1T/FDSAXXXX—202X外泌體抗衰功效等級(jí)評(píng)價(jià)指標(biāo)體系本文件規(guī)定了以細(xì)胞來源外泌體（以下簡(jiǎn)稱“外泌體”）為活性成分的護(hù)膚/化妝品及原料產(chǎn)品“抗衰功效”的評(píng)價(jià)原則、評(píng)價(jià)指標(biāo)體系、評(píng)價(jià)方法、取值規(guī)則與評(píng)分方法、評(píng)價(jià)結(jié)果判定與報(bào)告要求、質(zhì)量控制與復(fù)核。本文件適用于以外泌體為主要或輔助活性成分的體外功效驗(yàn)證、人體功效驗(yàn)證以及作為功效宣稱依據(jù)的第三方評(píng)價(jià)（包括但不限于原料、配方與最終產(chǎn)品）。本文件不取代藥用外泌體治療產(chǎn)品的藥品監(jiān)管要求。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T39100多肽抗氧化性測(cè)定DPPH和ABTS法GB/T39729細(xì)胞純度測(cè)定通用要求流式細(xì)胞測(cè)定法GB/T39730細(xì)胞計(jì)數(shù)通用要求流式細(xì)胞測(cè)定法GB/T42076.1生物技術(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)第1部分：細(xì)胞計(jì)數(shù)方法通則《中華人民共和國(guó)藥典（2025年版）》（以下簡(jiǎn)稱《藥典》）3術(shù)語、定義和縮略語GB/T39729、GB/T39730、GB/T42076.1、《藥典》界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1外泌體抗衰功效等級(jí)評(píng)價(jià)指標(biāo)體系evaluationindexsystemforanti-agingefficacygradeofexosomes以人源外泌體為活性物，按體外－組織－人體－安全四維加權(quán)評(píng)分，劃分Ⅰ-Ⅳ級(jí)抗衰宣稱的指標(biāo)集合。4評(píng)價(jià)原則外泌體抗衰功效等級(jí)評(píng)價(jià)應(yīng)符合下列基本原則。a）科學(xué)性原則。評(píng)價(jià)指標(biāo)應(yīng)覆蓋機(jī)制層面（分子/細(xì)胞）、組織層面（皮膚組織成分）、器官/個(gè)體層面（外觀、皺紋、彈性、保濕等），并采用可重復(fù)、可溯源的方法與儀器。b）分級(jí)復(fù)合評(píng)價(jià)原則。采用多層級(jí)指標(biāo)并加權(quán)評(píng)分（見第5章綜合體外機(jī)理證據(jù)與人體臨床證據(jù)進(jìn)行等級(jí)判定（以人體隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)數(shù)據(jù)為主導(dǎo)證據(jù)）。c）可重復(fù)性與報(bào)告透明性原則。所有外泌體樣品的分離/純化方法、粒徑與濃度、蛋白標(biāo)志物檢測(cè)方法、批次信息與穩(wěn)定性數(shù)據(jù)應(yīng)在報(bào)告中完整披露，推薦遵循MISEV列表（含“至少三項(xiàng)正向標(biāo)志+1項(xiàng)負(fù)向標(biāo)志/純度評(píng)估”）。d）安全優(yōu)先原則。人體試驗(yàn)必須先完成安全性評(píng)價(jià)（皮膚刺激、致敏、光毒性等，按相關(guān)國(guó)家/行業(yè)規(guī)范執(zhí)行），并在倫理委員會(huì)批準(zhǔn)下進(jìn)行。4.1實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)環(huán)境4.1.1實(shí)驗(yàn)室/生產(chǎn)場(chǎng)地應(yīng)滿足所在地生物安全管理要求，具備樣品前處理、分離純化、質(zhì)控檢測(cè)三大功能區(qū)，并實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)娜藛T與流程分隔以降低交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。T/FDSAXXXX—202X24.1.2關(guān)鍵設(shè)備（超速離心機(jī)、超濾裝置、液相色譜/尺寸排阻色譜設(shè)備、免疫親和柱、納米顆粒跟蹤分析儀NTA、透射電鏡TEM或冷凍電鏡Cryo-EM、Westernblot/流式細(xì)胞儀等）應(yīng)建立校準(zhǔn)與維護(hù)制度，校準(zhǔn)周期及合格判定依據(jù)應(yīng)記錄并可追溯。4.2人員資格操作人員應(yīng)經(jīng)過外泌體生物學(xué)、無菌操作、儀器操作、安全與質(zhì)量體系培訓(xùn)，并具備獨(dú)立正確操作的能力。4.3原材料與試劑4.3.1原材料（細(xì)胞系、培養(yǎng)基、血清/血漿樣品等）應(yīng)有來源可追溯性，細(xì)胞系應(yīng)通過細(xì)胞鑒定與無支原體檢測(cè)；若使用血清，應(yīng)說明是否去除外泌體（exosome-depletedserum）并記錄批次證書。4.3.2使用的緩沖液、酶和試劑應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室/產(chǎn)業(yè)質(zhì)量要求，關(guān)鍵緩沖液應(yīng)標(biāo)注制備配方、pH、滲透壓和保存條件。4.4生物安全與處置樣品廢棄物應(yīng)按生物危害廢棄物管理要求處置，關(guān)鍵步驟應(yīng)有明確處置流程和記錄。5評(píng)價(jià)指標(biāo)體系5.1指標(biāo)體系總覽外泌體抗衰功效評(píng)價(jià)指標(biāo)總覽（分層及權(quán)重）由表1模塊組成。表1外泌體抗衰功效評(píng)價(jià)指標(biāo)總覽（分層及權(quán)重）87866866433說明：A類以人體試驗(yàn)結(jié)果為主導(dǎo)證據(jù)，B類為機(jī)制與組織層證據(jù)，C類為最小表征與功能要5.2指標(biāo)取值與臨界值外泌體抗衰功效評(píng)價(jià)指標(biāo)取值與臨界值由表2模塊組成。表2外泌體抗衰功效評(píng)價(jià)指標(biāo)取值與臨界值<5%（0分）<3%(0)3<1(0)<5(0)<10%↓或無MTT或CCK-8增殖法+遷移10-19%↑遷移5-9%↑中度&標(biāo)記合格/要披露項(xiàng)”——除率（樣品按標(biāo)準(zhǔn)制備濃度單位：%）<30(0)<5%↑或無），20%或活性<1.0EU/mL(50)說明與來源：體外抗氧化測(cè)定方法可參照GB/T39100（DPPH/ABTS），6評(píng)價(jià)方法6.1樣品準(zhǔn)備與外泌體表征樣品準(zhǔn)備與外泌體表征作為先行步驟應(yīng)按照下列要求執(zhí)行。a）樣品批次信息（來源細(xì)胞系/組織、培養(yǎng)條件、分離方法、冷鏈/保存條件）須完整記錄。b）外泌體粒徑與濃度：采用納米顆粒跟蹤分析（NTA）或等效方法測(cè)定；報(bào)告D50/D90、平均粒徑、濃度（顆粒/mL）。c）表面與蛋白標(biāo)記：至少檢測(cè)3項(xiàng)EV相關(guān)正向標(biāo)志并列出至少一項(xiàng)負(fù)向標(biāo)志（如細(xì)胞核蛋白或內(nèi)體以外的污染標(biāo)志）以評(píng)估純度（參考MISEV2018建議）。d）內(nèi)毒素與微生物：按化妝品原料/藥典限值檢測(cè)；內(nèi)毒素應(yīng)滿足相應(yīng)應(yīng)用場(chǎng)景安全限值（若用于人體局部給藥，通常＜0.5EU/mL，具體以監(jiān)管要求為準(zhǔn)）。6.2體外機(jī)理學(xué)試驗(yàn)體外機(jī)理學(xué)試驗(yàn)應(yīng)按照下列要求執(zhí)行。a）ROS清除：DCFH-DA熒光測(cè)定或化學(xué)法；報(bào)告%ROS降低（對(duì)比陰性對(duì)照）。b）細(xì)胞模型：人源性真皮成纖維細(xì)胞（HDF）、角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）或三維表皮模型，檢測(cè)膠原合成（pro-collagenIELISA）、MMPs表達(dá)、細(xì)胞增殖/遷移（Scratchassay）等。T/FDSAXXXX—202X4c）抗氧化化學(xué)測(cè)定：ABTS/DPPH（參照GB/T39100）用于定量化比較外泌體制劑的直接電子清除能力。6.3人體功效試驗(yàn)6.3.1受試者與倫理受試者的倫理試驗(yàn)要求應(yīng)符合下列規(guī)定。a）受試者年齡建議35歲～65歲，男女不限但應(yīng)分層統(tǒng)計(jì)；樣本量按功效指標(biāo)計(jì)算（常見30人～60人/組8～12周試驗(yàn)；需要做更高等級(jí)宣稱應(yīng)采用更大樣本與多中心隨機(jī)雙盲對(duì)照）。b）必須獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)與受試者書面知情同意。c）試驗(yàn)須遵守NMPA指導(dǎo)原則關(guān)于隨機(jī)化、盲法、環(huán)境條件與數(shù)據(jù)記錄的要求。6.3.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)人體功效試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合下列規(guī)定。a）試驗(yàn)類型：隨機(jī)、對(duì)照、雙盲或單盲（取決于實(shí)際可行性），陽性對(duì)照（市售同類抗衰產(chǎn)品）或安慰劑對(duì)照均可。b）部位與給藥：非暴露對(duì)稱部位（上臂、背部或臉部對(duì)側(cè)），涂樣量按2.00±0.05mg/cm2（如有每日多次涂抹，間隔≥4h），執(zhí)行細(xì)節(jié)參照化妝品功效試驗(yàn)方法。c）環(huán)境條件：儀器測(cè)量與視覺評(píng)估在（21±1）℃、（50±10）%RH環(huán)境下進(jìn)行；受試者在測(cè)定前靜坐平衡20min～30min。6.3.3測(cè)量方法與時(shí)間點(diǎn)測(cè)量方法與時(shí)間點(diǎn)的要求應(yīng)符合下列規(guī)定。a）基線（T0）、中期（T4周）與終點(diǎn)（T8～12周），必要時(shí)增加早期（T2周）與長(zhǎng)期隨訪。b）儀器與主觀評(píng)分：3D皮膚形態(tài)成像（皺紋）、Cutometer（彈性）、Corneometer（角質(zhì)層含水）、Tewameter（TEWL）、高分辨位點(diǎn)照片（統(tǒng)一光源，色溫5500K～6500K）。視覺評(píng)分與志愿者自評(píng)為輔助證據(jù)。6.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)學(xué)處理要求應(yīng)符合下列規(guī)定。a）連續(xù)變量采用配對(duì)t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)（視正態(tài)性），組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-Whitney，多組比較采用ANOVA（或相應(yīng)非參數(shù)方法），顯著性水平α=0.05。b）對(duì)于多項(xiàng)指標(biāo)使用多重比較校正或主成分加權(quán)方法，最終按本標(biāo)準(zhǔn)第7章加權(quán)合并為綜合得分。7取值規(guī)則與評(píng)分方法7.1單項(xiàng)得分轉(zhuǎn)換每一指標(biāo)按照第5章的“A/B/C/D”檔位對(duì)應(yīng)得分。若指標(biāo)為“合格/不合格”則合格得滿分，不合格得0分。7.2加權(quán)合成分?jǐn)?shù)加權(quán)合成分?jǐn)?shù)計(jì)算方法按照下列要求執(zhí)行：a）單項(xiàng)實(shí)際得分×指標(biāo)權(quán)重→得到該指標(biāo)加權(quán)得分。b）所有指標(biāo)加權(quán)得分求和得到綜合得分（滿分100分）。c）示例公式：綜合得分=Σ（指標(biāo)_i_得分/100×指標(biāo)_i_權(quán)重%）。7.3等級(jí)劃分（抗衰功效等級(jí)）根據(jù)綜合得分劃分抗衰等級(jí)，由高到低共分四級(jí)，具體條件如下。a）等級(jí)I（顯著抗衰）：綜合得分≥85分，且至少A類中≥2項(xiàng)達(dá)到優(yōu)/陽性對(duì)照更優(yōu)。b）等級(jí)Ⅱ（良好抗衰）：70≤綜合得分＜85，A類至少1項(xiàng)良以上。c）等級(jí)Ⅲ（一定效果）：50≤綜合得分＜70，存在部分機(jī)制學(xué)證據(jù)與小幅臨床改善。d）等級(jí)Ⅳ（無顯著抗衰）：綜合得分＜50或人體臨床證據(jù)不足。T/FDSAXXXX—202X5e）說明：若受試僅提供體外機(jī)制學(xué)證據(jù)而無合理人體數(shù)據(jù)，則不得評(píng)定為等級(jí)I/Ⅱ,最高評(píng)價(jià)為“機(jī)制支持（待臨床驗(yàn)證）”。此規(guī)則旨在防止將體外數(shù)據(jù)直接等同臨床功效。該分級(jí)體系參照NMPA與行業(yè)指南對(duì)“人體證據(jù)優(yōu)先”的要求設(shè)計(jì)。8評(píng)價(jià)結(jié)果判定與報(bào)告要求8.1報(bào)告結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià)報(bào)告的結(jié)構(gòu)應(yīng)包括下列內(nèi)容。a）封面與摘要（包含最終等級(jí)）。b）試驗(yàn)/樣品概況（外泌體來源、批次、分離方法、儲(chǔ)存）。c）外泌體表征數(shù)據(jù)（NTA、WB、TEM/EM圖、標(biāo)記物定量）—遵循MISEV報(bào)告要點(diǎn)。d）體外/體內(nèi)/人體試驗(yàn)方法與原始數(shù)據(jù)（包括原始圖像、儀器輸出文件）。e）統(tǒng)計(jì)分析方法與結(jié)果（含p值、置信區(qū)間）。f）綜合評(píng)分、等級(jí)判定與評(píng)價(jià)結(jié)論（并列出局限性與建議）。g）安全性與不良事件報(bào)告。h）附件：簽字頁(yè)、倫理批準(zhǔn)、受試者同意書復(fù)印件（審稿版留痕）等。8.2公開披露要求為便于同行與監(jiān)管核查，建議在產(chǎn)品功效宣稱材料中披露：外泌體的分離方法、粒徑/濃度、至少三項(xiàng)蛋白標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果、人體試驗(yàn)設(shè)計(jì)和關(guān)鍵原始數(shù)據(jù)摘要（非個(gè)人隱私）。9質(zhì)量控制與復(fù)核9.1質(zhì)量控制評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)應(yīng)具備與項(xiàng)目相適應(yīng)的資質(zhì)（具備人體功效評(píng)價(jià)資質(zhì)或GLP/ISO17025類檢測(cè)能力）并遵守倫理要求與數(shù)據(jù)完整性規(guī)范。9.2復(fù)核建議復(fù)核流程：樣品雙盲編號(hào)→第三方獨(dú)立重復(fù)關(guān)鍵表征（至少2個(gè)設(shè)備/實(shí)驗(yàn)室交叉驗(yàn)證）→人體數(shù)據(jù)由獨(dú)立統(tǒng)計(jì)學(xué)家復(fù)核。T/FDSAXXXX—202X6（資料性）示例數(shù)據(jù)表格與計(jì)算示例A.1示例數(shù)據(jù)表格與計(jì)算示例下為示例，用于說明如何從單項(xiàng)原始數(shù)據(jù)計(jì)算綜合評(píng)分。表A.1指標(biāo)權(quán)重表（摘錄）8A4TEWL7866866433A.2計(jì)算示例（假設(shè)性原始結(jié)果）計(jì)算示例如下：A1：皺紋體積下降18%→良→得分80→加權(quán)得分=80/100×15=12.0A2：R2提高12%→良→80→加權(quán)=8.0A3：角質(zhì)層含水提高5%→中→50→加權(quán)=4.0...（依次計(jì)算）最終綜合得分（示例匯總）=76.5→等級(jí)Ⅱ（良好抗衰）注：實(shí)際報(bào)告需給出完整原始數(shù)據(jù)表、統(tǒng)計(jì)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果與受試者分布明細(xì)。T/FDSAXXXX—202X7參考文獻(xiàn)[1]ThéryC,WitwerkW,AikawaE,etal.Minimalinformationforstudiesofextracellularvesicles2018(MISEV2018):apositionstatementoftheInternationalSocietyforExtracellularVesiclesandupdateoftheMISEV2014guidelines.JExtracellVesicles.2018Nov23;7(1):1535750.doi:10.1080/20013078.2018.1535750.[2]WitwerkW,VanBalkomBWM,BrunoS,etal.De