上饒市中醫(yī)院「熒光原位雜交」技術(shù)操作與報告解讀考核一、單選題（每題2分，共20題）說明：下列每題只有一個最佳答案。1.熒光原位雜交（FISH）技術(shù)中，用于標記探針的熒光染料不包括以下哪種？A.FITC（異硫氰酸熒光素）B.Cy3（Cy3熒光染料）C.DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）D.TexasRed（四氯熒光素）2.在FISH實驗中，雜交前預(yù)處理細胞核的主要目的是？A.增加細胞膜的通透性B.消除背景熒光干擾C.使染色體充分展開，提高雜交效率D.保護熒光染料不被降解3.FISH技術(shù)中，探針與靶序列結(jié)合的特異性主要依賴于？A.溫度梯度B.探針的堿基序列互補性C.鹽濃度D.熒光染料的種類4.以下哪種方法常用于提高FISH信號的穩(wěn)定性？A.使用低濃度雜交緩沖液B.延長雜交時間C.高溫變性探針D.增加封阻劑濃度5.FISH報告中，信號點呈彌散分布可能提示？A.探針雜交成功B.染色體結(jié)構(gòu)異常C.核膜結(jié)構(gòu)破壞D.實驗操作失誤6.在檢測染色體數(shù)目異常時，F(xiàn)ISH技術(shù)常用于？A.檢測基因擴增B.檢測染色體結(jié)構(gòu)重排C.檢測非整倍體D.檢測基因缺失7.FISH技術(shù)中，探針的標記方式不包括？A.直接標記B.間接標記C.雙標記D.多重標記8.以下哪種試劑用于淬滅非特異性熒光？A.甲醛溶液B.胰蛋白酶C.封阻劑（如鮭魚精DNA）D.抗體9.FISH報告中，信號點缺失可能提示？A.探針雜交效率高B.染色體片段缺失C.核膜結(jié)構(gòu)完整D.實驗操作規(guī)范10.在腫瘤遺傳學檢測中，F(xiàn)ISH技術(shù)常用于？A.檢測基因突變B.檢測染色體脆性位點C.檢測HER2基因擴增D.檢測端粒長度二、多選題（每題3分，共10題）說明：下列每題有多個正確答案，錯選、漏選均不得分。1.FISH實驗中，影響雜交效率的因素包括？A.探針濃度B.雜交溫度C.細胞固定方法D.標記熒光染料的種類2.FISH報告中，信號點異常可能提示？A.染色體三體B.基因易位C.探針非特異性結(jié)合D.染色體斷裂3.在進行FISH實驗時，以下哪些操作有助于提高信號質(zhì)量？A.優(yōu)化探針濃度B.使用低pH緩沖液C.預(yù)雜交處理D.適當延長雜交時間4.FISH技術(shù)可用于檢測哪些遺傳異常？A.染色體數(shù)目異常B.基因擴增C.染色體結(jié)構(gòu)異常D.端粒重復(fù)序列異常5.FISH報告中，信號點成簇分布可能提示？A.基因擴增B.染色體倒位C.染色體多體D.探針非特異性結(jié)合6.FISH實驗中，以下哪些試劑可用于封阻非特異性位點？A.鮭魚精DNAB.同源序列DNAC.RNAaseD.蛋白酶K7.在腫瘤FISH檢測中，常用哪些探針？A.HER2基因探針B.染色體enumerationprobe（CEP）C.ALK基因探針D.染色體著絲粒探針8.FISH報告中，信號點偏移可能提示？A.染色體結(jié)構(gòu)異常B.探針雜交失敗C.核膜結(jié)構(gòu)破壞D.實驗操作不規(guī)范9.FISH技術(shù)中，以下哪些方法可提高信號穩(wěn)定性？A.使用固定劑優(yōu)化方案B.增加雜交緩沖液中的硫酸葡聚糖C.預(yù)雜交處理D.使用高純度探針10.FISH報告中，信號點數(shù)量異?？赡芴崾荆緼.染色體非整倍體B.基因缺失C.探針雜交效率低D.核膜結(jié)構(gòu)異常三、判斷題（每題2分，共10題）說明：下列每題判斷對錯，正確得2分，錯誤得0分。1.FISH技術(shù)可以檢測活細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)。2.DAPI染料可用于FISH實驗中的探針標記。3.FISH報告中，信號點越密集，說明探針雜交效率越高。4.高溫變性可以提高FISH實驗的特異性。5.FISH技術(shù)只能檢測染色體數(shù)目異常，不能檢測結(jié)構(gòu)異常。6.封阻劑可以消除非特異性熒光信號。7.FISH報告中，信號點偏移通常提示染色體結(jié)構(gòu)異常。8.FISH技術(shù)常用于腫瘤遺傳學檢測，但不能檢測基因突變。9.FISH實驗中，探針濃度越高，信號越強。10.FISH報告中，信號點缺失可能提示探針雜交失敗。四、簡答題（每題5分，共5題）說明：請簡要回答下列問題。1.簡述FISH技術(shù)在臨床應(yīng)用中的優(yōu)勢。2.FISH實驗中，如何提高信號穩(wěn)定性？3.FISH報告中，信號點異?？赡芴崾灸男┻z傳異常？4.FISH實驗中，如何避免非特異性熒光信號？5.FISH技術(shù)可用于檢測哪些遺傳疾病？五、論述題（每題10分，共2題）說明：請詳細回答下列問題。1.比較FISH技術(shù)與PCR技術(shù)在遺傳檢測中的優(yōu)缺點。2.結(jié)合上饒地區(qū)常見遺傳病，論述FISH技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用價值。答案與解析一、單選題答案與解析1.C（DAPI主要用于細胞核染色，不屬于FISH探針標記染料。）2.C（預(yù)處理細胞核可使其充分展開，提高探針結(jié)合效率。）3.B（特異性依賴探針與靶序列的堿基互補性。）4.D（增加封阻劑濃度可減少非特異性結(jié)合。）5.C（彌散分布可能提示核膜結(jié)構(gòu)破壞。）6.C（檢測非整倍體如三體、單體等。）7.D（多重標記指同時檢測多個目標，不屬于標記方式。）8.C（封阻劑可抑制非特異性結(jié)合。）9.B（信號缺失提示靶序列缺失或探針雜交失敗。）10.C（HER2基因擴增是乳腺癌常見遺傳標志。）二、多選題答案與解析1.A,B,C（探針濃度、雜交溫度、固定方法均影響雜交效率。）2.A,B,D（三體、易位、斷裂均為常見異常。）3.A,C,D（優(yōu)化濃度、預(yù)雜交、延長時間可提高信號質(zhì)量。）4.A,B,C,D（FISH可檢測數(shù)目、結(jié)構(gòu)、擴增、端粒異常。）5.A,C（成簇分布提示基因擴增或多體。）6.A,B（鮭魚精DNA和同源序列DNA用于封阻非特異性位點。）7.A,B,C（HER2、CEP、ALK是腫瘤常用探針。）8.A,D（偏移提示結(jié)構(gòu)異?；虿僮鞑灰?guī)范。）9.A,B,C（優(yōu)化固定劑、硫酸葡聚糖、預(yù)雜交可提高穩(wěn)定性。）10.A,B,C（非整倍體、缺失、效率低均可能導(dǎo)致信號數(shù)量異常。）三、判斷題答案與解析1.錯誤（FISH需固定細胞，不能檢測活細胞。）2.錯誤（DAPI是核染色劑，非探針標記。）3.錯誤（密集信號可能提示非特異性結(jié)合。）4.正確（高溫變性可提高特異性。）5.錯誤（FISH可檢測數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常。）6.正確（封阻劑可消除非特異性熒光。）7.正確（偏移通常提示結(jié)構(gòu)異常。）8.錯誤（FISH可間接檢測基因突變。）9.錯誤（過高濃度可能抑制結(jié)合。）10.正確（缺失可能提示探針雜交失敗。）四、簡答題答案與解析1.FISH技術(shù)優(yōu)勢：-可在染色體水平檢測基因擴增、缺失、易位等異常；-操作相對簡單，結(jié)果直觀；-可用于活細胞檢測（如流式細胞術(shù)結(jié)合）。2.提高信號穩(wěn)定性方法：-優(yōu)化固定劑濃度；-增加雜交緩沖液硫酸葡聚糖；-預(yù)雜交處理減少非特異性結(jié)合。3.信號點異常提示：-數(shù)量異常：非整倍體（如三體、單體）；-結(jié)構(gòu)異常：易位、倒位；-基因擴增：信號成簇分布。4.避免非特異性信號方法：-使用高純度探針；-增加封阻劑（鮭魚精DNA）；-優(yōu)化雜交條件（溫度、時間）。5.FISH檢測遺傳疾?。?染色體數(shù)目異常（如唐氏綜合征）；-腫瘤相關(guān)遺傳?。℉ER2、ALK擴增）；-染色體結(jié)構(gòu)異常（如平衡易位）。五、論述題答案與解析1.FISH與PCR技術(shù)比較：-FISH：檢測染色體水平異常，直觀；-PCR：檢測基因水平異常，靈敏；-差異：FISH需固定細胞，PCR可檢測RNA/DNA；