?次劃線及每次劃線之前都需灼燒接

種環(huán)滅菌.劃線操作結束仍需灼燒接

一

次種環(huán)

劃

線灼燒接種環(huán)之后,要等其冷卻后才能伸

入菌液,以免溫度太高殺死菌種

第在作第二次以及K后的劃線操作時,總

二是從上一次劃線的末端開始劃線,這樣才

次

能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而

劃

線逐步減少，最終得到由單個細菌繁殖而

來的菌落

(，

劃

劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連

線

要劃線用力大小要適當,防止用力過大將

求

培養(yǎng)基劃破

(2)平板劃線法操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的

——①一——②―—③——

第一次劃線每次劃線前最后一次劃

前灼燒.灼燒-線結束灼燒

殺死上次劃線殺死接種壞上

避免接種環(huán)上結束后接種環(huán)殘留的菌種，

可能存在的微上殘留的菌種.避免微生物污

生物污染培養(yǎng)使卜次劃線的染環(huán)境和感染

物菌種均來Hh操作者

次劃線的末端

典例?精心深研提升學科素養(yǎng)

考向1結合培養(yǎng)基的配制和無菌技術，考查科學思維

1.（2024?廣東深圳聯考）某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的固體培養(yǎng)基

上輕輕按一下，然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個手指尖在貼有“洗手后”標

簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

24h后，發(fā)現貼有“洗手后”標簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。下列相關敘述錯誤的是

（）

A.這個實驗中需要進行滅菌處理的材料用具有培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基等

B.“將手指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當于微生物培養(yǎng)中的接種

C.從實驗結果來看，洗手后的操作不會污染培養(yǎng)基

D.培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質、核酸等物質所必需的

答案C

解析從實驗結果看，貼有“洗手后”標簽的培養(yǎng)皿中菌落較少，并不能說明洗

手后的操作不會污染培養(yǎng)基，C錯誤。

2.（2024.西安高新一中模擬）在實驗室培養(yǎng)微生物，需要人為地為微生物提供適宜

的營養(yǎng)和環(huán)境條件。下列關于培養(yǎng)基配制的說法正確的是（）

A.培養(yǎng)基中需要碳源、氮源、水和無機鹽齊全

B.培養(yǎng)基中必須添加瓊脂

C.培養(yǎng)基制備中均需調節(jié)pH至酸性

D.無論哪種培養(yǎng)基均需要滅菌

答案D

解析培養(yǎng)固氮微生物時，培養(yǎng)基中可以不添加氮源，A錯誤；只有配制固體（或

半固體）培養(yǎng)基時才需要添加瓊脂，B錯誤；適宜的pH是微生物生長的必需條件,

因此配制過程中需要調節(jié)pH,培養(yǎng)霉菌時一般需要將pH調至酸性，培養(yǎng)細菌

時，一般需要將培養(yǎng)基調至中性或弱堿性，C錯誤；培養(yǎng)基均需要滅菌，D正確。

考向2結合微生物的純培養(yǎng)，考查科學探究能力

3.（2024?東北育才中學模擬）下列關于“酵母菌的純培養(yǎng)”實驗的敘述，錯誤均是

（）

A.馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養(yǎng)成分

B.接種環(huán)滅菌時，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過火焰灼燒

C.平板劃線時，接種環(huán)應在固體培養(yǎng)基表面輕輕地連續(xù)劃線

D.完成平板劃線后，應將平板立刻倒置培養(yǎng)以免污染培養(yǎng)基

答案D

解析馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養(yǎng)成分，如碳源、氮

源和無機鹽等，A正確；接種環(huán)滅菌時，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過火焰

灼燒，防」卜雜菌的污染，R正確；平板劃線時，接種環(huán)應在固體培養(yǎng)基表而輕輅

地連續(xù)劃線，防止劃破培養(yǎng)基表面，影響實驗結果的觀察，C正確；完成平扳劃

線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，再將平板倒置培養(yǎng)，D錯誤。

4.（2024?廣州聯考）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種分解尿素的細菌，培養(yǎng)

結果如圖所示。下列敘述錯誤的是（）

A.為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

B.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整

C.圖中I、II區(qū)的細菌數量均太多，應從III區(qū)挑取單菌落

D.該實驗結果出現了單菌落，能達到菌種純化的目的

答案B

解析倒平板后無需晃動，B錯誤。

考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數

基礎?精細梳理夯實必備知識

1.選擇培養(yǎng)基

概］在微生物學中,允許特定種類的微生物生長.

念)同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基

篩選上堆中分解尿素的細菌的選擇培養(yǎng)基是以

尿素為唯一的倔源的

將培養(yǎng)基放在應遇環(huán)境中培養(yǎng),"I?分離出耐高

溫的微生物

名師解讀

常見選擇培養(yǎng)基舉例

①缺少氮源的培養(yǎng)基耳以篩選能利用大氣中N2的微生物。

②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細菌，篩選出真菌。

③無有機碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

2.稀釋涂布平板法

(1)系列稀釋操作

取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。

稀糕液稀擇液稀擇液稀擇液稀樣液稀樣液

(2)涂布平板操作

取0.1mL菌液,滴加到將涂布據浸在盛有迪

培養(yǎng)基表面。里的燒杯中。

用涂布器將菌液均勻地涂將涂布器放在火焰上灼

布在培養(yǎng)基表面涂布時“燒.待酒精燃盡、涂布

轉動擊養(yǎng)皿.使涂布均勻器冷卻后.再進行涂布。

3.微生物的數量測定

(1)利用稀釋涂布平板法計數

①為了保證結果準確，一般選擇菌落數為延勺平板進行計數，并且在同一

稀釋度下，應至少對3_個平板進行重復計數，并求平均值。

②統(tǒng)計結果往往比實際值少。

⑵利用顯微鏡直接計數

①需用特定的細菌計數板或血細胞計數板。

②統(tǒng)計結果一般是活菌數和死菌數的總和。

4.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數的實驗操作

(1)實驗原理

V、①土壤中的細菌之所以能分解尿素,是因為它

分離丫們能合成麻侮

細人②配制以顯素為唯一翅源的培養(yǎng)層,能夠在該

培養(yǎng)基中生長的細菌就是能分解尿素的細菌

(2)操作步驟

從酸堿度接近中性且潮濕的土壤中取樣

-先鏟去表層上,在距地表cm的上堆

層取樣

K選用一定稀釋范困的稀釋液進行培養(yǎng).

?保證於得菌落數在3。?3。。的平板進行

準------

計數

不同種類的微生物，往往需要不同的

培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間

每隔24h統(tǒng)計一次菌落數”,選取菌落

數目穩(wěn)定時的汜殺作為結果

(3)實驗結果分析與評價

5.分解纖維素的微生物的分離

(1)分離方法與原理

②I)-利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)

因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素,所以能夠

迷Q-分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而

大量繁殖

⑵纖維素分解菌的培養(yǎng)基成分及鑒定原理

伊藜以纖維素為唯一碳源；加入剛果紅染料

［的成分］I-------------

IL考點速覽

⑴血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測定。

(2023?江蘇卷，7D)(X)

提示血細胞計數板不適用于微小的細菌計數。

(2)某同學欲分離產服酷菌，可在選擇培養(yǎng)基中添加尿素作為唯一氮源。(2022.江

蘇卷，3B)(V)

⑶稀釋涂布平板法和平板劃線法均能得到單菌落，都可用于細菌計數。(2021.浙

江6月選考，17C)(X)

提示平板劃線法只能用于細菌分離，不能用于細菌計數。

⑷利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物。

(202()?浙江7月選考，19A)(X)

提示尿素固體培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，以尿素為唯一氮源，不能利用尿素的微

生物因缺乏可利用的氮源而不能在此培養(yǎng)基上生存，故尿素固體培養(yǎng)基的作用并

不是迅速殺死這些微生物。

■1情境推理

1.為什么只有能分解尿素的微生物才能在尿素固體培養(yǎng)基上生長？

提示分解尿素的微生物能合成腺酶，而腺酶可將尿素分解成氨，從而為微生物

提供氮源

2.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是

提示生物與環(huán)境具有相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的

含量相對較高，從這種土樣中獲得目的微生物的就率要高于普通環(huán)境

3.在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅對纖維素分解菌進行選擇形成透明圈的

原因是_________________________________________________________________

提示剛果紅與纖維素形成紅色復合物，而當纖維素被纖維素分解菌分解后，復

合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現以這些菌為中心的透明圈

典例?精心深研提升學科素養(yǎng)

考向1結合微生物的選擇培養(yǎng)，考查科學思維

1.（2024?廣東佛山模擬）野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)

缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，下圖為純化某氨

基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操

作步躲，D、E為菌落，下列敘述錯誤的是（）

A.圖中①②④為基本培養(yǎng)基，③為完全培養(yǎng)基

B.A操作的目的是提高突變頻率，增加突變株的數量

C.B的正確操作是用涂布器把菌液均勻地涂布在②表面

D.經C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進行純化培養(yǎng)

答案A

解析野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無

法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，根據題圖可知，圖中①②④為完

全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，A錯誤；紫外線可以提高突變的頻率，從而增加突

變株的數量，B正確；B的正確操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將

菌液均勻地涂布在②表面，C正確；從圖中可知，D在基本培養(yǎng)基中無法生長，

在完全培養(yǎng)基中可生長，說明D是氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株菌落，故經C過程

原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D菌落進行純化培養(yǎng)，D正確。

2.（2024?江西新余調研）耐高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產中有很大的實用性。嗜熱

菌可以在高溫環(huán)境中生存，其產生的淀粉酶最適溫度較高。篩選能產生耐高溫淀

粉酶的嗜熱菌過程如圖1所示，其中I號培養(yǎng)基用碘液處理的結果如圖2所示。

下列敘述正確的是（）

Q

/挑出菌落

o①②

)號號

甲III

嗜熱菌樣品乙培養(yǎng)基培養(yǎng)基內

圖1

周圉顯藍色

的菌落

I。。'松國周圍不抽藍

色的菌落

圖2

A.圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種

B.倒平板后對培養(yǎng)皿進行高壓蒸汽滅菌

C.淀粉是圖2所示固體培養(yǎng)基的唯一碳源

D.甲、乙試管中均為選擇培養(yǎng)基

答案A

解析淀粉與碘液反應呈現藍色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養(yǎng)基上生長時可釋放

淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，故周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種，A正確；

倒平板前培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都已滅菌處理，因此倒平板后不需要對培養(yǎng)皿再進行高

壓蒸汽滅菌，B錯誤；據圖2可知，培養(yǎng)基上出現周圍顯藍色的菌落和周圍不顯

藍色的菌落，因此淀粉可能不是圖2所示固體培養(yǎng)基的唯一碳源，C錯誤；圖1

中①過程是梯度稀釋，②過程是用稀釋涂布平板法進行接種，因此甲、乙試管主

要是對嗜熱菌樣品進行稀釋，不具備選擇作用，不屬「選擇培養(yǎng)基，D錯誤。

考向2結合微生物的分離與計數，考查科學思維

3.（2024.河北石家莊調研）北京冬奧會食堂讓各國運動健兒愛上中國味道，其餐余

垃圾在垃圾集中點采用生化+霧化+膜過渡技術處理后，可以達到無二次污染的

標準。為篩選對抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”處理的效

率，研究人員將餐余垃圾機械化處理后加入裝有無菌水的錐形瓶中制備餐余垃圾

浸出液，然后進行如圖所示操作，下列說法錯誤的是()

③培養(yǎng)出

培養(yǎng)一②大最高

段時間

一效降解

接種滴加碘液接種

X培①淀粉的

餐余垃圾丫培養(yǎng)基地生物

養(yǎng)基

浸出液

A.餐余垃圾浸出液在接種前通常需要進行高壓蒸汽滅菌處理

B.可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X培養(yǎng)基上

C.X培養(yǎng)基含有淀粉和抗生素，Y培養(yǎng)基是不含瓊脂的液體培養(yǎng)基

D.圖中高效降解淀粉的微生物是⑤，可根據菌落特征初步判斷微生物類型

答案A

解析若對餐余垃圾浸出液進行高壓蒸汽滅菌會殺死菌種，導致實驗失敗，A錯

誤；微生物的接種方法包括稀釋涂布平板法和平板劃線法，可用稀釋涂布平板法

將餐余垃坡浸出液接種在X培養(yǎng)基上，B正確；結合題意可知，本實驗的目的

是篩選對抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，故圖中X培養(yǎng)基以淀粉為唯

一碳源，且應添加抗生素起選擇作用；Y培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，進行擴大培養(yǎng)，

其中不含凝固劑瓊脂，C正確；淀粉遇碘變藍色，加入碘液后，能夠分解淀粉的

菌落周圍出現透明圈，圖中能高效降解淀粉的微生物是⑤(透明圈最大)，不同微

生物形成的菌落特征不同，可根據菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。

4.(2024?廣東湛江模擬)自生固氮菌是土壤中能獨立進行固氮的細菌。科研人員進

行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖。已知

步驟④獲得的3個平板的菌落數分別為9()、95、1()(),對照組平板為()。下列相

關敘述正確的是()

().5().50.1

擴大

mLmLmL

培

養(yǎng)

固

氮

能

力

鑒

定

10g無菌水懸浮液無菌水化培養(yǎng)

A.步驟②振蕩20min的目的是擴大菌種數量，屬于選擇培養(yǎng)

B.步驟④一⑤使用接種環(huán)劃線接種，使用前需要灼燒滅菌

C.lg土壤中平均自生固氮菌數約為9.5X106個

D.所用培養(yǎng)基應加入碳源、氮源、無機鹽、水和瓊脂

答案c

解析步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中，

A錯誤；由題圖可知，步驟⑤平板中的菌落分布均勻，故步輟④一⑤所用的接種

工具是涂布器，接種方法是稀釋涂布平板法，B錯誤；1g土壤中平均自生固氮

菌數約為（90+95+100）/3:0.1X104=9.5X1（）6（個），C正確；本實驗需要分離的

自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，故所用培養(yǎng)基中不能加入氮源，D

錯誤。

跳出題海

兩種純化細菌的方法的比較

項目平板劃線法稀釋涂布平板法

將菌液進行一系列的梯度稀釋，

通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表然后將不同稀釋度的菌液分別涂

面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進

純化原理種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。行培養(yǎng)。稀釋度足夠高時，聚集

經數次劃線后培養(yǎng)，可以分離得在一起的微生物將被分散成單個

到單菌落細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成

堂菌落

主要步驟平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作

接種工具接種環(huán)涂布器

平板示意圖00

■關鍵-真題必刷

1.（2023?江蘇卷，7）下列關于細菌和酵母菌實驗的敘述正確的是（）

A.通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比

B.通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌菌落大

C.通常細菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌

D.血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測定

答案A

解析微生物種類不同，所需營養(yǎng)物的碳氮比也不同，具有高碳氮比的生物需要

高碳氮比的營養(yǎng)物，反之則低；酵母菌的碳氮比高于細菌，所以培養(yǎng)酵母菌的培

養(yǎng)基需要更高的碳氮比，A正確；通常細菌的生長速度比酵母菌快，但形成的菌

落不一定大于酵母菌菌落，這與細菌種類有關，B錯誤；微生物培養(yǎng)基通常都采

用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯誤；血細胞計數板適用于酵母菌的計數，不適用于

微小的細菌計數，D錯誤。

2.（2023.湖南卷，5）食品保存有干制、腌制、低溫保存和高溫處理等多種方法。

下列敘述錯誤的是（）

A.干制降低食品的含水量，使微生物不易生長和繁殖，食品保存時間延長

B.腌制通過添加食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長和繁殖

C.低溫保存可抑制微生物的生命活動，溫度越低對食品保存越有利

D.高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，并可破壞食品中的酶類

答案C

解析干制能降低食品中的含水量，使微生物不易生長和繁殖，進而延長食品保

存時間，A正確；腌制通過添加食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生

長和繁殖，B正確；低溫保存可以抑制微生物的生命活動，但不是溫度越低越好,

一般食品保存溫度為零上低溫，C錯誤；高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，

并通過破壞食品中的醛類，降低酶類對食品有機物的分解，有利于食品保存，D

正確。

3.（2022.湖北卷，5）滅菌、消毒、無菌操作是生物學實驗中常見的操作。下列敘

述正確的是（）

A.動、植物細胞DNA的提取必須在無菌條件下進行

B/散生物、動物細胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染

C.為防止蛋白質變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白膿培養(yǎng)基進行滅菌

D.可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌

答案D

解析動、植物細胞DNA的提取不需要在無菌條件下進行，A錯誤；動物細胞

培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)一

般不能加入抗生素，B錯誤；一般用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基進行滅菌,

以防止雜菌污染，C錯誤；可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞

培養(yǎng)瓶等進行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。

4.（2023?廣東卷，10）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等度棄

物中角蛋白的嗜熱菌。根據堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判

斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是（）

堆肥時間/天

A.A點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基

B.8點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

C.5點時取樣、蛋白陳氮源培養(yǎng)基

DC點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

答案D

解析研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此

目標菌具有既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白的功能，所以在。點時取樣,

并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，D正確。

5.（2022?江蘇卷，3）下列是某同學分離產胭酶菌的實驗設計，不合理的是（）

A.選擇農田或公園土壤作為樣品分離目的菌株

B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源

C.適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落

D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產麻酶菌株

答案D

解析農田或公園土壤中含有較多的含腺酶的微生物，A正確；為了篩選可分解

尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應選擇尿素作為唯一氮源，產腺酶的微生物在該培養(yǎng)

基上能生長，B正確：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，

來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；在細菌分解尿素的化學反應中，細菌

合成的腺酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因

此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進一步鑒

定，D錯誤。

6.（2023?山東卷，15）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（）

A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)

B.平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒

C.接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄

D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成胭酶的微生物

答案D

解析不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯誤；平板涂布時涂布器使用前

必須滅菌，R錯誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，

不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯誤；胭酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯

一氮源的平板上，能合成腺酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進行生長繁殖，

不能合成腺酶的微生物因缺乏氮源而無法生長，因此以尿素為唯一氮源的平板能

分離出合成腺酶的微生物，D正確。

7.（2023?全國乙卷，37改編）某研究小組設計了一個利用作物秸稈生產燃料乙醇的

小型熨驗。其主要步驟是：先將粉碎的作物秸稈燃放在底部有小孔的托盤中，噴

水浸潤、接種菌T,培養(yǎng)一段時間后，再用清水淋洗秸稈堆（清水淋洗時菌T不

會流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進行乙醇發(fā)酵（酒精發(fā)酵）。實驗流程

如圖所示。

種茵T清水淋洗

回答下列問題：

（1）在粉碎的秸稈中接種菌T,培養(yǎng)一段時間后發(fā)現菌T能夠將秸稈中的纖維素

大量分解，其原因是。

⑵采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以用淋洗液為原料制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中還

需要加入氮源等營養(yǎng)成分，氮源的主要作用是_______________（答出1點即可）。

⑶將酵母菌接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，擰緊瓶蓋，置于適宜溫度下培養(yǎng)、發(fā)酵。

擰緊瓶蓋的主要目的是。但是在酵母菌發(fā)酵過程中，還需適

時擰松瓶蓋，原因是___________________________________________________

發(fā)酵液中的乙醇可用溶液檢測。

⑷本實驗收集的淋洗液中的可以作為酵母菌生產乙醉的原料。與以糧

食為原料發(fā)酵生產乙醇相比，本實驗中乙醇生產方式的優(yōu)點是________________

答案（1）菌T能夠產生纖維素酶，纖維素酶可將纖維素分解

⑵為酵母菌蛋白質合成提供原料

（3）為酵母菌進行無氧呼吸產生乙醇創(chuàng)造無氧條件乙醇發(fā)酵有CO2產生，擰松

瓶蓋可以放出CCh,避免因瓶內氣壓過大引起危險酸性重格酸鉀

（4）葡萄糖節(jié)約糧食，實現了廢物利用

解析（1）菌T能夠將纖維素變成酵母菌發(fā)酵所需的葡萄糖，利用的是其能夠產

生分解纖維素的酶，能夠高效催化纖維素分解。（2）N元素是構成體內一些物質

的必需元素，如氨基酸、核昔酸等。（3）擰緊瓶蓋的主要目的是營造無氧條件。

酵母菌無氧呼吸產生乙醇的同時還會產生二氧化碳，擰松瓶蓋可以釋放二氧化

碳，防止容器壓力過大引起危險。酸性條件下重輅酸鉀溶液可以用來鑒定乙醇。

（4）纖維素分解產生的葡萄糖可以用來作為發(fā)酵原材料，從社會責任感角度和實

際生產角度出發(fā)分析即可，如節(jié)約糧食，生產成本低，實現了廢物利用，保護環(huán)

境等。

限時強化練

（時間:40分鐘）

【對點強化】

考點一微生物的基本培養(yǎng)技術

1.（2024.東北育才中學）地衣芽抱桿菌具有調節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡，增加動物機

體抗病能力的功能。仔兔飼喂地衣芽抱桿菌20?40天后，其免疫器官生長發(fā)育

迅速，血漿中T淋巴細胞值較對照組高。下列敘述錯誤的是（）

A.培養(yǎng)地衣芽泡桿菌時，需要將培養(yǎng)基調至酸性

B.可用液體培養(yǎng)基對地衣芽抱桿菌擴大培養(yǎng)

C.使用后的培養(yǎng)基在丟棄前要經過滅菌處理

D.地衣芽泡桿菌改變了仔兔腸道菌群的結構

答案A

解析地衣芽施桿菌屬于細菌，其培養(yǎng)基一般呈中性或弱堿性，A錯誤；液體培

養(yǎng)基可使菌種與培養(yǎng)液更好地接觸，有利于菌種的擴大培養(yǎng)，B正確；使用后的

培養(yǎng)基在丟棄前要經過滅菌處理，防止對環(huán)境造成污染，C正確；地衣芽匏桿菌

能調節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡，改變了仔兔腸道菌群的結構，D正確。

2.（2024?山東濰坊模擬）金黃色葡萄球菌是一種常見的病原菌，在血平板（完全培養(yǎng)

基中添加適量血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色-某研究小

組通過稀釋涂布平板法測定了某處土壤中金黃色葡萄球菌數量，相關說法錯誤的

是（）

A.從功能上分類，血平板屬于選擇培養(yǎng)基

B.在制作血平板時需要在平板冷卻后加入血液，防止高溫破壞血細胞

C.待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后應倒置培養(yǎng)，防止水分過度蒸發(fā)

D.煲驗統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的煲際數目低

答案A

解析根據題干信息可知，血平板屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯誤。

3.（2024?成都七中診斷）下圖為微生物的實驗室培養(yǎng)的有關操作，下列相關敘述錯

誤的是（）

①把接種工②將接種匚具③接種

具灼燒至在火焰附近

變紅冷卻

A.步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌

B.步驟②中，將接種工具冷卻時不宜距酒精燈火焰太遠

C.圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經培養(yǎng)后獲得單個菌落

D.接種后應將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)后可以根據結果進行微生物計數

答案D

解析步驟①中，接種前灼燒接種環(huán)至變紅，目的是殺滅接種環(huán)上可能引起污染

的微生物，A正確；步躲②中，將接種工具冷卻時不宜距酒精燈火焰太遠，防止

受到雜菌污染，B正確；圖中所示的接種方法是平板劃線法，目的是使接種的菌

種逐漸稀釋，經培養(yǎng)后獲得由單個菌體繁殖而來的菌落，C正確；圖示的平板劃

線法不能用于微生物的計數，D錯誤。

4.（2024.潦河高中質檢）下圖為實驗室培養(yǎng)和純化醛母菌過程中的部分操作步驟，

下列說法錯誤的是（）

A.①步驟使用的培養(yǎng)基是己經滅菌的培養(yǎng)基

B.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行

C.③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒了5次

D.④步驟操作時，不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線用連

答案C

解析接種環(huán)在每次劃線前和接種結束后都要通過灼燒來滅菌，所以③到④的過

程中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污

染，由此可見，③到④的過程中共需灼燒接種環(huán)6次，C錯誤。

考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數

5.（2024?安徽淮北調研）平板劃線法和稀釋涂布平板法是分離并純化微生物的常

用方法。下列相關敘述正確的是（）

A.平板劃線法分離微生物前一般需要將菌液進行梯度等比稀釋

B.細菌的純化培養(yǎng)通常比霉菌需要更高的溫度和更少的培養(yǎng)時間

C.使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的微生物數量是活菌加死菌的總和

D.接種后的平板放置在搖床上倒置培養(yǎng)，防止雜菌的污染

答案B

解析平板劃線法分座微生物前一般不需要將菌液進行梯度等比稀釋，A錯誤；

細菌的培養(yǎng)溫度一般為30?37℃,霉菌的培養(yǎng)溫度一般為25?28℃,B正確；

使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的微生物數量是活菌的數量，不包括死菌的數量，C錯

誤；接種后的平板放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，防止雜菌的污染，倒置培養(yǎng)的目的

是防止皿蓋上的冷凝水滴落到平板表面，同時也能防止培養(yǎng)基中水分過快揮發(fā)，

D錯誤。

6.（2024?江蘇南京、鹽城模擬）為了解病原微生物對四種抗生素的敏感程度，某研

究小組進行了相關藥敏實驗，圖1為部分實驗器材。將含有相同濃度的抗生素

I?N四個大小相同的紙片分別貼在長滿測試菌的平板上，實驗結果如圖2。下

列相關敘述正確的是（）

含抗生泰

的紙片

抑菌闔中

的菌落

①

圖2

A.為獲得長滿測試菌的平板，需要使用圖I中器對①②③

B.圖2中II形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對藥物較敏感

C.圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素IV作用下產生了突變株

D.不同抗生素在平板上的擴散速度不同會影響實驗結果

答案D

解析為獲得長滿測試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使

用圖1中①酒精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進行，酒精燈對涂布器進行灼燒滅

菌）、④涂布器和③培養(yǎng)基，②為接種環(huán)（接種工具），是平板劃線法接種時需要使

用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長滿測試菌的平板，A錯誤；圖2中n處

透明圈最小，說明此處微生物對該藥物敏感度最低，B錯誤；突變株的出現不是

在抗生素的作用下產生的，抗生素只能起選擇作用，C錯誤。

7.（2024?山東煙臺模擬）養(yǎng)殖業(yè)中常用的土霉素（一種抗生素）在畜禽類糞便和污水

中的殘留量較高?？蒲腥藛T欲篩選一種能高效降解土霉素的菌株，以解決養(yǎng)殖業(yè)

廢棄物中土霉素含量超標問題。下列敘述錯誤的是（）

A.制備培養(yǎng)基時應先滅菌后定容再倒平板

B.篩選時隨轉接次數的增加，土霉素的用量也應逐步增加

C.利用稀釋涂布平板法測得的高效降解上霉素菌株的密度較實際值低

D.若計數時平板上菌落過于密集，則應該進一步提高稀釋的倍數

答案A

解析制備培養(yǎng)基時應先定容再滅菌，滅菌后定容容易導致培養(yǎng)基污染，A錯誤。

8.（2024.河北邢臺調研）屠宰場廢棄血污不經過處理直接排放，會對環(huán)境造成污

染。傳統(tǒng)的處理方法有填埋法和焚燒法等。填埋法易造成地表環(huán)境、地下水資源

污染。焚燒法處理會造成大氣污染，且廢棄物中所含的蛋白質資源不能得到有效

利用。研究人員以屠宰場血污堆積土壤為分離基質，利用血平板培養(yǎng)基（添加了

動物血液），分離出了高效降解血紅蛋白的菌株，并初步用于降解廢棄血液，生

產氨基酸液態(tài)肥料。下列相關敘述錯誤的是（）

活

二

一-

二

-性

！!

二

-二

!鑒

一

M二

二

L-J二

二

定

二J-

)D

A.題述菌株分離純化過程中用到了稀釋涂布平板法和平板劃線法

B.菌株培養(yǎng)后進行計數，只能采用稀釋涂布平板法

C.血平板培養(yǎng)基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋臼酶的活性往往較高

D.利用該菌株降解廢棄血液可在保護環(huán)境的同時實現資源的可持續(xù)利用

答案B

解析菌株培養(yǎng)后進行計數，除了采用稀釋涂布平板法外，還可以用顯微鏡直接

計數法，B錯誤。

【綜合提升】

9.（2024?山東棗莊模擬）如圖所示，自來水經濾膜過濾后，轉移到牛肉膏蛋白陳培

養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)48h,染色后統(tǒng)計變色菌落數目為165。下列說法正確

的是（）

（過濾5L自來水

1?而培養(yǎng)皿

膜漏斗

A.若培養(yǎng)基含伊紅一亞甲基藍，大腸桿菌菌落呈藍綠色

B.自來水中大腸桿菌濃度是33（個1一］）,比真實植大

C.為了提高準確度，需設重復實驗，但不用空白對照

D.若培養(yǎng)基菌落數目大于300,可適當減少自來水量

答案D

解析若培養(yǎng)基含伊紅一亞甲基藍，大腸桿菌菌落呈深紫色，有金屬光澤，A錯

誤；自來水中大腸桿菌濃度是165￡=33(個1r)，由于兩個或多個大腸桿菌可

能長成一個菌落，因此比真實值小，B錯誤；為了提高準確度，需設重復實驗，

同時需要設置空白對照，C錯誤；若培養(yǎng)基菌落數目大于300,說明細菌數目較

多，可適當減少自來水量，D正確。

10.(2024?福州一中質檢)對土壤中分解纖維素的微生物的研究與應用，使人們能

夠利用秸稈等廢棄物生產泗精，用纖維素酶處理服裝面料等。為了尋求高效降解

纖維素的微生物，某科研團隊進行了纖維素優(yōu)勢分解菌的篩選實驗。主要步驟如

下：

①制備培養(yǎng)基。②纖維素分解菌的分離、純化。取富集培養(yǎng)后的土樣培養(yǎng)液，經

適當稀釋后，移取培養(yǎng)液各0.1mL分別接種到能分別篩選出細菌、真菌和放線

菌的固體培養(yǎng)基上進行分離、純化培養(yǎng)。③纖維素分解菌的初篩。將已經純化的

菌株接種到同一個以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，使用剛果紅染色法，根

據培養(yǎng)基平板上透明圈直徑(H)與菌落直徑(h)比值的大小，初步篩選出纖維素優(yōu)

勢分解菌。

回答下列問題：

(1)實驗室培養(yǎng)微生物時，獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是。

⑵微生物的接種方法很多，最常用的是平板劃線法和0步驟

甲和步驟乙是平板劃線操作中的兩個步驟，步驟甲的操作是將接種環(huán)放在火焰上

灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅；步驟乙的操作是將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，

蘸取環(huán)菌液。從步驟甲至步躲乙的操作過程中，還需進行的操作步驟是

⑶微生物吸收無機鹽的作用是__________________________________________

_____________________________________________________(答出兩點即可)。

(4)步驟②③中，若將稀釋后且富含多種類型微生物的土樣培養(yǎng)液直接涂布于同

一個以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，可能導致錯過優(yōu)勢纖維素分解菌的發(fā)

現，原因是

（5）接種在培養(yǎng)基上初篩分離得到的4個菌株的觀察結果如表。表中H/h的大小

與纖維素酶的有關。據表分析