紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢測教學(xué)目標(biāo)掌握ABO與Rh血型鑒定、交叉配血試驗(yàn)原理、方法與質(zhì)量控制熟悉紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查及鑒定方法了解吸收放散試驗(yàn)一、ABO血型鑒定(一)鹽水介質(zhì)試管法(二)鹽水介質(zhì)玻片法(三)微柱凝膠血型定型檢測卡法(四)質(zhì)量保證:試管法、玻片法、卡式(五)方法學(xué)評價(六)臨床應(yīng)用(七)不一致原因及解決方法ABO血型鑒定原理正向定型:已知得特異性抗體(標(biāo)準(zhǔn)血清)檢查紅細(xì)胞得未知抗原反向定型:已知得血型得標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中得未知抗體A抗原B抗原A和B抗原無A和B抗原抗A抗體抗B抗體抗A、抗B抗體無抗A、抗B抗體ABO血型鑒定結(jié)果判斷正向定型(標(biāo)準(zhǔn)血清+被檢者紅細(xì)胞)反向定型(標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞+被檢者血清)結(jié)果判斷抗A抗B

A型紅細(xì)胞B型紅細(xì)胞O型紅細(xì)胞

+--+-A-++--B++---AB--++-O試管法試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)瓷板法結(jié)果判定

凝膠技術(shù)得原理

反應(yīng)室外管壁反應(yīng)室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液凝膠技術(shù)得原理:A、反應(yīng)室:下端底孔很小,液體在孵育過程中不會流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層:紅細(xì)胞在離心力作用下穿越該層,紅細(xì)胞與反應(yīng)室中得血清分離并與該層液體中得試劑反應(yīng)。C、粘液:親與柱中有一層粘液,作用與“試劑或鹽水層”相同。大家學(xué)習(xí)辛苦了，還是要堅(jiān)持繼續(xù)保持安靜原理:凝膠分子篩與親與效應(yīng)微柱凝膠柱中填充凝膠(葡聚糖),及相應(yīng)試劑(抗體或抗原)。凝膠分子間得間隙只允許游離紅細(xì)胞通過,分子排阻層析原則將發(fā)生凝集反應(yīng)得紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi),而未凝集得游離紅細(xì)胞則穿過微孔運(yùn)動到管底,從而判定有無凝集反應(yīng)。

結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研室微孔板法(四)質(zhì)量保證試管法標(biāo)記加樣量、加樣順序溶血就是一種陽性反應(yīng)玻片法標(biāo)記正定型顯微鏡陰性確認(rèn)微柱凝膠血型定型檢測卡血清標(biāo)本應(yīng)完全取出纖維蛋白,血漿標(biāo)本建議EDTA-K2或枸櫞酸鹽康寧先加紅細(xì)胞懸液,再加血漿或抗體試劑紅細(xì)胞懸液與血漿各加50ul按照說明書操作(四)質(zhì)量保證(五)方法學(xué)評價試管法:常用,廣泛,較玻片法靈敏,結(jié)果準(zhǔn)確,反應(yīng)時間短,結(jié)果不能保存,人為因素大玻片法:操作簡單、無需特殊儀器,適用于血型普查;靈敏度差,反應(yīng)時間長,不能用于反定型,結(jié)果不能保存,人為因素影響大,易發(fā)生血液污染微柱凝膠血型定型檢測卡法:特異性強(qiáng)、靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確,保持時間長,標(biāo)本與試劑用量少,操作可以標(biāo)準(zhǔn)化、自動化,減少了醫(yī)源性污染,但需要專門離心設(shè)備與試劑卡,成本較高輸血治療得首要步驟組織器官移植新生兒溶血病ABO正反定型得臨床意義ABO正反定型不符分析基本程序首先重復(fù)試驗(yàn)重新采集獻(xiàn)血者與受血者血液標(biāo)本查詢受血者既往病史及輸血史與用藥史等多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細(xì)胞錯加試劑或標(biāo)本技術(shù)與操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一致得原因試劑失效或污染細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)溶血現(xiàn)象未能識別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯誤血清異常紅細(xì)胞致敏近期輸血疾病導(dǎo)致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進(jìn)行大量血漿置換治療RhD定型及其常見問題1、Rh定型RhD定型,試管法最經(jīng)典,多使用微柱凝膠卡2、RhD陰性確認(rèn)IgM抗-D陰性三個廠家IgG抗-D進(jìn)行確認(rèn)抗人球蛋白法進(jìn)行確認(rèn)三種IgG抗-D試劑均為陰性,報RhD陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性,報弱D概念:檢測受血者與供血者血液中就是否含有不相配合得成分,就是輸血前確保受血者輸血安全必不可少得試驗(yàn)包括:主側(cè)配血與次側(cè)配血主側(cè)就是受血者血清與供血者紅細(xì)胞相配得一側(cè)次側(cè)就是受血者紅細(xì)胞與供血者血清相配得一側(cè)。三、交叉配血試驗(yàn)交叉配血得主次側(cè)(一)鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)本質(zhì)凝集反應(yīng),直接凝集試驗(yàn)檢測IgM類抗體方法:試管法ABO同型配血,主側(cè)與次側(cè)均無凝集及溶血,表示無輸血禁忌,可以輸血鹽水介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽性陰性(二)抗球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn):又稱Coombs試驗(yàn),就是一種檢查不完全抗體得敏感方法分類:直接抗球蛋白試驗(yàn)與間接抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)原理Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體,連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合得特異抗體,使紅細(xì)胞凝集。直接試驗(yàn):就是檢查被檢紅細(xì)胞上有無不完全抗體間接試驗(yàn):就是檢查血清中游離得不完全抗體直接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白自身抗體間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但就是不能與兩個紅細(xì)胞同時結(jié)合(致敏)。3加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時和兩個不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起抗人球蛋白交叉配血法示意圖抗球蛋白配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)37℃

37℃水浴30分鐘三洗

抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白離心看結(jié)果陽性陰性抗球蛋白試劑上海市血液中心血結(jié)果判讀直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性對照管凝集,陰性對照管不凝集,被檢管凝集,判定為陽性陽性對照管凝集,陰性對照管不凝集,被檢管不凝集,需要做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果(無凝集得被檢管中加入IgG抗-D致敏紅細(xì)胞后離心,出現(xiàn)凝集判陰性,否則重新試驗(yàn)陽性對照管不凝集與(或)陰性對照管凝集,結(jié)果不可信不發(fā)報告,分析原因重做間接抗球蛋白試驗(yàn)陽性對照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng),陰性對照管未呈現(xiàn)凝集反應(yīng),被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果,被檢者血清內(nèi)含有抗體,如果自身對照無凝集,同種抗體;如果被檢者結(jié)果陰性,被檢者血清中未被查出意外抗體。陽性對照管不凝集與(或)陰性對照管出現(xiàn)凝集,實(shí)驗(yàn)失敗。結(jié)果判讀抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝標(biāo)本漏加試劑紅細(xì)胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細(xì)胞過多或過少血清濃度過大孵育時間與溫度不當(dāng)前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗(yàn)鹽水保存不當(dāng)紅細(xì)胞直抗陽性(三)低離子聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)

就是一種快速、簡便、紅細(xì)胞不完全抗體得方法多數(shù)IgG抗體能夠被檢出,但I(xiàn)gG抗-K抗體除外漢族至今未發(fā)現(xiàn)K抗原陽性,也未檢出抗-K抗體聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)紅細(xì)胞表面帶有大量得負(fù)電荷,懸浮在電解質(zhì)溶液中,會吸引大量陽離子,紅細(xì)胞則被擴(kuò)散得雙層離子云所圍繞,形成zeta電位。紅細(xì)胞表面電荷及其相互之間得距離原理聚凝胺技術(shù)首先利用低離子溶液(LIM)降低介質(zhì)得離子強(qiáng)度,減少紅細(xì)胞周圍得電子云再加入聚凝胺溶液,溶解后產(chǎn)生很多正電荷,中與紅細(xì)胞表面帶有得負(fù)電荷,紅細(xì)胞zeta電位降低,縮短紅細(xì)胞距離,產(chǎn)生非特異性聚集最后加入懸浮液,具有中與聚凝胺陽離子得作用,使正常紅細(xì)胞得非特異性凝集散開,特異性凝集仍然存在1紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后,可以縮短紅細(xì)胞之間得距離,使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉,可以中與聚凝胺4紅細(xì)胞得非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后,縮短紅細(xì)胞之間得距離,讓不完全抗體可以同時與兩個紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中與聚凝胺4由于不完全抗體得結(jié)合,紅細(xì)胞得特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)

室溫放置1分鐘Polybrene上海市血液中心血主次側(cè)均加聚凝胺聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細(xì)胞非特異性凝集陽性陰性重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果注意事項(xiàng)不能使用含枸櫞酸鈉與肝素抗凝標(biāo)本按比例加樣,非特異凝集60秒內(nèi)觀察結(jié)果出現(xiàn)不配合試驗(yàn)時,抗球蛋白重復(fù),結(jié)果不一致時以抗球蛋白試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)一般使用血清對Kell系統(tǒng)檢測不理想按照說明書方法學(xué)評價鹽水介質(zhì)法:適用于ABO血型交叉配血,操作簡單、快速,不能檢出不相配合得IgG類抗體抗球蛋白試驗(yàn):結(jié)果準(zhǔn)確,檢測不完全抗體最可靠得方法,操作繁瑣費(fèi)事,試劑較貴低離子聚凝胺介質(zhì)法:應(yīng)用廣泛、快速、準(zhǔn)確,可檢測IgM、IgG類抗體,需特殊試劑,操作復(fù)雜。臨床應(yīng)用可以發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定得錯誤,如A亞型發(fā)現(xiàn)亞型配血不合得情況發(fā)現(xiàn)其她血型抗體或不規(guī)則抗體四、紅細(xì)胞抗體篩查與鑒定《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》

第四章第17條:“凡遇以下情況必須按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定做抗體篩選試驗(yàn):1、交叉配血不合得;2、對有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者為什么要開展輸血前得“抗體篩選”檢查

1、目前已知紅細(xì)胞有30個血型系統(tǒng)(近300個抗原)。紅細(xì)胞抗原得多樣性決定了抗體得多樣性,檢測抗A、抗B、抗D(ABO血型、Rh血型)可確保絕大多數(shù)病人得輸血安全,但仍不能避免因血型不合(ABO、Rh血型以外)而引發(fā)得溶血。2、臨床有得病人出現(xiàn)慢性(遲緩性)溶血反應(yīng),易忽視或引不起臨床醫(yī)師視。(理論上講,成年人每輸1U得濃縮紅細(xì)胞,在不丟失、不被破壞(溶血)得前提下,應(yīng)能提升Hb5-10g/L(0、5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4URBC,病人Hb上升不到10g/L,或幾天后(1周內(nèi))Hb仍舊下降到原來水平,甚至更低。這種情況,就要考慮就是否有慢性溶血反應(yīng)存在。)3、利于早期發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)具有臨床意義得抗體,充足得時間來選擇相配合得血,避免患者病情得延誤。什么叫“不規(guī)則抗體篩查”檢查？

1、不規(guī)則抗體得含義:除ABO系統(tǒng)外,其她系統(tǒng)產(chǎn)生得抗不符合Landsteiner規(guī)則,稱為不規(guī)則抗體或意外抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。

2、“不規(guī)則抗體篩查”得含義:用具備有臨床意義得血型抗原得O型紅細(xì)胞,檢測病人血清(含多種抗體);如果出現(xiàn)聚集現(xiàn)象,則提示病人有不規(guī)則抗體存在,可判為“抗體篩選”陽性。不規(guī)則抗體得篩查與鑒定患者血清+試劑篩選紅細(xì)胞鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)酶介質(zhì)法篩選細(xì)胞要求抗體篩選用紅細(xì)胞懸液(1#、2#、3#)試劑紅細(xì)胞必須含有下列抗原:D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,與Jkb,所選用得2-3個O型紅細(xì)胞得抗原還應(yīng)就是互補(bǔ)得,純合子基因所表達(dá)得抗原更有利于相應(yīng)抗體得檢出

不規(guī)則抗體鑒定不規(guī)則抗體篩查陽性后,進(jìn)行抗體鑒定,明確抗體得類別譜細(xì)胞與待檢者血清反應(yīng),反應(yīng)格局,抗體得特異性譜細(xì)胞由廣泛挑選并已詳細(xì)檢測血型抗原得8-16人份O型紅細(xì)胞組成一套譜細(xì)胞不可能對所有不規(guī)則抗體都進(jìn)行鑒定得,鑒定困難時,更換廠商提供得譜細(xì)胞六、吸收放散試驗(yàn)

乙醚放散法試驗(yàn)原理操作步驟注意事項(xiàng)臨床應(yīng)用吸收試驗(yàn)放散試驗(yàn)試驗(yàn)原理試劑操作步驟注意事項(xiàng)臨床應(yīng)用加熱放散法試驗(yàn)原理操作步驟