新余市中醫(yī)院分子雜交技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.分子雜交技術(shù)中，最常用的標(biāo)記探針是？A.RNA探針B.DNA探針C.蛋白質(zhì)探針D.抗體探針2.在Southernblotting實(shí)驗(yàn)中，下列哪項(xiàng)操作錯誤？A.DNA樣品需經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離B.轉(zhuǎn)膜后需用變性液處理C.探針需用甲醛變性D.最后用RNA雜交液進(jìn)行雜交3.Northernblotting主要用于檢測？A.蛋白質(zhì)表達(dá)B.mRNA表達(dá)C.DNA序列D.轉(zhuǎn)錄因子活性4.RT-PCR技術(shù)的關(guān)鍵步驟是？A.探針標(biāo)記B.引物設(shè)計(jì)C.電泳分析D.熒光定量5.實(shí)時熒光PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用是？A.標(biāo)記探針B.激發(fā)熒光C.擴(kuò)增模板D.阻斷非特異性結(jié)合6.原位雜交技術(shù)（ISH）主要用于？A.液體樣本檢測B.組織切片分析C.細(xì)胞培養(yǎng)分析D.基因芯片檢測7.FISH技術(shù)中，熒光標(biāo)記探針需用哪種儀器檢測？A.PCR儀B.電泳儀C.共聚焦顯微鏡D.流式細(xì)胞儀8.在基因診斷中，PCR-ELISA技術(shù)主要用于？A.DNA序列分析B.RNA表達(dá)檢測C.蛋白質(zhì)抗體檢測D.病毒載量測定9.分子雜交技術(shù)的核心原理是？A.互補(bǔ)堿基配對B.抗原抗體結(jié)合C.蛋白質(zhì)變性D.DNA剪切10.熒光原位雜交（FISH）在臨床中的應(yīng)用包括？A.染色體數(shù)目異常檢測B.癌癥基因擴(kuò)增檢測C.病毒感染診斷D.以上都是二、多選題（每題3分，共10題）1.Southernblotting實(shí)驗(yàn)的步驟包括？A.DNA電泳分離B.轉(zhuǎn)膜C.探針雜交D.熒光顯影2.RT-PCR技術(shù)的優(yōu)勢包括？A.高靈敏度B.特異性強(qiáng)C.操作簡便D.可定量分析3.原位雜交技術(shù)（ISH）的適用范圍包括？A.組織病理學(xué)診斷B.腫瘤標(biāo)志物檢測C.病毒感染定位D.基因表達(dá)研究4.FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用包括？A.染色體平衡易位檢測B.染色體缺失檢測C.融合基因檢測D.病毒基因組定位5.實(shí)時熒光PCR（qPCR）的注意事項(xiàng)包括？A.引物需嚴(yán)格設(shè)計(jì)B.模板需無降解C.需設(shè)置陰性對照D.需進(jìn)行熔解曲線分析6.分子雜交技術(shù)的局限性包括？A.探針特異性要求高B.操作步驟復(fù)雜C.成本較高D.適用于大量樣本檢測7.基因診斷中常用的分子雜交技術(shù)包括？A.PCR-ELISAB.FISHC.ISHD.Southernblotting8.熒光標(biāo)記探針的類型包括？A.FITC（綠色熒光）B.TexasRed（紅色熒光）C.Cy3（橙色熒光）D.Digoxigenin（地高辛標(biāo)記）9.RT-PCR技術(shù)在腫瘤診斷中的應(yīng)用包括？A.腫瘤相關(guān)基因檢測B.腫瘤微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析C.融合基因檢測D.病毒感染定量10.分子雜交技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)包括？A.探針純度檢測B.雜交條件優(yōu)化C.陰性對照設(shè)置D.定量結(jié)果驗(yàn)證三、判斷題（每題1分，共20題）1.Southernblotting實(shí)驗(yàn)中，DNA需經(jīng)變性處理才能與探針結(jié)合。（√）2.Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，RNA樣品無需變性處理。（×）3.RT-PCR技術(shù)只能檢測mRNA表達(dá)。（×）4.FISH技術(shù)需用熒光顯微鏡檢測雜交信號。（√）5.原位雜交技術(shù)（ISH）只能用于組織切片。（×）6.實(shí)時熒光PCR（qPCR）可實(shí)時監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程。（√）7.PCR-ELISA技術(shù)結(jié)合了PCR的高靈敏度和ELISA的定量優(yōu)勢。（√）8.分子雜交技術(shù)的探針必須為放射性標(biāo)記。（×）9.熒光原位雜交（FISH）可檢測染色體水平基因擴(kuò)增。（√）10.基因芯片技術(shù)屬于分子雜交技術(shù)的一種。（×）11.RT-PCR技術(shù)中，反轉(zhuǎn)錄酶需在高溫條件下工作。（×）12.Southernblotting實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)移效率越高越好。（√）13.FISH技術(shù)可檢測活細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)。（×）14.實(shí)時熒光PCR（qPCR）需用專用熒光染料。（×）15.分子雜交技術(shù)的雜交溫度需根據(jù)探針長度優(yōu)化。（√）16.原位雜交技術(shù)（ISH）可檢測細(xì)胞內(nèi)的mRNA定位。（√）17.PCR-ELISA技術(shù)主要用于病原體檢測。（×）18.熒光標(biāo)記探針的熒光強(qiáng)度與雜交效率成正比。（√）19.分子雜交技術(shù)的應(yīng)用不受樣本類型限制。（×）20.質(zhì)量控制是分子雜交技術(shù)的重要環(huán)節(jié)。（√）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述Southernblotting實(shí)驗(yàn)的基本原理和步驟。2.比較RT-PCR技術(shù)與普通PCR技術(shù)的區(qū)別。3.簡述FISH技術(shù)在臨床腫瘤診斷中的應(yīng)用價值。4.如何優(yōu)化分子雜交技術(shù)的雜交條件？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合新余市中醫(yī)院臨床需求，論述分子雜交技術(shù)在中醫(yī)腫瘤診斷中的應(yīng)用前景。2.分析分子雜交技術(shù)在病原體快速檢測中的優(yōu)勢和局限性，并提出改進(jìn)建議。答案與解析一、單選題答案1.B2.D3.B4.B5.B6.B7.C8.C9.A10.D二、多選題答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD三、判斷題答案1.√2.×3.×4.√5.×6.√7.√8.×9.√10.×11.×12.√13.×14.×15.√16.√17.×18.√19.×20.√四、簡答題答案1.Southernblotting實(shí)驗(yàn)的基本原理和步驟-原理：通過電泳將DNA樣品分離，轉(zhuǎn)移至膜上，用標(biāo)記探針雜交，最后檢測雜交信號。-步驟：①DNA電泳分離→②轉(zhuǎn)移至尼龍膜→③封閉非特異性位點(diǎn)→④探針雜交→⑤洗膜→⑥顯影。2.RT-PCR技術(shù)與普通PCR技術(shù)的區(qū)別-RT-PCR需先通過反轉(zhuǎn)錄酶將mRNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增；普通PCR直接擴(kuò)增DNA模板。-RT-PCR用于檢測RNA表達(dá)，普通PCR用于檢測DNA序列。3.FISH技術(shù)在臨床腫瘤診斷中的應(yīng)用價值-可檢測染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常（如平衡易位、缺失），用于白血病和實(shí)體瘤的分子分型。-可檢測融合基因（如BCR-ABL，慢粒白血病診斷）。4.優(yōu)化分子雜交技術(shù)的雜交條件-探針濃度優(yōu)化：避免過高或過低影響雜交效率。-雜交溫度優(yōu)化：根據(jù)探針Tm值調(diào)整，提高特異性。-雜交時間控制：過長或過短均影響結(jié)果。-轉(zhuǎn)膜效率檢查：確保DNA完全轉(zhuǎn)移至膜上。五、論述題答案1.分子雜交技術(shù)在中醫(yī)腫瘤診斷中的應(yīng)用前景-中醫(yī)腫瘤診斷需結(jié)合基因檢測（如mRNA表達(dá)差異、癌基因擴(kuò)增），分子雜交技術(shù)可提供客觀依據(jù)。-新余地區(qū)腫瘤高發(fā)（如肺癌、胃癌），F(xiàn)ISH和ISH可輔助中醫(yī)辨證分型（如氣虛、血瘀證與基因表達(dá)關(guān)聯(lián)）。-結(jié)合基因診斷可指導(dǎo)中醫(yī)用藥（如靶向藥物與基因分型）。2.