生物醫(yī)藥mRNA工藝員考試試卷與答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.mRNA合成中常用的酶是（）A.淀粉酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.RNA聚合酶D.蛋白酶2.以下哪種核苷酸是mRNA的組成成分（）A.dATPB.UTPC.dGTPD.CTP3.mRNA純化常用的方法是（）A.萃取法B.離子交換色譜C.沉淀法D.重結(jié)晶4.體外轉(zhuǎn)錄體系中不需要的成分是（）A.模板DNAB.引物C.NTPD.緩沖液5.mRNA穩(wěn)定性與哪種結(jié)構(gòu)有關(guān)（）A.5’帽結(jié)構(gòu)B.內(nèi)含子C.外顯子D.終止密碼子6.合成mRNA的原料是（）A.氨基酸B.核糖核苷酸C.脫氧核糖核苷酸D.脂肪酸7.以下能提高mRNA翻譯效率的是（）A.增加3’polyA尾長度B.減少5’帽結(jié)構(gòu)C.改變密碼子偏好性D.增加內(nèi)含子數(shù)量8.mRNA工藝中，防止核酸酶污染的關(guān)鍵是（）A.高溫滅菌B.使用無核酸酶的試劑C.通風(fēng)良好D.戴手套9.轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)由（）決定A.啟動子B.增強(qiáng)子C.終止子D.沉默子10.用于儲存mRNA的最佳溫度是（）A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室溫二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.mRNA工藝中可能用到的儀器有（）A.移液器B.離心機(jī)C.PCR儀D.色譜儀2.影響mRNA轉(zhuǎn)錄效率的因素有（）A.模板濃度B.酶活性C.反應(yīng)溫度D.緩沖液成分3.以下屬于mRNA修飾的有（）A.5’加帽B.3’加尾C.甲基化D.磷酸化4.提高mRNA質(zhì)量的措施包括（）A.優(yōu)化轉(zhuǎn)錄條件B.嚴(yán)格純化步驟C.防止核酸酶降解D.選用優(yōu)質(zhì)原料5.mRNA的應(yīng)用領(lǐng)域有（）A.疫苗研發(fā)B.基因治療C.藥物篩選D.細(xì)胞重編程6.體外轉(zhuǎn)錄模板DNA的要求有（）A.純度高B.完整性好C.無核酸酶污染D.特定的序列7.核酸酶污染可能來自（）A.實(shí)驗(yàn)人員B.實(shí)驗(yàn)器材C.試劑D.空氣8.mRNA工藝中的質(zhì)量控制指標(biāo)包括（）A.濃度B.純度C.完整性D.活性9.常用的mRNA純化介質(zhì)有（）A.硅膠柱B.離子交換樹脂C.親和介質(zhì)D.凝膠過濾介質(zhì)10.優(yōu)化mRNA工藝的方法有（）A.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)B.參考文獻(xiàn)C.經(jīng)驗(yàn)積累D.設(shè)備更新三、判斷題（每題2分，共20分）1.mRNA只有在細(xì)胞內(nèi)才能合成。（）2.5’帽結(jié)構(gòu)對mRNA穩(wěn)定性沒有影響。（）3.核酸酶只會降解DNA，不會影響mRNA。（）4.提高轉(zhuǎn)錄溫度一定能提高mRNA產(chǎn)量。（）5.所有mRNA都需要進(jìn)行3’加尾修飾。（）6.合成mRNA時，原料濃度越高越好。（）7.純化后的mRNA可以長期在室溫保存。（）8.不同的mRNA應(yīng)用場景對其質(zhì)量要求相同。（）9.實(shí)驗(yàn)中使用的耗材不需要進(jìn)行核酸酶處理。（）10.優(yōu)化mRNA工藝可以提高其表達(dá)效率。（）四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述mRNA體外轉(zhuǎn)錄的基本步驟。答：首先準(zhǔn)備模板DNA，確保其純度和完整性。將模板DNA與RNA聚合酶、NTP、緩沖液等混合于適宜的反應(yīng)體系中，在合適溫度（如37℃）下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成mRNA鏈。反應(yīng)結(jié)束后，可采用合適方法對合成的mRNA進(jìn)行純化，去除雜質(zhì)。2.說明mRNA5’帽結(jié)構(gòu)和3’polyA尾的作用。答：5’帽結(jié)構(gòu)能保護(hù)mRNA免受核酸酶降解，提高mRNA穩(wěn)定性，還能促進(jìn)mRNA與核糖體結(jié)合，增強(qiáng)翻譯起始效率。3’polyA尾也可增強(qiáng)mRNA穩(wěn)定性，有助于mRNA從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)，同時在翻譯過程中也發(fā)揮積極作用，利于翻譯的起始和進(jìn)行。3.如何防止mRNA工藝中的核酸酶污染？答：實(shí)驗(yàn)人員操作前需用無核酸酶的試劑洗手，戴口罩和手套。實(shí)驗(yàn)器材要經(jīng)過嚴(yán)格處理，如高溫滅菌、用無核酸酶的試劑清洗。使用的試劑應(yīng)確保無核酸酶污染，最好選用無核酸酶的專用產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)環(huán)境保持清潔，減少空氣流動帶來的污染。4.簡述mRNA純度檢測的常用方法。答：常用紫外分光光度法，通過檢測260nm和280nm波長處的吸光度，A260/A280比值在1.8-2.0左右表示純度較好，還可檢測A260/A230比值評估鹽等小分子雜質(zhì)污染情況。另外，也可用瓊脂糖凝膠電泳，觀察mRNA條帶是否單一、有無拖尾等判斷純度。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論mRNA工藝在疫苗研發(fā)中的優(yōu)勢與挑戰(zhàn)。答：優(yōu)勢在于能快速響應(yīng)疫情，可靈活設(shè)計(jì)序列針對不同病原體；安全性好，不整合入宿主基因組。挑戰(zhàn)包括穩(wěn)定性差，易被核酸酶降解；生產(chǎn)工藝復(fù)雜，純化難度大；大規(guī)模生產(chǎn)的成本較高，質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格，臨床應(yīng)用的長期安全性仍需深入研究。2.如何進(jìn)一步優(yōu)化mRNA工藝以提高其在基因治療中的效果？答：從原料方面，選用高純度、活性好的試劑。優(yōu)化轉(zhuǎn)錄條件，精確調(diào)控溫度、時間等參數(shù)提高產(chǎn)量和質(zhì)量。改進(jìn)純化工藝，去除雜質(zhì)和異構(gòu)體。在修飾環(huán)節(jié)，合理選擇修飾方式增強(qiáng)穩(wěn)定性和表達(dá)效率。建立更嚴(yán)格質(zhì)量控制體系，確保產(chǎn)品均一性和活性，滿足基因治療需求。3.談?wù)刴RNA工藝中質(zhì)量控制的重要性及關(guān)鍵環(huán)節(jié)。答：質(zhì)量控制很重要，關(guān)系到mRNA的活性、穩(wěn)定性及安全性，影響其應(yīng)用效果。關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括原料質(zhì)量把控，確保模板DNA、NTP等純度和活性；轉(zhuǎn)錄過程嚴(yán)格監(jiān)控溫度、酶活性等參數(shù)；純化環(huán)節(jié)保證去除雜質(zhì)且不損失mRNA活性；成品檢測，準(zhǔn)確測定濃度、純度、完整性和活性，只有各環(huán)節(jié)嚴(yán)格質(zhì)量控制，才能得到優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。4.結(jié)合實(shí)際，討論mRNA工藝員在工作中應(yīng)具備的技能和素質(zhì)。答：技能上要熟練掌握各種儀器操作，如移液器、離心機(jī)等使用。精通體外轉(zhuǎn)錄、純化等實(shí)驗(yàn)流程。具備數(shù)據(jù)分析能力，處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果。素質(zhì)方面要有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。有創(chuàng)新精神，不斷優(yōu)化工藝。有責(zé)任心，保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和產(chǎn)品質(zhì)量。具備團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力，與不同部門人員有效溝通合作。答案一、單項(xiàng)選擇題1.C2.B3.B4