食品微生物檢驗(yàn)學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

課時(shí)分配及主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（總學(xué)時(shí)30,其中動(dòng)檢20,動(dòng)食安30）

實(shí)驗(yàn)1微生物檢驗(yàn)常規(guī)試驗(yàn)預(yù)備3

主要內(nèi)容：菌落總數(shù)測(cè)定和大腸菌群檢驗(yàn)所需的1）研缽、剪刀、鎰子、吸管、平皿的包扎與干熱

滅菌：2）實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)瓊脂、EMB瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵管）和生理鹽水的配制、分裝、包扎和

高壓蒸汽滅菌.

實(shí)驗(yàn)2菌落總數(shù)測(cè)定3

主要內(nèi)容：樣品的稱取、勻漿和稀釋；2）接種叮瓊脂傾注：3）24h后菌落計(jì)數(shù)及結(jié)果報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)3大腸菌群MPN測(cè)定3

主要內(nèi)容：I）樣品的禰取、勻漿和稀釋；2）接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管，培養(yǎng)；3）24h后觀察產(chǎn)酸產(chǎn)

氣情況，劃線于EMB瓊脂，培養(yǎng)：3）48h時(shí)觀察菌落特征，革蘭氏染色、鏡檢：4）查MPN檢索表，報(bào)

告結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)4蠟樣芽施桿菌檢驗(yàn)3

主要內(nèi)容：1）將細(xì)菌肉湯培養(yǎng)物劃線于普通瓊脂、MYP瓊脂，點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板，接種生化培

養(yǎng)基，培養(yǎng)；2）24h時(shí)觀察菌落特征，革蘭氏染色、鏡檢；3）觀察主要牛.化試驗(yàn)站果。4）報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)5致病性球菌檢驗(yàn)3

主要內(nèi)容：1）將金黃色葡萄球菌和鏈球菌肉湯培養(yǎng)物劃線于普通瓊脂、血液瓊脂，接種生也培養(yǎng)

基，進(jìn)行紙片法藥敏試驗(yàn)，培養(yǎng)：2）24h時(shí)觀察菌落特征，革蘭氏染色、鏡檢；3）觀察主要生化試驗(yàn)結(jié)

果和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。4）報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)6魏氏梭菌檢驗(yàn)3

主要內(nèi)容：1）形態(tài)及染色特性觀察；2）細(xì)菌厭氧培養(yǎng)：3）家兔“泡沫肝”試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)7霉菌檢驗(yàn)2

主要內(nèi)容：1）觀察曲霉、毛霉和青霉在PDA瓊脂上的菌落特性；2）挑取霉菌培養(yǎng)物制備R片，

在顯微鏡下觀察霉菌的絲、抱于等結(jié)構(gòu)。

實(shí)驗(yàn)8肉的微生物學(xué)檢驗(yàn)2

主要內(nèi)容：1）鮮肉的感官性狀觀察：2）鮮肉壓印片制備與鏡檢、細(xì)菌計(jì)數(shù)；3）微生物毒素呈色

反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)9乳的微生物學(xué)檢驗(yàn)2

主要內(nèi)容：I〉鮮乳的感官性狀觀察：2）乳的涂片制備與鏡檢、細(xì)菌計(jì)數(shù)：3）美蘭還原試驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)10食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)6

主要內(nèi)容：1）沙門氏菌檢驗(yàn)所需培養(yǎng)基的制備：2）細(xì)菌分離與菌落挑選；3）細(xì)菌生化試驗(yàn)；4）

血清學(xué)鑒定：5）結(jié)果報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)一微生物檢驗(yàn)常規(guī)試驗(yàn)預(yù)備

［目的與要求］

1.熟悉菌落總數(shù)測(cè)定和大腸菌群檢驗(yàn)所需的各種培養(yǎng)基的制備。熟悉高壓蒸汽滅菌器的使用。

2.熟悉玻璃器皿的包裝與干熱滅菌方法。

［主要內(nèi)容］:

1研缽、剪刀、鑲子、吸管、平皿的包扎與干熱滅菌。

2實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)瓊脂、EMB瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵管）和生理鹽水的配制、分裝、包扎和高壓蒸

汽滅菌。

1）配制7。0mL生理鹽水（0.9%NaCl）,分別分裝與5個(gè)鹽水瓶，每瓶90mL；分裝18支

試管，每管9mL。

2）配制乳糖膽鹽培養(yǎng)基（發(fā)酵管）200mL,并分裝于小試管各3mL,每管中加入一個(gè)充滿

培養(yǎng)基的小倒管，注意?定不能有氣泡。（配方：2%蛋白豚，0.5%豬膽鹽，1%乳糖，調(diào)pH7.4,

然后加入0.4%浪甲酚紫2.5ml/l（）0ml）

3）配制普通瓊脂培養(yǎng)基400ML,分裝于2個(gè)三角瓶。（0.5%NaCL1%蛋白陳，0.3%牛肉

粉（膏。pH7.4,瓊脂粉1.5%）

4）配制伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基300mL。（配方：蛋白陳1%,NaCl0.5%,牛肉膏0.3%,pH7.4,

瓊脂粉1.5%,加熱溶化后加入乳糖1%、2%伊紅水溶液21］山1000|】山、0.65%美藍(lán)1mLMOOO

mL）

5）TTC培養(yǎng)基

（1）2%乳糖發(fā)酵管40支，每管2.5ml（2%乳糖，2%蛋白陳）。

（2）TTC培養(yǎng)液100ml（2%蛋白陳，1%NacLl%Na2HP04.12H2004%十二烷基硫

酸鈉，PH7.4）

（3）滅菌后加10%TTC8ml后分裝于（I）,每管加2.5ml。

6）DC培養(yǎng)基（0.5%蛋白陳，0.5%Nacl,1%乳糖，0.3%K2HPO4.3H2O,0.2%檸檬酸鐵錢，

瓊脂粉0.7%）溶于水后調(diào)PH7.2,加入10%去氧膽酸鈉1ml及0.4%潟麝香草酚蘭1.6ml。

［思考題］

I配制培養(yǎng)基時(shí)的一般原則和注意事項(xiàng)？

2使用高壓滅菌展和恒溫干燥箱的注意事項(xiàng)？

實(shí)驗(yàn)二菌落總數(shù)測(cè)定

［目的與要求］

通過本試驗(yàn)要求掌握食品的菌落總數(shù)測(cè)定的方法，茵落計(jì)數(shù)和報(bào)告方式，以及經(jīng)常食用

的各類動(dòng)物性食品的菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過適當(dāng)處理，在一定的條件下培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中

所含細(xì)菌菌落的總數(shù)，其也是判定食品被污染程度的標(biāo)志。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

溫箱、天平、滅菌試管、吸管、滅菌平皿、乳缽、剪子和鏡子、稀釋液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、

顯微鏡、載玻片、革蘭氏染色液，等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容I

（一）檢樣稀釋及培養(yǎng)：

1.以無菌操作，將檢樣25g（或25mL）剪碎放于含有250mL（或225mL）滅

菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)

充分振搖或研磨作成1：10的均勻稀釋液。

2.用1mL滅菌吸管，吸取1：10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管中

振搖試管混合均勻，作成1：100倍稀釋。

3.另取1mL滅菌吸管，按（2）操作10倍遞增稀釋，如此每遞增稀釋一次換一只1mL

滅菌吸管。

4根據(jù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)悠肺廴厩闆r的估計(jì)，選擇2?3個(gè)適宜稀釋度，分別在作10

倍遞增稀釋的同時(shí)，用吸取該稀釋度的吸管移1mL稀糅液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作2

個(gè)平皿。

5.稀釋液移入平皿后，應(yīng)立即將冷至46c左右營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置46℃水浴中

保溫）注入平皿約15mL,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻，同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL滅

菌稀釋液的滅菌平皿內(nèi)，作空白對(duì)照。

6.待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37c溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h時(shí)（肉、水產(chǎn)、乳、蛋為48

±2h）取出，計(jì)算平皿內(nèi)菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即得每g（mL）樣品所含菌落總數(shù)，

（二）菌落計(jì)數(shù)方法

作平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡觀察，以防遺漏。在記下各皿的菌

落數(shù)后，求出同稀釋度的各皿平均菌落數(shù)。

（三）菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告包括三步。

1.平板菌落數(shù)的選攔選取菌落數(shù)在30?300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。

一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則

不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一

半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。

2.稀釋度選擇

（1）選擇平均菌落數(shù)在30?300之間，乘稀釋倍數(shù)。

（2）若兩個(gè)稀釋度，其菌落數(shù)均在30?300之間，則視二者之比來決定。比值小于或

等于2,應(yīng)報(bào)告平均數(shù)，大于2則報(bào)告其較小的數(shù)字。

（3）若所有稀釋度的平?均菌落數(shù)均較大于300,則應(yīng)按稀釋展最島?的平均數(shù)乘以稀釋

倍數(shù)報(bào)告。

（4）若所有稀釋度平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。

（5）若所有稀釋度均無菌落的生長(zhǎng)，則以小于（V）1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

（6）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30?300之間其中一部分大于300或小于30

時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以其稀釋倍數(shù)。

3.菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位

有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可

用1（）的指數(shù)來表示，詳見表2—10

［思考題］

1菌落總數(shù)的食品衛(wèi)生學(xué)意義？

2影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？

表2-1稀釋度選擇及菌落數(shù)報(bào)告方式

例稀糅液及菌落數(shù)兩稀釋菌落總數(shù)報(bào)告方式

次101IO210,液之比（個(gè)/g或inL）（個(gè)/g或n】L>

1多不可計(jì)16420—1640016000或1.6XI04

2多不可計(jì)295461.63775038000或3.8X10)

3多不可計(jì)271602.22710027000或2.7XI04

4多不可計(jì)多不可計(jì)313—313000310000或3.IX10s

527115—27()270或2.7XI(產(chǎn)

6000一<1X10<10

7多不可計(jì)30512一3O5(X)31000或3.1x|Q?

無色透明或有小紅點(diǎn)，局部淺紅色陰性

不變紅色+陰性

4.結(jié)果報(bào)告根據(jù)陽性管數(shù)杳MPN檢索表，得出結(jié)果并報(bào)告之。

5.注意事項(xiàng)觀察產(chǎn)氣時(shí)，如小導(dǎo)管內(nèi)有肉眼可見氣泡，均為產(chǎn)氣陽性，另要注意導(dǎo)

管有無被沉淀物堵塞，如輕輕振動(dòng)試管，有小氣泡上升者仍為陽性。

（-）DC（去氧膽酸鈉）半固體試管快速法樣品稀釋同常規(guī)法，具體操作步驟：

1.接種液體樣品選擇原液、I：10、I：100三個(gè)稀釋度的樣品液，每個(gè)稀釋度取三

個(gè)1mL,分別放入滅菌試管中。固體樣品取1：10稀釋液三個(gè)10mL（1g）樣品分別注入三

個(gè)滅菌試管內(nèi)，再取I：10稀釋液三個(gè)1mL和I：10（）稀釋液.三個(gè)1mL分別加入滅菌試管內(nèi)"

2.加入培養(yǎng)基并進(jìn)行培養(yǎng)接種1mL樣品的試管，注入已溶化并冷至50C左右的

DC半固體培養(yǎng)基3mL,接種10mL樣品的試管加入三倍DC培養(yǎng)基5mL,立即將樣品與培

養(yǎng)基充分混合，待凝固后，置37c溫箱內(nèi)培養(yǎng)18?24鼠取出觀察結(jié)果。

3.結(jié)果判定和記錄則分別按下述四種處理（1）培養(yǎng)基變桔紅色，有氣泡產(chǎn)生或瓊

脂崩裂，記錄為十。（2）培養(yǎng)基為桔紅色，或有桔紅色菌落，無氣泡或瓊脂崩裂現(xiàn)象，記錄

為十。（3）培養(yǎng)基為綠色，有黃色菌落無氣泡和瓊脂崩裂現(xiàn)象，記錄為土。（4）培養(yǎng)基為綠

色，記錄為

4.報(bào)告結(jié)果：判定為（1）和（4）反應(yīng)結(jié)果，記錄陽性管數(shù)。查MPN檢索表并報(bào)

告之。

如遇（2）、（3）項(xiàng)反應(yīng)結(jié)果，可挑2?3個(gè)大腸菌群可疑菌落接種乳糖復(fù)發(fā)酵管，置

37c溫箱中培養(yǎng)18?24h。時(shí)，根據(jù)產(chǎn)酸產(chǎn)氣管數(shù)查MPN檢索表并報(bào)告之。

（三）紙片快速法

1.制備紙片將中性定性濾紙裁成10X12cm,然后疊成5X6cm大小雙層紙片，滅

菌后用專用培養(yǎng)基浸漬，然后37?40℃烘干，以無菌操作放入塑料袋內(nèi)備用（塑料袋為耐高

溫的聚丙塑料膜，以利消毒）。

2.接種樣品樣品稀釋方法同前述液體和固體樣品培養(yǎng)。（1）液體樣品：取原液、

1:10、1:100三個(gè)稀釋度各三個(gè)1mL,分別涂布于9張紙片上。（2）固體樣品：取原液、1:10、

1:KX）二個(gè)稀釋度各二個(gè)1mL,分別涂布于9張紙片上。

3.培養(yǎng)將上述紙片置37士1℃溫箱中，培養(yǎng)15小時(shí)觀察結(jié)果。

4.結(jié)果判定根據(jù)以下情況分別判定：

（I）紙片上出現(xiàn)紫紅色菌落，其周圍有黃圈者為陽性。

（2）紙片為一種顏色，無菌落生長(zhǎng)者為陰性。

（3）紙片呈紫色，有紫紅色菌落，其周圍無黃圈者為陰性。

（4）酸性食品接種后，紙片變黃，經(jīng)培養(yǎng)后無紫紅色菌落為陰性。

（5）紙片變色呈現(xiàn)不典型菌落，結(jié)果可疑者，應(yīng)做更發(fā)酵進(jìn)行驗(yàn)證。

5.結(jié)果報(bào)告根據(jù)紙片的陽性片數(shù)，查大腸菌群MPN檢索表并報(bào)告之。

6.注意事項(xiàng)有二。

（1）用培養(yǎng)基浸漬過的紙片，應(yīng)避光保存，并注意防潮，可放冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）如發(fā)現(xiàn)紙片變?yōu)榉奂t色即為失效。

［思考題］

1大腸菌群檢臉中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管？

2作空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的？

3為什么大腸菌群的檢驗(yàn)要經(jīng)過復(fù)發(fā)酵才能證實(shí)？

4復(fù)發(fā)蟀時(shí)為什么使用乳糖發(fā)酵管但不需加膽鹽？

表3-2大腸的群最可能數(shù)（MPN）檢索表

陽性管數(shù)MPX95%可信限

1ml(g)X30.Ini(g)X30.01ml(g)X3100ml(g)下限上限

000<30

00130

<590

00260

00390

01030

01160

<5130

01290

013120

02060

02190

<5200

022120

023150

03090

031130

10210

032150

033190

10040

10170

10230

102110

103150

11070

111110

30360

112150

113190

120110

121150

30360

122230

123240

130150

131230

30360

132210

133230

20090

201no

10370

202230

203250

210150

211200

30440

212270

213340

22021070390

221280

22235070470

223420

230290

231350

1001500

232410

233530

300230401200

3013JO701300

3026101501800

303950

310430702100

3117501402300

31212003003800

3131600

3209301503800

32115003004100

32221003504700

3232900

330240036013000

331160071021000

332113001500?18000

333221000

注：①表采用3個(gè)稀釋度［1mL(g)、0.1mL(g)和0.01ml.(g)］,每稀釋度3管。

②內(nèi)所列檢樣量如改用10mL(g),1ml.(g)和0.1mL(g)時(shí),表內(nèi)數(shù)字相應(yīng)降低10倍;如改用0.1mL(g)、0.01ml.(g)

和0.001mL(g)時(shí)，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增加10倍。其余可類推。

實(shí)驗(yàn)四食品中蠟樣芽胞桿菌的檢驗(yàn)

［目的與要求］

通過本實(shí)驗(yàn)要求了解蠟樣芽胞桿菌的主要生化特性,毒力測(cè)定與類似菌鑒別；掌握本菌

的形態(tài)特征，選擇培養(yǎng)基為菌落特點(diǎn)。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

溫箱、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、顯微鏡、載玻片、革蘭氏染色液、硝酸鹽培養(yǎng)基、酪蛋白瓊脂、10%

卵黃瓊脂、酚紅前萄糖肉湯，等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

一、活菌計(jì)數(shù)：

活菌計(jì)數(shù)是取樣品25g(或25mL),用滅菌生理鹽水(或磷酸鹽緩沖液PH7.0)225mL

稀釋(固體樣品如肉或肉制品等，應(yīng)無菌研磨制成勻漿后稀釋)，稀釋度為1:10,再將此稀

釋液作1:10(樣品的實(shí)際稀釋度為1:100,以下各稀釋度類推)、1:100、1:1000和1:10000

稀釋，取各稀釋度0.1mL,接種在10%卵黃瓊脂或MYP(甘露醉卵黃多粘菌素)瓊脂上涂

勻后，置37。0溫箱中培養(yǎng)12-201］，選取菌落數(shù)在3()個(gè)左右者計(jì)數(shù)，蠟樣芽胞桿菌的菌落

在卵黃瓊脂上呈粉紅色，周圍呈乳白色混濁環(huán)，在MYP瓊脂上呈灰白色或微帶紅色，并且

在粉紅色（表示不發(fā)酵甘露醇）的背景中環(huán)繞白色至淡紅色的暈（表示產(chǎn)生卵磷脂酹）。

計(jì)數(shù)后，從中挑取5個(gè)典型菌落作證實(shí)試驗(yàn)，根據(jù)證實(shí)為蠟樣芽胞桿菌的菌落，計(jì)算出

該皿內(nèi)的蠟樣芽胞桿菌數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)，即得每g（或mL）樣品中所含蠟樣芽胞桿

菌數(shù),例如，將固定檢樣1:10000的稀釋液0.1mL涂布于甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板上,

生成的可疑菌落為25個(gè)，取5個(gè)鑒定，證實(shí)為蠟樣芽胞桿菌的是4個(gè)，則1g檢樣中蠟樣芽

胞桿菌數(shù)為：25X4/5X104XIO=2X106

二、細(xì)菌培養(yǎng)：將檢樣或其稀釋液接種于血瓊脂或MYP瓊脂平板，置37c溫箱內(nèi)培養(yǎng)12?

20h,挑取可疑菌落接種于肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂做成純培養(yǎng)，以備證實(shí)試驗(yàn)用。

三、證實(shí)試驗(yàn)

1.形態(tài)觀察：革蘭氏染色法鏡檢，芽胞卵圓形，芽抱較菌體小，位于中央或稍偏一端。

2.培養(yǎng)特性：蠟樣克胞桿菌在肉湯中呈混濁生長(zhǎng)，常微有菌膜或壁環(huán)，振蕩易乳化。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂上呈不透明、表面粗糙、似毛玻璃或融蠟狀，邊緣似齒輪狀。

3.生化特性：蠟樣交胞桿菌有動(dòng)力，還原硝酸鹽，接觸能陽性，溶血，不發(fā)酵甘露醇

和木糖，常能液化明膠和溶菌酶試驗(yàn)陽性，淀粉酶試驗(yàn)陽性，厭氧條件下能發(fā)酵葡萄糖。

1）硝酸鹽試驗(yàn)：將純培養(yǎng)的細(xì)菌穿刺接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18?24h后，

取出檢查，有動(dòng)力的細(xì)菌，可由穿刺線向四周擴(kuò)散生長(zhǎng)，使周圍的培養(yǎng)基變混濁，無動(dòng)力的

細(xì)菌僅能沿穿刺線生長(zhǎng)，周圍的培養(yǎng)基仍然保持透明，然后沿管壁加入硝酸鹽還原指示劑甲

液和乙液各二滴，能還原硝酸鹽的細(xì)菌立即呈紅色。

2）酪蛋白瓊脂：劃線后于37℃培養(yǎng)48h,觀察菌落周圍培養(yǎng)基，如透明表示酪氨酸蛋

白酶陽性。

3）卵磷脂酶試驗(yàn)：取肉湯培養(yǎng)物點(diǎn)種于10%卵黃瓊脂平板上，置37c培養(yǎng)3h,蠟樣

芽胞桿菌產(chǎn)生混濁環(huán)，6h后混濁環(huán)擴(kuò)散至5?6mm.

4）厭氧發(fā)酵葡萄糖試驗(yàn)：取1環(huán)肉湯培養(yǎng)物接種于3mL酚紅葡萄糖肉場(chǎng)內(nèi)，置厭氧罐

中，370c培養(yǎng)24h,觀察培養(yǎng)基顏色是否由紅變黃，如果變黃，為厭氧條件卜.利用葡萄糖產(chǎn)

酸陽性。

［思考題］

1為什么在檢驗(yàn)食品中的蠟樣芽胞桿苗時(shí)要進(jìn)行活圉計(jì)數(shù)？

2蠟樣芽胞桿菌的主要生化特性？

實(shí)驗(yàn)五致病性球菌的檢驗(yàn)

［目的與要求I

1.掌握葡萄球菌和溶血性鏈球菌的常規(guī)檢驗(yàn)方法。

2.認(rèn)識(shí)前萄球菌和溶血性鏈球菌的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

溫箱、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、顯微鏡、載玻片、革蘭氏染色液、健康人血漿、新鮮兔血漿、血瓊

脂平板、桿菌肽藥敏紙片等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

一、葡萄球菌的檢驗(yàn)

金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，并使血漿纖維蛋白發(fā)生凝固，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。

-）檢樣的采集與處理取25g檢樣加入225mL滅菌生理鹽水內(nèi)制成混懸液。

二）細(xì)菌的形態(tài)與培養(yǎng)觀察

1.吸取混懸液5mL接種7.5%氯化鈉肉場(chǎng)50mL,同時(shí)挑取混懸液接種血平板及

Baird-Parker氏培養(yǎng)基，置36±1°C溫箱培養(yǎng)24h。如果血平板上菌落呈金黃、大而突起、

圓形、不透明、表面光滑、周圍有溶血圈。Baird—Parker氏培養(yǎng)基上為圓形、光滑、突起、

濕潤(rùn)，顏色從灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為混濁帶和透明帶時(shí)，則初步判斷為金黃色葡

葡球菌。

2.挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，如見到革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽

胞、無莢膜的細(xì)菌，則可認(rèn)為是該菌。

三）血漿凝固酶試驗(yàn)吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL于小試管中，加入錨萄球菌肉場(chǎng)培

養(yǎng)物0.5mL,振蕩搖勻，放36土1C溫箱或水浴內(nèi)，每小時(shí)觀察一次，觀察6h,出現(xiàn)凝固

即為陽性。同時(shí)取已知陽性和陰性菌株及肉湯作對(duì)照。

二、溶血性鏈球菌

A群鏈球菌能產(chǎn)生一種激活酶，此酶能激活血液中的溶纖維蛋白酶原（亦稱胞漿原）,

使之變?yōu)橛谢钚缘娜芾w維蛋白酶，以溶解纖維蛋白。產(chǎn)生鏈激酶的細(xì)菌除A群鏈球菌外，

還有C和G等群鍵球菌。

-）檢樣的采集與處理取25g檢樣加入225mL滅菌生理鹽水內(nèi)制成混懸液。

二）細(xì)菌的形態(tài)與培養(yǎng)

1.取混懸液接種于血平板上，并吸5mL接種于50mL葡萄糖肉浸液肉場(chǎng)內(nèi)。如檢樣污

染嚴(yán)重另取5mL接種匹克氏肉場(chǎng)，培養(yǎng)24h。挑取乙型溶血、圓形突起的細(xì)小菌落，接種

血平板（純精養(yǎng)）。如菌落呈灰白色、半透明或不透明，表面光滑、有浮光、圓形突起的細(xì)

小菌落，周圍有2?4mm無色透明的溶血環(huán)，可初步認(rèn)為是溶血性鏈球菌。

2.批取菌落作革蘭氏染色鏡檢，如見到革蘭氏陽性球菌，不形成芽胞，無鞭毛，鏈狀

排列時(shí)可判定為該菌。

三）鏈激幅試驗(yàn)

1.方法：取健康人血漿0.2mL（草酸鉀0.01g、加入5mL人血混勻，經(jīng)離心沉淀吸取

上清液，即為血漿），加入0.8mL滅菌生理鹽水，混勻后，加入被檢菌肉場(chǎng)培養(yǎng)液0.5mL,

再加入0.25%氯化鈣溶液0.25mL,振蕩后放入36c水浴中。

2.結(jié)果：10分鐘內(nèi)血漿先凝固，隨后又溶化。血漿溶化的時(shí)間長(zhǎng)短，視激活酶含量多

少，鏈激酶愈多，溶化所需時(shí)間愈短，強(qiáng)陽性者可在20min內(nèi)完全溶化凝固的血漿，24h仍

不溶化者為陰性。

四、桿菌肽敏感試驗(yàn)

1.方法：挑取乙型溶皿性鏈球菌濃菌液，涂布于血平板（肉浸液瓊脂加入5%血液）上。

用滅菌鏡子夾取每片含有0.04單位的桿菌肽紙片，放于上述平板上，放36士IC培養(yǎng)18?

24ho

2.結(jié)果如有抑菌環(huán)現(xiàn)即為陽性，可初步鑒定為A群鏈球菌，同時(shí)用已知陽性菌株作對(duì)

照。

［思考題］

1金黃色葡萄球菌的毒力主要表現(xiàn)在哪幾個(gè)方面？

2鏈球菌與食物中毒的關(guān)系？與腸球菌的比較？

實(shí)驗(yàn)六魏氏梭菌檢驗(yàn)

［目的與要求］

I.認(rèn)識(shí)魏氏梭菌的形態(tài)及染色特性

2.掌握魏氏梭菌檢驗(yàn)方法。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

溫箱、天平、滅菌試管、吸管、滅菌平皿、乳缽、剪子和鎰子、稀釋液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、

顯微鏡、載波片、革蘭氏染色液SPS瓊脂、動(dòng)力一硝酸鹽培養(yǎng)基含鐵牛奶培養(yǎng)基卵黃瓊脂

平板。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

一、形態(tài)及染色特性觀察

本菌為革蘭氏陽性的粗大桿菌，單在或成雙排列。芽胞呈卵圓形位于菌體中央或近端。

在機(jī)體內(nèi)形成莢膜，無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。在陳舊的培養(yǎng)物中，菌體呈革蘭氏陰性。

二、活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)

1.按無菌操作稱取食品檢樣25g(mL)放入均質(zhì)器，加0.1%蛋白陳水稀釋劑225mL,

低速攪動(dòng)1?2分鐘，使之均質(zhì)化，做成1：10稀釋。

2.以上述1：10稀釋的均質(zhì)液按1mL加0.1%蛋白陳稀釋劑9mL,做成ICT2?10?

的系列稀釋液。

3.吸取各稀釋液分別放于2個(gè)滅菌平皿內(nèi)各ImLo每個(gè)平皿澆注約50℃的SPS瓊脂

15?20mL,仔細(xì)轉(zhuǎn)動(dòng)手血.，使稀釋液和瓊脂充分混勻。

4.上述瓊脂平板凝固后，倒置于厭氧培養(yǎng)裝置內(nèi)36士1C培養(yǎng)24h。

5.選取長(zhǎng)有30?300個(gè)黑色菌落的平板，計(jì)數(shù)。

三、證實(shí)試驗(yàn)

1.由平板上任取10個(gè)黑色菌落，分別接種FT培養(yǎng)基；36±1C培養(yǎng)18?24h。

2.用上述培養(yǎng)液涂月，革蘭氏染色鏡檢，檢查培養(yǎng)液的純凈度。

3.用接種環(huán)(針)穿刺接種動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基，36土培養(yǎng)24h,觀察接種線

的生長(zhǎng)情況，判斷有無動(dòng)力。然后滴加a一蔡胺液和對(duì)氨基苯磺酸液各0.5mL,觀察硝酸

鹽是否被還原。

4,取生長(zhǎng)旺盛的FT培養(yǎng)液1mL接種含鐵牛奶培養(yǎng)基，于46c水浴中培養(yǎng)，2h時(shí)后觀

察有無“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，5h不發(fā)酵者為陰性。

5.用接種環(huán)蘸取FT培養(yǎng)液點(diǎn)種卵黃瓊脂平板(每個(gè)平板至少可點(diǎn)種10點(diǎn))，倒置厭

氧培養(yǎng)裝置內(nèi)，35c培養(yǎng)24h,觀察接種點(diǎn)的乳白色混濁變化，以判定有無卵磷脂酶產(chǎn)生。

四、菌落計(jì)算

根據(jù)黑色菌落的計(jì)數(shù)(5)和證實(shí)試驗(yàn)的結(jié)果，計(jì)算每g(mL)食品檢樣的含菌數(shù)。

例如，10"稀釋液的平板長(zhǎng)有黑色菌落100個(gè)，而供作證實(shí)試驗(yàn)的10個(gè)菌落中有7個(gè)

被確證為魏氏梭菌，則每g(mL)食品檢樣所含魏氏梭菌數(shù)：

100X0.7X1伊=7X10$

五、家兔“泡沫肝”試驗(yàn)：取待檢菌18~24h液體培養(yǎng)物0.5mL,經(jīng)耳靜脈注射家兔，

10min后處死，置37C溫箱內(nèi)5~8h,剖檢。如有魏氏梭菌存在，則可見各臟器有許多氣泡，

尤以肝臟為甚，故稱為“泡沫肝”或“海綿肝二用肝臟作涂片鏡檢和細(xì)菌分離培養(yǎng)。

［思考題］

1魏氏梭菌的形態(tài)染色特性和培養(yǎng)特性？

2“暴烈發(fā)酵”的原理是什么？

實(shí)驗(yàn)七霉菌和酵母計(jì)數(shù)

［目的與要求］

了解和掌握食品中霉菌和醉母計(jì)數(shù)的測(cè)定方法；了解霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

被檢肉樣，滅菌試管，滅菌吸管，滅菌平皿，天平，量筒，三角瓶，剪刀，鏡子，載玻

片，顯微鏡，香柏油，擦彘紙等。

馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(附加抗生素)，孟加拉紅培養(yǎng)基。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

一、瓊脂傾注法

1以無菌操作稱取檢樣25g（mL）,放入含有225mL滅菌水的具玻塞錐形瓶中，振搖30min,

即為1:10稀釋的樣品。

2用滅菌吸管吸取1:10樣品液10mL,注入滅菌試管中，另用1mL一支滅菌吸管反復(fù)吹打

50次，使霉菌抱子充分散開。

3吸取1:10樣品液1mL注入含有9mL滅菌水的試管口，另換一支1mL滅菌吸管吸吹5

次，制成1:100樣品液。

4按上述操作順序做10倍系列稀釋，每稀糅一次，換用一支滅菌吸管，根據(jù)對(duì)樣品污染程

度的估計(jì)選擇3個(gè)合適的稀釋度，分別在進(jìn)行稀釋的同時(shí)吸取1mL樣液置于滅菌平皿，每

個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。然后將融化后保存在46℃水浴中的瓊脂培養(yǎng)基傾注入平皿，輕輕轉(zhuǎn)

動(dòng)平皿使樣液與培養(yǎng)基充分混勻，待瓊脂凝固后倒置于25C?28C溫箱中，3d后開始

觀察，共觀察5d。

5計(jì)數(shù)方法：通常選擇菌落數(shù)在10750之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，取同一稀釋度的兩個(gè)平皿菌

落數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)，即為每克（亳升）檢樣中所含毒菌和酵母數(shù)。稀釋度選擇和菌

落報(bào)告方式可參照“菌落總數(shù)測(cè)定二

6報(bào)告：每克（亳升）食品中所含霉菌和酵母數(shù)以cfu/g（mL）表示。

二、霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法

本方法適用于番茄醬罐頭，常用郝氏霉菌計(jì)測(cè)法。

1檢樣的制備：取定量檢樣，加蒸播水稀釋至折光指數(shù)為1.34477.3460（即濃度為

7.9%~8.8%）,備用。

2顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率90倍~125倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為

1.382mm。

3涂片：洗凈郝氏計(jì)測(cè)玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液用玻璃棒均勻地?cái)偛加谟?jì)測(cè)室，以備觀察。

4觀測(cè)：將制好的載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測(cè)，一般每一個(gè)檢樣觀察50個(gè)

視野，同一檢樣應(yīng)由2人進(jìn)行觀察。

5結(jié)果與計(jì)算：在標(biāo)準(zhǔn)視野下，發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲且其長(zhǎng)度超過標(biāo)準(zhǔn)視野直徑（1.382mm）的

1/6（測(cè)微器的一格）或3根菌絲總長(zhǎng)度超過標(biāo)準(zhǔn)視野的1/6,即判為陽性，否則為陰性。按

100個(gè)視野計(jì)，其中發(fā)現(xiàn)菌絲體陽性的視野數(shù)，即為霉菌的視野百分?jǐn)?shù)。

附：

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）：

馬鈴薯（去皮切塊）300g

前荷糖20g

瓊脂20g

蒸懦水1000mL

制法:將馬鈴薯去皮切塊，力口1000mL蒸儲(chǔ)水煮沸10min~20min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸儲(chǔ)水至1000mL.,

加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，I21C高壓滅菌20min。

孟加拉紅培養(yǎng)基：

蛋白陳5g

葡荷糖10g

磷酸氫二鉀1g

硫酸鎂（七水）0.5g

瓊脂20g

1/3000孟加拉紅溶液100mL

蒸脩水1000mL

氯霉素0.1g

制法：上述各成分加入蒸儲(chǔ)水溶解后，加入孟加拉紅溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培養(yǎng)基中,

分裝，121℃高壓滅菌2011加。

實(shí)驗(yàn)八肉與肉制品微生物學(xué)檢驗(yàn)

［目的與要求］

1.了解并掌握肉與肉制品的常規(guī)微生物學(xué)檢驗(yàn)方法：

2.通過檢驗(yàn)，學(xué)會(huì)對(duì)肉的品質(zhì)和質(zhì)量作出簡(jiǎn)單的綜合判定。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

被檢肉樣，試管，微量吸管，滴管，生理鹽水，堿性美藍(lán)染液，營(yíng)養(yǎng)瓊脂。

試管、天平、量簡(jiǎn)、三角瓶、剪刀、鐐子、載玻片、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、滅菌平

皿、消毒濾紙等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

一、細(xì)菌鏡檢：分別觀察肉表面和深層的細(xì)菌種類和數(shù)量。

1制片鏡檢以無菌操作分別從待檢肉塊表層和深層制得2個(gè)觸片，用甲醇（可用

95%乙醇替代）固定，然后用堿性美藍(lán)染色液染色3~5min,干燥，鏡檢不少于5個(gè)視野，

分別記錄每個(gè)視野的球菌和桿菌數(shù)，最后求出每個(gè)視野的細(xì)菌平均數(shù)。

2判定標(biāo)準(zhǔn)新鮮肉觸片印跡著色很淺，表層觸片能看到少數(shù)球菌和桿菌，深層僅可

見個(gè)別細(xì)菌或沒有，觸片上完全看不到分解的肉組織。

次新鮮肉印跡著色較好，表層觸片能看到20~30個(gè)球菌和少數(shù)桿菌，深層可發(fā)現(xiàn)20個(gè)

左右的細(xì)菌，觸片上能看到分解的肉組織。

變質(zhì)肉印跡著色很濃，不論表層或深層均能看到30個(gè)以上的細(xì)菌，且多數(shù)為桿菌。觸

片上粘附有大量分解的肉組織。

二、肉品表面細(xì)菌數(shù)的測(cè)定

I采樣方法1）濾紙法：將濾紙剪成2cmX2cm大小，滅菌后每張滴加I滴無菌鹽

水，用無菌銀子將濾紙緊貼于待檢肉表面約Imin,取下，放入帶有玻璃珠的滅菌三角瓶中，

按濾紙總面積加入2倍量的無菌生理鹽水，充分振搖至濾紙片散成纖維，去上清液作10倍

系列稀釋。2）棉拭采樣法：檢驗(yàn)肉、禽及其制品表面受污染的程度，可用板孔5cm2的金屬

制規(guī)板壓在受檢物上，將滅菌棉拭梢沾濕，在板孔范圍內(nèi)反兔揩抹多次，然后將板孔規(guī)板移

壓另一處，用另一棉拭揩抹，如此共移壓揩抹10次，用10只棉拭，采樣總面積為50cm2。

每只棉拭在揩抹完畢后應(yīng)立即剪斷或燒斷后投入盛有50mL滅菌水的三角瓶中，立即送檢。

檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)充分振搖，然后作10倍系列稀釋。

2檢驗(yàn)方法分別參見菌落總數(shù)測(cè)定、大腸菌群測(cè)定和沙門氏菌檢驗(yàn)等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)九乳和乳制品的微生物學(xué)檢驗(yàn)

［目的與要求］

1.了解乳類食品的樣品采集和處理方法；

2.掌握乳類食品的微生物學(xué)檢驗(yàn)方法；

3.掌握鮮乳中抗生素殘留的檢驗(yàn)方法。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

載玻片、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、溫箱、滅菌試管、吸管、滅菌平皿、稀釋液、革

蘭氏染色液，等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1

一、樣品的采取和送檢

1大型包裝的鮮乳：用滅菌吸管取樣，采樣時(shí)應(yīng)注意代表性。采樣數(shù)量按GB/T4789.1,放

入滅菌容器內(nèi)，及時(shí)送檢.在氣溫較高或路途較遠(yuǎn)的情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏，不得使用任何防腐

劑。

2定型包裝的乳品：采取整件包裝。采樣時(shí)注意包裝的完整。各種定型包裝的乳與乳制品每

件樣品量按GB/T4789.1要求。

二、檢驗(yàn)內(nèi)容

I菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù);則定參見實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)三。

2美藍(lán)還原試驗(yàn)存在于乳中的微生物在生長(zhǎng)繁殖過程中，能分泌出還原酶類，它們可使

美藍(lán)受還原而褪色，而還原反應(yīng)的速度與乳中細(xì)菌數(shù)量呈正相關(guān)，因此可根據(jù)美藍(lán)褪色時(shí)間

估計(jì)乳中含菌量多少，從而對(duì)乳的品質(zhì)作出評(píng)價(jià)。操作步驟如下：

1）用滅菌吸管取被檢乳樣10mL置于無菌試管中，水浴加熱至38~40℃（應(yīng)塞上膠塞，

但勿塞緊）。

2）用滅菌吸管取新鮮配制的1:30000美藍(lán)無菌水溶液1mL,加入乳樣中，立即塞緊膠

塞上下顛倒3~4次，充分混勻。迅速置于38~40℃水浴箱中，并記錄試驗(yàn)開始時(shí)間。

3）分別在開始后20min、2h和5.5h各觀察一次，注意美藍(lán)的褪色情況，并記錄其褪色

時(shí)間。

4）按下表判斷被檢生乳的等級(jí)。如被檢樣品是消毒乳，則美藍(lán)褪色時(shí)間在6h以上方為

合格。

表美藍(lán)還原時(shí)間和生乳質(zhì)量

美藍(lán)褪色時(shí)間相當(dāng)于每1mL乳中的細(xì)菌數(shù)乳品質(zhì)量乳品等級(jí)

>5.5h少于50萬良好一級(jí)品

2h~5.5h50-400萬合格二級(jí)品

20min~2h400-2000萬不好三級(jí)品

<20min多;2000萬很壞四級(jí)品

3直接涂片計(jì)數(shù)法可用于鮮乳中含菌數(shù)的檢驗(yàn)。以一定量的鮮乳制成一定面積的涂片?，

染色后放在已知視野面積的顯微鏡油鏡下直接計(jì)數(shù)每個(gè)視野的平均細(xì)菌數(shù)，然后換算出單位

體積鮮乳中的細(xì)菌數(shù)。具體操作如下：

1）顯微鏡油鏡視野面積的測(cè)定：取黑色硬紙片剪成圓形，以剛好能放入目鏡中為度，

紙片中央用利刀切一個(gè)3mmX3mm的方孔，或用直徑3mm的打孔器打一個(gè)小孔。這樣在

把紙片放入目鏡中后，可以縮小視野范圍，便于計(jì)數(shù)。

首先把刻度為lum的物測(cè)微尺置r?油鏡下，調(diào)整焦距看清刻度后，將黑紙片放入目鏡

中隔，用測(cè)微尺測(cè)出所觀察到的視野的邊長(zhǎng)或直徑，計(jì)算出視野面積。然后計(jì)算lenf與視

野面積的比值A(chǔ)o

2）制備涂片：用無菌微量加樣相吸取1:10稀釋的乳液10貝，小心涂于事先刻有1cm?

方格的潔凈載玻片上，均勻涂滿整個(gè)空格面積但不要外溢。將載玻片置于恒熱加熱板或酒精

燈火焰上方，使其在10min內(nèi)干燥但要避免過度加熱。固定后浸于二甲苯中脫脂1~2min,

取出瀝凈并晾干，再浸入95%乙醇中1?2min,以洗去殘留的二甲苯，取M晾干后，用堿

性美藍(lán)染色5min,水洗，干燥即成。

3）鏡檢和計(jì)數(shù)：將涂片置于油鏡下觀察，根據(jù)菌數(shù)多少而檢查10~50個(gè)視野，計(jì)算每

個(gè)視野中的細(xì)菌數(shù)，求其平均值。

以一個(gè)視野細(xì)菌數(shù)的平均值乘以A,即為Icm?面積即］（）川乳中的細(xì)菌數(shù)，再將此數(shù)

字乘以100再乘以10,即可得1mL乳中的含菌數(shù)。

用此方法得出的含菌數(shù)，往往比稀釋傾注平板計(jì)數(shù)法得出的菌落總數(shù)大4倍左右，因

為直接涂片計(jì)數(shù)包括死亡后尚未消失的細(xì)菌在內(nèi)，而后者僅包括活菌數(shù)。但直接計(jì)數(shù)法可

在較短時(shí)間內(nèi)得出結(jié)果，同時(shí)也可認(rèn)識(shí)一下乳中的病原菌。

實(shí)驗(yàn)十動(dòng)物性食品中沙門氏菌的常規(guī)檢驗(yàn)

［目的與要求］

通過本實(shí)驗(yàn)要求了解沙門氏菌的培養(yǎng)特性、形態(tài)染色特性、生化特性和血清學(xué)特性；掌

握動(dòng)物性食品中沙門氏菌的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（GB4789-4-84）。

［實(shí)驗(yàn)器材及試劑］

溫箱、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、顯微鏡、載玻片、革蘭氏染色液、亞硫酸銖瓊脂、DHL瓊脂、S-S

瓊脂、三糖鐵瓊脂、蛋白陳水、KCN培養(yǎng)基、賴氨酸脫按酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、pH7.2尿素瓊脂、

A—F多價(jià)O血清，等。

［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容］

（一）沙門氏菌的形態(tài)、染色特性觀察；

（二）沙門氏菌的分離培養(yǎng)和菌落特性觀察；

（三）沙門氏菌的生化特性觀察：

（四）沙門氏菌的血清學(xué)鑒定（平板凝集試驗(yàn)）。

［操作步驟］

一、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（GB4789-4-84）

（-）前增菌和和選擇性增菌凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。

各稱取檢樣25g,加在裝有225mL線沖蛋白腺水的500mL廣II瓶中，固體食物可先用均質(zhì)

器，以8000?10000轉(zhuǎn)/分打碎1min。，或用乳缽加滅菌沙磨碎；粉狀食品用滅菌匙或玻棒

研磨使乳化。于36±1℃培養(yǎng)4h（干蛋白需培養(yǎng)18?24h）,移取10mL,轉(zhuǎn)種子100mL氯

化鎂孔雀綠增菌液內(nèi)或四流磺酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于42c培養(yǎng)18?24h。問時(shí)，另取10mL

加入100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于36±培養(yǎng)上18?24h。

鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工食品不必經(jīng)過前增菌。各取25g（mL）加入