免疫學(xué)免疫原理規(guī)范一、免疫學(xué)免疫原理概述

免疫學(xué)是研究生物體免疫系統(tǒng)功能、結(jié)構(gòu)和調(diào)控機(jī)制的學(xué)科。其核心原理涉及免疫細(xì)胞的相互作用、免疫分子的介導(dǎo)以及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。理解免疫原理對(duì)于疾病診斷、治療和疫苗開(kāi)發(fā)具有重要意義。

（一）免疫系統(tǒng)組成

1.免疫器官：

(1)中樞免疫器官：骨髓、胸腺，負(fù)責(zé)免疫細(xì)胞的生成和成熟。

(2)外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟、黏膜相關(guān)淋巴組織，參與免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)。

2.免疫細(xì)胞：

(1)淋巴細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞，分別參與細(xì)胞免疫、體液免疫和天然免疫。

(2)非淋巴細(xì)胞：巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、粒細(xì)胞等，參與抗原呈遞和炎癥反應(yīng)。

3.免疫分子：

(1)抗體：由B細(xì)胞分化而來(lái)，能與特定抗原結(jié)合。

(2)細(xì)胞因子：如白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能。

(3)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）：參與T細(xì)胞識(shí)別抗原。

（二）免疫應(yīng)答過(guò)程

1.抗原識(shí)別：

(1)抗原呈遞：抗原提呈細(xì)胞（APC）如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞通過(guò)MHC分子呈遞抗原。

(2)T細(xì)胞受體（TCR）識(shí)別：CD4+T細(xì)胞識(shí)別MHC-II類(lèi)分子，CD8+T細(xì)胞識(shí)別MHC-I類(lèi)分子。

2.免疫細(xì)胞活化：

(1)T細(xì)胞活化：需同時(shí)接受APC提呈的抗原和共刺激信號(hào)（如CD28-CD80/CD86）。

(2)B細(xì)胞活化：需B細(xì)胞受體（BCR）識(shí)別抗原，并接受T細(xì)胞輔助（如CD40-CD40L）。

3.免疫效應(yīng)：

(1)T細(xì)胞效應(yīng)：CD8+T細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

(2)B細(xì)胞效應(yīng)：分化為漿細(xì)胞，分泌抗體中和抗原。

（三）免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

1.免疫耐受：

(1)中央耐受：T細(xì)胞在胸腺發(fā)育過(guò)程中經(jīng)歷陰性選擇，避免攻擊自身抗原。

(2)外周耐受：通過(guò)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）或抑制性信號(hào)（如PD-L1/PD-1）避免過(guò)度應(yīng)答。

2.免疫抑制：

(1)腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等抑制免疫應(yīng)答。

(2)肝素酶等酶類(lèi)降解免疫激活分子，如TNF-α。

二、免疫原理應(yīng)用

（一）疾病診斷

1.免疫熒光檢測(cè)：利用抗體標(biāo)記抗原，通過(guò)熒光顯微鏡觀察免疫細(xì)胞或組織中的目標(biāo)分子。

2.流式細(xì)胞術(shù)：通過(guò)抗體識(shí)別不同免疫細(xì)胞亞群，定量分析細(xì)胞表型和數(shù)量。

3.ELISA檢測(cè)：通過(guò)酶標(biāo)抗體檢測(cè)樣本中的抗體或細(xì)胞因子水平。

（二）疫苗開(kāi)發(fā)

1.死亡疫苗：完整病原體滅活，誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，但安全性較低。

2.減毒活疫苗：弱化病原體，保留免疫原性，適用于多次接種。

3.亞單位疫苗：僅使用病原體抗原成分，如重組蛋白或多糖，安全性更高。

（三）免疫治療

1.過(guò)繼性細(xì)胞療法：提取患者免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞）體外改造后回輸，用于腫瘤或感染治療。

2.免疫檢查點(diǎn)抑制劑：阻斷PD-1/PD-L1或CTLA-4信號(hào)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答。

3.單克隆抗體療法：使用工程化抗體靶向阻斷炎癥或腫瘤相關(guān)通路。

三、免疫原理研究方法

（一）體外實(shí)驗(yàn)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離免疫細(xì)胞，通過(guò)添加刺激物或抑制劑研究其功能。

2.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）：定量檢測(cè)細(xì)胞因子、抗體等分子。

3.流式細(xì)胞術(shù)：分析細(xì)胞表面標(biāo)記和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

1.基因敲除/敲入模型：構(gòu)建特定基因缺失或過(guò)表達(dá)的動(dòng)物，研究免疫機(jī)制。

2.熒光成像技術(shù)：實(shí)時(shí)觀察活體動(dòng)物中的免疫細(xì)胞遷移和分布。

3.免疫組織化學(xué)：通過(guò)抗體染色觀察組織切片中的免疫細(xì)胞和分子。

（三）計(jì)算免疫學(xué)

1.網(wǎng)絡(luò)動(dòng)力學(xué)模型：模擬免疫細(xì)胞間的相互作用和信號(hào)傳遞。

2.機(jī)器學(xué)習(xí)算法：分析大規(guī)模免疫組學(xué)數(shù)據(jù)，預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展或治療反應(yīng)。

3.虛擬篩選：通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬篩選免疫藥物靶點(diǎn)。

**一、免疫學(xué)免疫原理概述**

免疫學(xué)是研究生物體免疫系統(tǒng)功能、結(jié)構(gòu)和調(diào)控機(jī)制的學(xué)科。其核心原理涉及免疫細(xì)胞的相互作用、免疫分子的介導(dǎo)以及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。理解免疫原理對(duì)于疾病診斷、治療和疫苗開(kāi)發(fā)具有重要意義。

（一）免疫系統(tǒng)組成

1.免疫器官：

(1)中樞免疫器官：骨髓、胸腺，負(fù)責(zé)免疫細(xì)胞的生成和成熟。

*骨髓：是所有造血干細(xì)胞的來(lái)源，也是B細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場(chǎng)所。在骨髓中，造血干細(xì)胞經(jīng)歷分化、選擇和增殖過(guò)程，最終形成成熟的B細(xì)胞、部分粒系細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。骨髓內(nèi)的微環(huán)境（如基質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞因子）對(duì)免疫細(xì)胞的發(fā)育至關(guān)重要。

*胸腺：是T細(xì)胞發(fā)育成熟的專(zhuān)屬場(chǎng)所。未成熟的T細(xì)胞（胸腺細(xì)胞）從骨髓遷移至胸腺，經(jīng)歷陽(yáng)性選擇（確保其能識(shí)別MHC分子）和陰性選擇（去除能攻擊自身抗原的細(xì)胞），最終形成成熟的CD4+T輔助細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞。

(2)外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟、黏膜相關(guān)淋巴組織，參與免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)。

*淋巴結(jié)：位于淋巴循環(huán)的節(jié)點(diǎn)處，是T細(xì)胞和B細(xì)胞相遇、發(fā)生免疫應(yīng)答的主要場(chǎng)所。淋巴結(jié)內(nèi)包含皮質(zhì)（B細(xì)胞區(qū)、T細(xì)胞區(qū)）和髓質(zhì)（濾泡、髓索、紅髓）。當(dāng)抗原通過(guò)淋巴液到達(dá)淋巴結(jié)時(shí)，會(huì)激活局部免疫細(xì)胞，引發(fā)淋巴結(jié)腫大。

*脾臟：是最大的外周免疫器官，主要濾過(guò)血液。脾臟包含紅髓（吞噬血液中的病原體和細(xì)胞碎片）和白髓（類(lèi)似淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)，包含T細(xì)胞區(qū)和B細(xì)胞區(qū)）。脾臟在清除血液中的病原體、產(chǎn)生抗體以及啟動(dòng)血源性免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

*黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）：包括派爾集合淋巴結(jié)（Peyer'spatches，小腸）、闌尾、扁桃體等，位于與外界接觸的黏膜表面。MALT是黏膜免疫的主要場(chǎng)所，能產(chǎn)生分泌型抗體（IgA），防止病原體在黏膜定植。

2.免疫細(xì)胞：

(1)淋巴細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞，分別參與細(xì)胞免疫、體液免疫和天然免疫。

*T細(xì)胞：起源于骨髓，但在胸腺成熟。主要功能是識(shí)別抗原并直接殺傷靶細(xì)胞（CD8+T細(xì)胞）或輔助B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞）。T細(xì)胞表面標(biāo)志物包括CD3、CD4、CD8等。

*B細(xì)胞：起源于骨髓，在骨髓或?yàn)V泡中成熟。主要功能是識(shí)別抗原并分化為漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）或記憶B細(xì)胞。B細(xì)胞表面標(biāo)志物包括CD19、CD20、BCR（B細(xì)胞受體）。

*NK細(xì)胞：起源于骨髓，屬于天然免疫細(xì)胞。主要功能是無(wú)需預(yù)先致敏即可殺傷病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，并通過(guò)分泌細(xì)胞因子（如IFN-γ）調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

(2)非淋巴細(xì)胞：巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、粒細(xì)胞等，參與抗原呈遞和炎癥反應(yīng)。

*巨噬細(xì)胞：來(lái)源于骨髓的單核細(xì)胞，在組織內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞。功能包括吞噬清除病原體和壞死細(xì)胞、呈遞抗原給T細(xì)胞、分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)炎癥和免疫應(yīng)答。

*樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）：是體內(nèi)最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞。存在于外周組織（如皮膚、黏膜），能捕獲抗原并遷移至淋巴結(jié)，將抗原信息呈遞給T細(xì)胞，啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

*粒細(xì)胞：包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞。主要參與炎癥反應(yīng)和抗感染，其中中性粒細(xì)胞是最主要的吞噬細(xì)胞。

3.免疫分子：

(1)抗體：由B細(xì)胞分化而來(lái)的漿細(xì)胞產(chǎn)生，能與特定抗原結(jié)合?？贵w結(jié)構(gòu)包括重鏈和輕鏈，通過(guò)變構(gòu)區(qū)識(shí)別抗原表位。主要功能包括中和毒素、調(diào)理吞噬、激活補(bǔ)體、結(jié)合Fc受體（介導(dǎo)ADCC）。

*主要類(lèi)別：IgM、IgG、IgA、IgE、IgD，不同類(lèi)別抗體具有不同的分布和功能。

*作用機(jī)制：抗體通過(guò)與病原體或毒素結(jié)合，阻止其與宿主細(xì)胞相互作用；通過(guò)調(diào)理作用增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對(duì)其的吞噬；通過(guò)激活補(bǔ)體系統(tǒng)裂解病原體；通過(guò)ADCC效應(yīng)細(xì)胞（如NK細(xì)胞）殺傷靶細(xì)胞。

(2)細(xì)胞因子：如白細(xì)胞介素（IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、干擾素（IFN）、集落刺激因子（CSF）等，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能。細(xì)胞因子通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面的特定受體，介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊，影響細(xì)胞的增殖、分化、存活和功能。

*作用舉例：IL-2主要由T細(xì)胞分泌，促進(jìn)T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖和分化；IFN-γ主要由T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用；TNF-α主要由巨噬細(xì)胞分泌，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。

(3)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）：參與T細(xì)胞識(shí)別抗原。MHC分子分為I類(lèi)和II類(lèi)。

*MHC-I類(lèi)：表達(dá)于所有有核細(xì)胞表面，呈遞內(nèi)源性抗原（如病毒蛋白、腫瘤抗原）給CD8+T細(xì)胞。

*MHC-II類(lèi)：表達(dá)于APC（巨噬細(xì)胞、DC、B細(xì)胞）表面，呈遞外源性抗原（如細(xì)菌蛋白）給CD4+T細(xì)胞。

*生物學(xué)意義：MHC分子是免疫識(shí)別的“橋梁”，確保T細(xì)胞能特異性識(shí)別“自身”MHC分子提呈的“非己”抗原。

（二）免疫應(yīng)答過(guò)程

1.抗原識(shí)別：

(1)抗原呈遞：抗原提呈細(xì)胞（APC）如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞通過(guò)MHC分子呈遞抗原。外源性抗原（如經(jīng)吞噬、吞飲或受體介導(dǎo)攝取的抗原）在溶酶體中降解后，與MHC-II類(lèi)分子結(jié)合；內(nèi)源性抗原（如病毒或腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)）在蛋白酶體中降解后，與MHC-I類(lèi)分子結(jié)合。

(2)T細(xì)胞受體（TCR）識(shí)別：T細(xì)胞受體（TCR）是T細(xì)胞識(shí)別抗原的主要結(jié)構(gòu)。CD4+T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別由MHC-II類(lèi)分子提呈的抗原肽；CD8+T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別由MHC-I類(lèi)分子提呈的抗原肽。TCR識(shí)別的特異性是免疫應(yīng)答高度特異性的基礎(chǔ)。

2.免疫細(xì)胞活化：

(1)T細(xì)胞活化：需同時(shí)接受APC提呈的抗原（第一信號(hào)）和共刺激信號(hào)（第二信號(hào)）。

*第一信號(hào)：TCR與MHC-抗原肽復(fù)合物的結(jié)合。

*第二信號(hào)：APC表面的共刺激分子（如B7家族的CD80、CD86）與T細(xì)胞表面的共刺激分子（如CD28）的結(jié)合。僅接受第一信號(hào)的T細(xì)胞會(huì)進(jìn)入無(wú)反應(yīng)或凋亡狀態(tài)（“耗竭”）。

*腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（TRAF）家族成員（如TRAF6）在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用，激活NF-κB和AP-1等轉(zhuǎn)錄因子，驅(qū)動(dòng)T細(xì)胞的增殖和分化。

(2)B細(xì)胞活化：需B細(xì)胞受體（BCR）識(shí)別抗原，并接受T細(xì)胞輔助（對(duì)于TD抗原）。

*BCR識(shí)別：B細(xì)胞通過(guò)BCR（膜結(jié)合型抗體）直接識(shí)別和結(jié)合抗原。這一過(guò)程需要抗原具有合適的構(gòu)象和表位。

*T細(xì)胞輔助：對(duì)于TD抗原（如蛋白質(zhì)抗原），B細(xì)胞的完全活化還需要來(lái)自CD4+T細(xì)胞的輔助。輔助T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別APC提呈的同一抗原肽，并分泌細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-6），或通過(guò)細(xì)胞接觸直接傳遞信號(hào)（如CD40-CD40L相互作用）。

3.免疫效應(yīng)：

(1)T細(xì)胞效應(yīng)：

*CD8+T細(xì)胞（效應(yīng)T細(xì)胞）：在活化后分化為效應(yīng)T細(xì)胞，表達(dá)細(xì)胞毒性分子（如顆粒酶、穿孔素）或分泌細(xì)胞因子（如IFN-γ、TNF-α）。其功能是直接殺傷被病毒感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞（特異性細(xì)胞毒性）。

*CD4+T細(xì)胞（輔助T細(xì)胞）：根據(jù)功能進(jìn)一步分化為T(mén)h1、Th2、Th17、Treg等亞群。

*Th1細(xì)胞：分泌IL-2、IFN-γ，輔助細(xì)胞免疫，參與抗感染（尤其是胞內(nèi)寄生菌）。

*Th2細(xì)胞：分泌IL-4、IL-5、IL-13，輔助體液免疫和過(guò)敏反應(yīng)，參與抗寄生蟲(chóng)感染。

*Th17細(xì)胞：分泌IL-17、IL-22，參與炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)，但在某些自身免疫性疾病中起致病作用。

*Treg細(xì)胞（調(diào)節(jié)性T細(xì)胞）：分泌IL-10、TGF-β，抑制其他免疫細(xì)胞的活性，維持免疫耐受。

(2)B細(xì)胞效應(yīng)：

*B細(xì)胞活化后，在T細(xì)胞輔助下分化為漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞。

*漿細(xì)胞：是終末分化細(xì)胞，主要功能是大量合成和分泌抗體。漿細(xì)胞通常位于淋巴結(jié)和脾臟的髓質(zhì)區(qū)域，壽命較短（幾天到幾周）。

*記憶B細(xì)胞：壽命長(zhǎng)，能在再次接觸相同抗原時(shí)快速活化并分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生高效價(jià)抗體，提供長(zhǎng)期免疫保護(hù)。

*抗體介導(dǎo)的免疫（體液免疫）作用：中和毒素和病毒、調(diào)理吞噬、激活補(bǔ)體裂解病原體、介導(dǎo)抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC，如NK細(xì)胞殺傷被抗體標(biāo)記的靶細(xì)胞）。

（三）免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

1.免疫耐受：

(1)中央耐受：T細(xì)胞在胸腺發(fā)育過(guò)程中經(jīng)歷陰性選擇，去除能高親和力識(shí)別自身MHC分子和自身抗原的細(xì)胞。這是防止自身免疫病發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制。

*陰性選擇過(guò)程：胸腺細(xì)胞表達(dá)自身MHC分子，若其TCR能與自身MHC-自身多肽復(fù)合物呈高親和力結(jié)合，則會(huì)受到胸腺上皮細(xì)胞的“死亡信號(hào)”（如Fas-FasL），誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（凋亡小體被巨噬細(xì)胞吞噬清除）。

(2)外周耐受：在胸腺外場(chǎng)所，通過(guò)多種機(jī)制防止免疫應(yīng)答攻擊自身組織。

*高親和力克隆清除：低親和力的自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆可能存活，但若再次遇到相同抗原并增殖至高親和力狀態(tài)，可能被清除。

*陰性調(diào)節(jié)：表達(dá)抑制性受體（如PD-1、CTLA-4）的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）或效應(yīng)T細(xì)胞，通過(guò)與效應(yīng)T細(xì)胞相互作用或分泌抑制性細(xì)胞因子（如IL-10、TGF-β），抑制其功能。

*腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）中的調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群（如Treg、抑制性NK細(xì)胞）在維持腫瘤耐受中發(fā)揮作用。

*胸腺輸出過(guò)程中發(fā)生的“陰性選擇”是主要的耐受機(jī)制，清除大部分具有高親和力自身反應(yīng)性的T細(xì)胞。

2.免疫抑制：

(1)腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等抑制免疫應(yīng)答。

*TNF-α：由巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，但過(guò)高的TNF-α水平可能導(dǎo)致組織損傷和免疫抑制（如與IL-10協(xié)同作用）。

*IL-10：主要由Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，是強(qiáng)效的免疫抑制因子，能抑制巨噬細(xì)胞的促炎反應(yīng)、B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生、T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子分泌。

(2)肝素酶等酶類(lèi)降解免疫激活分子，如TNF-α。肝素酶可以滅活TNF-α，減少其生物學(xué)活性，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。此外，一些小分子化合物也可通過(guò)抑制特定酶的活性來(lái)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

**二、免疫原理應(yīng)用**

（一）疾病診斷

1.免疫熒光檢測(cè)：利用抗體標(biāo)記抗原，通過(guò)熒光顯微鏡觀察免疫細(xì)胞或組織中的目標(biāo)分子。

*操作步驟：

(1)制備樣本：制備細(xì)胞涂片、組織切片或組織培養(yǎng)上清。

(2)固定：用甲醇、乙醇或福爾馬林等固定樣本，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

(3)封閉：用血清（如羊血清、人血清）或非免疫性抗體封閉樣本，防止非特異性結(jié)合。

(4)一抗孵育：加入特異性抗體（一抗），與目標(biāo)分子結(jié)合，孵育一定時(shí)間。

(5)洗滌：用磷酸鹽緩沖液（PBS）或TBS洗滌樣本，去除未結(jié)合的一抗。

(6)二抗孵育：加入熒光標(biāo)記的二抗（能與一抗特異性結(jié)合），孵育一定時(shí)間。

(7)洗滌：再次洗滌樣本，去除未結(jié)合的二抗。

(8)成像：使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察熒光信號(hào)，記錄圖像。

*應(yīng)用：檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記（如CD3、CD8）、細(xì)胞因子表達(dá)、病毒感染（如EB病毒）等。

2.流式細(xì)胞術(shù)：通過(guò)抗體識(shí)別不同免疫細(xì)胞亞群，定量分析細(xì)胞表型和數(shù)量。

*操作步驟：

(1)樣本制備：收集外周血、組織單細(xì)胞懸液等樣本。

(2)染色：加入多種不同熒光標(biāo)記的抗體，分別識(shí)別不同的細(xì)胞表面分子或細(xì)胞內(nèi)分子（需使用通透劑處理以染色細(xì)胞內(nèi)分子）。

(3)阻斷：用同型抗體封閉Fc受體，防止非特異性結(jié)合。

(4)洗滌：洗滌樣本，去除未結(jié)合的抗體。

(5)上機(jī)檢測(cè)：將樣本加入流式細(xì)胞儀，通過(guò)激光激發(fā)熒光，探測(cè)器收集熒光信號(hào)和散射光信號(hào)。

(6)數(shù)據(jù)分析：使用流式軟件對(duì)收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行門(mén)控分析，區(qū)分不同細(xì)胞群體，定量分析各群體的細(xì)胞數(shù)量、比例和表型特征。

*應(yīng)用：分析免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）的亞群分布、活化狀態(tài)（如表達(dá)CD25、CD69）、細(xì)胞因子表達(dá)等。

3.ELISA檢測(cè)：通過(guò)酶標(biāo)抗體檢測(cè)樣本中的抗體或細(xì)胞因子水平。

*操作步驟（以雙抗體夾心法檢測(cè)抗體為例）：

(1)包被：將捕獲抗體固定在酶標(biāo)板孔底。

(2)封閉：用封閉液（如BSA、脫脂奶粉）封閉板孔，防止非特異性結(jié)合。

(3)加樣：加入待測(cè)樣本，若樣本中存在目標(biāo)抗體，則與包被抗體結(jié)合。

(4)洗滌：洗滌板孔，去除未結(jié)合的樣本成分。

(5)加入檢測(cè)抗體：加入酶標(biāo)二抗（能與樣本中結(jié)合的抗體結(jié)合），孵育。

(6)洗滌：再次洗滌板孔。

(7)底物顯色：加入酶的底物（如TMB、OPD），若存在酶標(biāo)二抗，則底物被酶催化產(chǎn)生顯色產(chǎn)物。

(8)終止反應(yīng)：加入終止液（如H2SO4），停止酶促反應(yīng)。

(9)定量：使用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光度值（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中目標(biāo)抗體的濃度。

*應(yīng)用：檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的抗體（如IgG、IgM、IgA）或細(xì)胞因子（如IL-2、IL-4、TNF-α）水平。

（二）疫苗開(kāi)發(fā)

1.死亡疫苗：完整病原體滅活，誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，但安全性較低。

*疫苗制備方法：使用物理方法（如高壓、干燥）或化學(xué)方法（如甲醛、紫外線）滅活完整的細(xì)菌或病毒。

*優(yōu)點(diǎn)：通常能誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。

*缺點(diǎn)：可能存在殘留的免疫原性物質(zhì)引發(fā)副反應(yīng)；安全性相對(duì)較低，可能引起發(fā)熱、局部紅腫等；難以誘導(dǎo)持久的免疫記憶。

*應(yīng)用實(shí)例：狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)滅活）、乙型腦炎疫苗（地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)滅活）。

2.減毒活疫苗：弱化病原體，保留免疫原性，適用于多次接種。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程或傳統(tǒng)方法改造病原體，使其毒力減弱但保留其感染和復(fù)制能力。

*優(yōu)點(diǎn)：通常能誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，免疫效果接近自然感染；易于生產(chǎn)和保存（常為凍干粉）；可制成鼻噴劑等黏膜給藥形式。

*缺點(diǎn)：仍可能存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)；可能在某些免疫缺陷人群中引起嚴(yán)重感染；不能用于孕婦和免疫功能低下者。

*應(yīng)用實(shí)例：麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎三聯(lián)疫苗（麻腮風(fēng)疫苗）、口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗（OPV）、水痘減毒活疫苗。

3.亞單位疫苗：僅使用病原體抗原成分，如重組蛋白或多糖，安全性更高。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程表達(dá)病原體的特定抗原成分（如蛋白或多糖），純化后制成疫苗。

*優(yōu)點(diǎn)：安全性高，無(wú)感染風(fēng)險(xiǎn)；成分明確，易于純化和質(zhì)量控制；易于制備和運(yùn)輸（多為凍干粉或液體制劑）。

*缺點(diǎn)：通常誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答較弱，可能需要佐劑或多次接種；可能難以誘導(dǎo)足夠的細(xì)胞免疫。

*應(yīng)用實(shí)例：重組乙肝疫苗（乙肝表面抗原）、破傷風(fēng)疫苗（純化毒素）、白喉疫苗（白喉類(lèi)毒素）。

（三）免疫治療

1.過(guò)繼性細(xì)胞療法（ACT）：提取患者免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞）體外改造后回輸，用于腫瘤或感染治療。

*操作步驟（以CAR-T細(xì)胞為例）：

(1)細(xì)胞采集：從患者外周血中采集T細(xì)胞。

(2)基因改造：將編碼嵌合抗原受體（CAR）的基因（通過(guò)病毒載體或非病毒載體）導(dǎo)入T細(xì)胞中，構(gòu)建CAR-T細(xì)胞。

(3)細(xì)胞擴(kuò)增：在體外培養(yǎng)體系中大量擴(kuò)增改造后的CAR-T細(xì)胞。

(4)細(xì)胞回輸：將擴(kuò)增后的CAR-T細(xì)胞輸回患者體內(nèi)。

(5)監(jiān)測(cè)與支持治療：密切監(jiān)測(cè)患者反應(yīng)，必要時(shí)進(jìn)行細(xì)胞因子支持治療（如IL-2）。

*應(yīng)用：治療血液腫瘤（如B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血?。?。

2.免疫檢查點(diǎn)抑制劑：阻斷PD-1/PD-L1或CTLA-4信號(hào)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答。

*作用機(jī)制：腫瘤細(xì)胞常高表達(dá)PD-L1，與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活性。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑）能阻斷這一相互作用，解除對(duì)T細(xì)胞的抑制，從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫。

*應(yīng)用：治療黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、腎癌等多種實(shí)體瘤。

3.單克隆抗體療法：使用工程化抗體靶向阻斷炎癥或腫瘤相關(guān)通路。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程技術(shù)（如雜交瘤技術(shù)、單克隆抗體噬菌體展示技術(shù)）生產(chǎn)針對(duì)特定靶點(diǎn)的單克隆抗體。

*應(yīng)用實(shí)例：

*阻斷細(xì)胞因子：如TNF-α抑制劑（依那西普、英夫利西單抗）用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病。

*阻斷細(xì)胞表面分子：如CD20單抗（利妥昔單抗）用于治療B細(xì)胞淋巴瘤。

*阻斷生長(zhǎng)因子受體：如針對(duì)HER2的單抗（曲妥珠單抗）用于治療乳腺癌。

**三、免疫原理研究方法**

（一）體外實(shí)驗(yàn)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離免疫細(xì)胞，通過(guò)添加刺激物或抑制劑研究其功能。

*操作要點(diǎn)：

(1)細(xì)胞分離：從組織或體液中分離目標(biāo)免疫細(xì)胞（如使用Ficoll密度梯度離心分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，再通過(guò)貼壁法或磁珠分選法獲取特定細(xì)胞）。

(2)培養(yǎng)基選擇：使用適合免疫細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（如RPMI-1640或DMEM，含10%FBS、雙抗）。

(3)細(xì)胞鋪板：將細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，控制細(xì)胞密度。

(4)刺激物添加：根據(jù)研究目的，添加特定刺激物（如LPS、PolyI:C刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子；抗CD3/CD28抗體刺激T細(xì)胞增殖）。

(5)信號(hào)通路抑制劑添加：添加特異性抑制劑（如PI3K抑制劑、JAK抑制劑、NF-κB抑制劑）研究信號(hào)通路作用。

(6)培養(yǎng)與檢測(cè)：在適宜條件下培養(yǎng)，通過(guò)MTT法、CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖；使用ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子分泌；通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子表達(dá)或細(xì)胞凋亡；通過(guò)WesternBlot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。

2.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）：定量檢測(cè)細(xì)胞因子、抗體等分子。

*主要類(lèi)型：

*雙抗體夾心法：檢測(cè)樣品中存在的抗原。

*間接法：檢測(cè)樣品中存在的抗體。

*競(jìng)爭(zhēng)法：檢測(cè)樣品中存在的抗原或抗體。

*優(yōu)缺點(diǎn)：操作相對(duì)簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度較高，是目前實(shí)驗(yàn)室常用的定量檢測(cè)方法。

3.流式細(xì)胞術(shù)：分析細(xì)胞表面標(biāo)記和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子。

*優(yōu)缺點(diǎn)：可同時(shí)檢測(cè)多種參數(shù)（如細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白），快速分析大量細(xì)胞，是研究免疫細(xì)胞功能的重要工具。

*注意事項(xiàng)：需優(yōu)化抗體濃度和孵育時(shí)間；需設(shè)置好同型對(duì)照以排除非特異性結(jié)合。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

1.基因敲除/敲入模型：構(gòu)建特定基因缺失或過(guò)表達(dá)的動(dòng)物，研究免疫機(jī)制。

*常用模型：

*基因敲除（KO）小鼠：通過(guò)胚胎干細(xì)胞技術(shù)或CRISPR/Cas9技術(shù)刪除特定基因，研究該基因在免疫系統(tǒng)中的作用。

*條件性基因敲除小鼠：在特定組織或細(xì)胞類(lèi)型中，在特定時(shí)間點(diǎn)開(kāi)啟或關(guān)閉基因敲除，更精確地研究基因功能。

*基因敲入（KI）小鼠：將外源基因插入到基因組中，研究外源基因的功能或模擬人類(lèi)基因突變。

*應(yīng)用：研究特定基因在免疫應(yīng)答、免疫耐受、自身免疫病、腫瘤免疫中的作用。

2.熒光成像技術(shù)：實(shí)時(shí)觀察活體動(dòng)物中的免疫細(xì)胞遷移和分布。

*主要技術(shù)：

*活體熒光顯微鏡成像：使用綠色熒光蛋白（GFP）、黃綠色熒光蛋白（YFP）、紅色熒光蛋白（RFP）等熒光標(biāo)記蛋白標(biāo)記免疫細(xì)胞，觀察其在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)遷移過(guò)程。

*PET-CT/SPECT：使用放射性同位素標(biāo)記的抗體或細(xì)胞，通過(guò)核醫(yī)學(xué)成像技術(shù)檢測(cè)特定分子或細(xì)胞在體內(nèi)的分布和動(dòng)態(tài)變化。

*應(yīng)用：研究免疫細(xì)胞在感染、炎癥、腫瘤微環(huán)境中的遷移、浸潤(rùn)和功能。

3.免疫組織化學(xué)：通過(guò)抗體染色觀察組織切片中的免疫細(xì)胞和分子。

*操作要點(diǎn)：

(1)組織固定與包埋：新鮮組織立即固定（如福爾馬林），然后脫水、透明、包埋（如石蠟、冰凍）。

(2)切片：將組織塊切成5-10微米厚的切片。

(3)脫蠟/復(fù)水：石蠟切片需脫蠟至水。

(4)抗原修復(fù)：使用熱修復(fù)或酶修復(fù)方法使抗原暴露。

(5)封閉：用血清或非免疫性抗體封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

(6)一抗孵育：加入特異性抗體，孵育。

(7)二抗孵育：加入生物素化二抗或熒光標(biāo)記二抗，孵育。

(8)顯色/熒光：使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗結(jié)合酶底物顯色（如DAB），或直接使用熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行成像。

(9)復(fù)蓋與觀察：用復(fù)蓋玻片封片，使用光鏡或熒光顯微鏡觀察結(jié)果。

*應(yīng)用：檢測(cè)組織切片中免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞）的浸潤(rùn)情況，以及細(xì)胞因子、黏附分子等分子的表達(dá)分布。

（三）計(jì)算免疫學(xué)

1.網(wǎng)絡(luò)動(dòng)力學(xué)模型：模擬免疫細(xì)胞間的相互作用和信號(hào)傳遞。

*模型類(lèi)型：

*邏輯斯蒂模型：描述細(xì)胞增殖與抑制因子作用的平衡。

*速率方程模型：使用微分方程描述細(xì)胞數(shù)量、分子濃度隨時(shí)間的變化。

*網(wǎng)絡(luò)模型：構(gòu)建免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子、信號(hào)通路之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，模擬整體免疫系統(tǒng)的行為。

*應(yīng)用：預(yù)測(cè)免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)變化，研究免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，評(píng)估疫苗或藥物的效果。

2.機(jī)器學(xué)習(xí)算法：分析大規(guī)模免疫組學(xué)數(shù)據(jù)，預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展或治療反應(yīng)。

*常用算法：

*支持向量機(jī)（SVM）：用于分類(lèi)和回歸分析，可識(shí)別免疫細(xì)胞亞群或預(yù)測(cè)疾病風(fēng)險(xiǎn)。

*隨機(jī)森林：集成學(xué)習(xí)方法，用于特征選擇和分類(lèi)預(yù)測(cè)。

*深度學(xué)習(xí)：如卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（CNN）用于圖像分析（如流式細(xì)胞圖、免疫組圖片），循環(huán)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（RNN）用于時(shí)間序列數(shù)據(jù)分析（如免疫應(yīng)答動(dòng)態(tài)）。

*應(yīng)用：分析流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)、蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)，識(shí)別潛在的生物標(biāo)志物，預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)免疫治療的反應(yīng)。

3.虛擬篩選：通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬篩選免疫藥物靶點(diǎn)。

*方法：利用計(jì)算機(jī)程序模擬藥物分子與靶點(diǎn)（如蛋白質(zhì)受體、酶）的結(jié)合過(guò)程，篩選出具有高結(jié)合親和力的潛在靶點(diǎn)。

*應(yīng)用：加速新藥研發(fā)，尋找治療自身免疫病、感染性疾病、腫瘤的藥物靶點(diǎn)。

一、免疫學(xué)免疫原理概述

免疫學(xué)是研究生物體免疫系統(tǒng)功能、結(jié)構(gòu)和調(diào)控機(jī)制的學(xué)科。其核心原理涉及免疫細(xì)胞的相互作用、免疫分子的介導(dǎo)以及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。理解免疫原理對(duì)于疾病診斷、治療和疫苗開(kāi)發(fā)具有重要意義。

（一）免疫系統(tǒng)組成

1.免疫器官：

(1)中樞免疫器官：骨髓、胸腺，負(fù)責(zé)免疫細(xì)胞的生成和成熟。

(2)外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟、黏膜相關(guān)淋巴組織，參與免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)。

2.免疫細(xì)胞：

(1)淋巴細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞，分別參與細(xì)胞免疫、體液免疫和天然免疫。

(2)非淋巴細(xì)胞：巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、粒細(xì)胞等，參與抗原呈遞和炎癥反應(yīng)。

3.免疫分子：

(1)抗體：由B細(xì)胞分化而來(lái)，能與特定抗原結(jié)合。

(2)細(xì)胞因子：如白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能。

(3)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）：參與T細(xì)胞識(shí)別抗原。

（二）免疫應(yīng)答過(guò)程

1.抗原識(shí)別：

(1)抗原呈遞：抗原提呈細(xì)胞（APC）如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞通過(guò)MHC分子呈遞抗原。

(2)T細(xì)胞受體（TCR）識(shí)別：CD4+T細(xì)胞識(shí)別MHC-II類(lèi)分子，CD8+T細(xì)胞識(shí)別MHC-I類(lèi)分子。

2.免疫細(xì)胞活化：

(1)T細(xì)胞活化：需同時(shí)接受APC提呈的抗原和共刺激信號(hào)（如CD28-CD80/CD86）。

(2)B細(xì)胞活化：需B細(xì)胞受體（BCR）識(shí)別抗原，并接受T細(xì)胞輔助（如CD40-CD40L）。

3.免疫效應(yīng)：

(1)T細(xì)胞效應(yīng)：CD8+T細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

(2)B細(xì)胞效應(yīng)：分化為漿細(xì)胞，分泌抗體中和抗原。

（三）免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

1.免疫耐受：

(1)中央耐受：T細(xì)胞在胸腺發(fā)育過(guò)程中經(jīng)歷陰性選擇，避免攻擊自身抗原。

(2)外周耐受：通過(guò)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）或抑制性信號(hào)（如PD-L1/PD-1）避免過(guò)度應(yīng)答。

2.免疫抑制：

(1)腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等抑制免疫應(yīng)答。

(2)肝素酶等酶類(lèi)降解免疫激活分子，如TNF-α。

二、免疫原理應(yīng)用

（一）疾病診斷

1.免疫熒光檢測(cè)：利用抗體標(biāo)記抗原，通過(guò)熒光顯微鏡觀察免疫細(xì)胞或組織中的目標(biāo)分子。

2.流式細(xì)胞術(shù)：通過(guò)抗體識(shí)別不同免疫細(xì)胞亞群，定量分析細(xì)胞表型和數(shù)量。

3.ELISA檢測(cè)：通過(guò)酶標(biāo)抗體檢測(cè)樣本中的抗體或細(xì)胞因子水平。

（二）疫苗開(kāi)發(fā)

1.死亡疫苗：完整病原體滅活，誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，但安全性較低。

2.減毒活疫苗：弱化病原體，保留免疫原性，適用于多次接種。

3.亞單位疫苗：僅使用病原體抗原成分，如重組蛋白或多糖，安全性更高。

（三）免疫治療

1.過(guò)繼性細(xì)胞療法：提取患者免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞）體外改造后回輸，用于腫瘤或感染治療。

2.免疫檢查點(diǎn)抑制劑：阻斷PD-1/PD-L1或CTLA-4信號(hào)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答。

3.單克隆抗體療法：使用工程化抗體靶向阻斷炎癥或腫瘤相關(guān)通路。

三、免疫原理研究方法

（一）體外實(shí)驗(yàn)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離免疫細(xì)胞，通過(guò)添加刺激物或抑制劑研究其功能。

2.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）：定量檢測(cè)細(xì)胞因子、抗體等分子。

3.流式細(xì)胞術(shù)：分析細(xì)胞表面標(biāo)記和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子。

（二）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

1.基因敲除/敲入模型：構(gòu)建特定基因缺失或過(guò)表達(dá)的動(dòng)物，研究免疫機(jī)制。

2.熒光成像技術(shù)：實(shí)時(shí)觀察活體動(dòng)物中的免疫細(xì)胞遷移和分布。

3.免疫組織化學(xué)：通過(guò)抗體染色觀察組織切片中的免疫細(xì)胞和分子。

（三）計(jì)算免疫學(xué)

1.網(wǎng)絡(luò)動(dòng)力學(xué)模型：模擬免疫細(xì)胞間的相互作用和信號(hào)傳遞。

2.機(jī)器學(xué)習(xí)算法：分析大規(guī)模免疫組學(xué)數(shù)據(jù)，預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展或治療反應(yīng)。

3.虛擬篩選：通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬篩選免疫藥物靶點(diǎn)。

**一、免疫學(xué)免疫原理概述**

免疫學(xué)是研究生物體免疫系統(tǒng)功能、結(jié)構(gòu)和調(diào)控機(jī)制的學(xué)科。其核心原理涉及免疫細(xì)胞的相互作用、免疫分子的介導(dǎo)以及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。理解免疫原理對(duì)于疾病診斷、治療和疫苗開(kāi)發(fā)具有重要意義。

（一）免疫系統(tǒng)組成

1.免疫器官：

(1)中樞免疫器官：骨髓、胸腺，負(fù)責(zé)免疫細(xì)胞的生成和成熟。

*骨髓：是所有造血干細(xì)胞的來(lái)源，也是B細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場(chǎng)所。在骨髓中，造血干細(xì)胞經(jīng)歷分化、選擇和增殖過(guò)程，最終形成成熟的B細(xì)胞、部分粒系細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。骨髓內(nèi)的微環(huán)境（如基質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞因子）對(duì)免疫細(xì)胞的發(fā)育至關(guān)重要。

*胸腺：是T細(xì)胞發(fā)育成熟的專(zhuān)屬場(chǎng)所。未成熟的T細(xì)胞（胸腺細(xì)胞）從骨髓遷移至胸腺，經(jīng)歷陽(yáng)性選擇（確保其能識(shí)別MHC分子）和陰性選擇（去除能攻擊自身抗原的細(xì)胞），最終形成成熟的CD4+T輔助細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞。

(2)外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟、黏膜相關(guān)淋巴組織，參與免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)。

*淋巴結(jié)：位于淋巴循環(huán)的節(jié)點(diǎn)處，是T細(xì)胞和B細(xì)胞相遇、發(fā)生免疫應(yīng)答的主要場(chǎng)所。淋巴結(jié)內(nèi)包含皮質(zhì)（B細(xì)胞區(qū)、T細(xì)胞區(qū)）和髓質(zhì)（濾泡、髓索、紅髓）。當(dāng)抗原通過(guò)淋巴液到達(dá)淋巴結(jié)時(shí)，會(huì)激活局部免疫細(xì)胞，引發(fā)淋巴結(jié)腫大。

*脾臟：是最大的外周免疫器官，主要濾過(guò)血液。脾臟包含紅髓（吞噬血液中的病原體和細(xì)胞碎片）和白髓（類(lèi)似淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)，包含T細(xì)胞區(qū)和B細(xì)胞區(qū)）。脾臟在清除血液中的病原體、產(chǎn)生抗體以及啟動(dòng)血源性免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

*黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）：包括派爾集合淋巴結(jié)（Peyer'spatches，小腸）、闌尾、扁桃體等，位于與外界接觸的黏膜表面。MALT是黏膜免疫的主要場(chǎng)所，能產(chǎn)生分泌型抗體（IgA），防止病原體在黏膜定植。

2.免疫細(xì)胞：

(1)淋巴細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞，分別參與細(xì)胞免疫、體液免疫和天然免疫。

*T細(xì)胞：起源于骨髓，但在胸腺成熟。主要功能是識(shí)別抗原并直接殺傷靶細(xì)胞（CD8+T細(xì)胞）或輔助B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞）。T細(xì)胞表面標(biāo)志物包括CD3、CD4、CD8等。

*B細(xì)胞：起源于骨髓，在骨髓或?yàn)V泡中成熟。主要功能是識(shí)別抗原并分化為漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）或記憶B細(xì)胞。B細(xì)胞表面標(biāo)志物包括CD19、CD20、BCR（B細(xì)胞受體）。

*NK細(xì)胞：起源于骨髓，屬于天然免疫細(xì)胞。主要功能是無(wú)需預(yù)先致敏即可殺傷病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，并通過(guò)分泌細(xì)胞因子（如IFN-γ）調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

(2)非淋巴細(xì)胞：巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、粒細(xì)胞等，參與抗原呈遞和炎癥反應(yīng)。

*巨噬細(xì)胞：來(lái)源于骨髓的單核細(xì)胞，在組織內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞。功能包括吞噬清除病原體和壞死細(xì)胞、呈遞抗原給T細(xì)胞、分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)炎癥和免疫應(yīng)答。

*樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）：是體內(nèi)最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞。存在于外周組織（如皮膚、黏膜），能捕獲抗原并遷移至淋巴結(jié)，將抗原信息呈遞給T細(xì)胞，啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

*粒細(xì)胞：包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞。主要參與炎癥反應(yīng)和抗感染，其中中性粒細(xì)胞是最主要的吞噬細(xì)胞。

3.免疫分子：

(1)抗體：由B細(xì)胞分化而來(lái)的漿細(xì)胞產(chǎn)生，能與特定抗原結(jié)合。抗體結(jié)構(gòu)包括重鏈和輕鏈，通過(guò)變構(gòu)區(qū)識(shí)別抗原表位。主要功能包括中和毒素、調(diào)理吞噬、激活補(bǔ)體、結(jié)合Fc受體（介導(dǎo)ADCC）。

*主要類(lèi)別：IgM、IgG、IgA、IgE、IgD，不同類(lèi)別抗體具有不同的分布和功能。

*作用機(jī)制：抗體通過(guò)與病原體或毒素結(jié)合，阻止其與宿主細(xì)胞相互作用；通過(guò)調(diào)理作用增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對(duì)其的吞噬；通過(guò)激活補(bǔ)體系統(tǒng)裂解病原體；通過(guò)ADCC效應(yīng)細(xì)胞（如NK細(xì)胞）殺傷靶細(xì)胞。

(2)細(xì)胞因子：如白細(xì)胞介素（IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、干擾素（IFN）、集落刺激因子（CSF）等，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能。細(xì)胞因子通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面的特定受體，介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊，影響細(xì)胞的增殖、分化、存活和功能。

*作用舉例：IL-2主要由T細(xì)胞分泌，促進(jìn)T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖和分化；IFN-γ主要由T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用；TNF-α主要由巨噬細(xì)胞分泌，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。

(3)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）：參與T細(xì)胞識(shí)別抗原。MHC分子分為I類(lèi)和II類(lèi)。

*MHC-I類(lèi)：表達(dá)于所有有核細(xì)胞表面，呈遞內(nèi)源性抗原（如病毒蛋白、腫瘤抗原）給CD8+T細(xì)胞。

*MHC-II類(lèi)：表達(dá)于APC（巨噬細(xì)胞、DC、B細(xì)胞）表面，呈遞外源性抗原（如細(xì)菌蛋白）給CD4+T細(xì)胞。

*生物學(xué)意義：MHC分子是免疫識(shí)別的“橋梁”，確保T細(xì)胞能特異性識(shí)別“自身”MHC分子提呈的“非己”抗原。

（二）免疫應(yīng)答過(guò)程

1.抗原識(shí)別：

(1)抗原呈遞：抗原提呈細(xì)胞（APC）如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞通過(guò)MHC分子呈遞抗原。外源性抗原（如經(jīng)吞噬、吞飲或受體介導(dǎo)攝取的抗原）在溶酶體中降解后，與MHC-II類(lèi)分子結(jié)合；內(nèi)源性抗原（如病毒或腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)）在蛋白酶體中降解后，與MHC-I類(lèi)分子結(jié)合。

(2)T細(xì)胞受體（TCR）識(shí)別：T細(xì)胞受體（TCR）是T細(xì)胞識(shí)別抗原的主要結(jié)構(gòu)。CD4+T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別由MHC-II類(lèi)分子提呈的抗原肽；CD8+T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別由MHC-I類(lèi)分子提呈的抗原肽。TCR識(shí)別的特異性是免疫應(yīng)答高度特異性的基礎(chǔ)。

2.免疫細(xì)胞活化：

(1)T細(xì)胞活化：需同時(shí)接受APC提呈的抗原（第一信號(hào)）和共刺激信號(hào)（第二信號(hào)）。

*第一信號(hào)：TCR與MHC-抗原肽復(fù)合物的結(jié)合。

*第二信號(hào)：APC表面的共刺激分子（如B7家族的CD80、CD86）與T細(xì)胞表面的共刺激分子（如CD28）的結(jié)合。僅接受第一信號(hào)的T細(xì)胞會(huì)進(jìn)入無(wú)反應(yīng)或凋亡狀態(tài)（“耗竭”）。

*腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（TRAF）家族成員（如TRAF6）在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用，激活NF-κB和AP-1等轉(zhuǎn)錄因子，驅(qū)動(dòng)T細(xì)胞的增殖和分化。

(2)B細(xì)胞活化：需B細(xì)胞受體（BCR）識(shí)別抗原，并接受T細(xì)胞輔助（對(duì)于TD抗原）。

*BCR識(shí)別：B細(xì)胞通過(guò)BCR（膜結(jié)合型抗體）直接識(shí)別和結(jié)合抗原。這一過(guò)程需要抗原具有合適的構(gòu)象和表位。

*T細(xì)胞輔助：對(duì)于TD抗原（如蛋白質(zhì)抗原），B細(xì)胞的完全活化還需要來(lái)自CD4+T細(xì)胞的輔助。輔助T細(xì)胞通過(guò)其TCR識(shí)別APC提呈的同一抗原肽，并分泌細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-6），或通過(guò)細(xì)胞接觸直接傳遞信號(hào)（如CD40-CD40L相互作用）。

3.免疫效應(yīng)：

(1)T細(xì)胞效應(yīng)：

*CD8+T細(xì)胞（效應(yīng)T細(xì)胞）：在活化后分化為效應(yīng)T細(xì)胞，表達(dá)細(xì)胞毒性分子（如顆粒酶、穿孔素）或分泌細(xì)胞因子（如IFN-γ、TNF-α）。其功能是直接殺傷被病毒感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞（特異性細(xì)胞毒性）。

*CD4+T細(xì)胞（輔助T細(xì)胞）：根據(jù)功能進(jìn)一步分化為T(mén)h1、Th2、Th17、Treg等亞群。

*Th1細(xì)胞：分泌IL-2、IFN-γ，輔助細(xì)胞免疫，參與抗感染（尤其是胞內(nèi)寄生菌）。

*Th2細(xì)胞：分泌IL-4、IL-5、IL-13，輔助體液免疫和過(guò)敏反應(yīng)，參與抗寄生蟲(chóng)感染。

*Th17細(xì)胞：分泌IL-17、IL-22，參與炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)，但在某些自身免疫性疾病中起致病作用。

*Treg細(xì)胞（調(diào)節(jié)性T細(xì)胞）：分泌IL-10、TGF-β，抑制其他免疫細(xì)胞的活性，維持免疫耐受。

(2)B細(xì)胞效應(yīng)：

*B細(xì)胞活化后，在T細(xì)胞輔助下分化為漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞。

*漿細(xì)胞：是終末分化細(xì)胞，主要功能是大量合成和分泌抗體。漿細(xì)胞通常位于淋巴結(jié)和脾臟的髓質(zhì)區(qū)域，壽命較短（幾天到幾周）。

*記憶B細(xì)胞：壽命長(zhǎng)，能在再次接觸相同抗原時(shí)快速活化并分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生高效價(jià)抗體，提供長(zhǎng)期免疫保護(hù)。

*抗體介導(dǎo)的免疫（體液免疫）作用：中和毒素和病毒、調(diào)理吞噬、激活補(bǔ)體裂解病原體、介導(dǎo)抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC，如NK細(xì)胞殺傷被抗體標(biāo)記的靶細(xì)胞）。

（三）免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

1.免疫耐受：

(1)中央耐受：T細(xì)胞在胸腺發(fā)育過(guò)程中經(jīng)歷陰性選擇，去除能高親和力識(shí)別自身MHC分子和自身抗原的細(xì)胞。這是防止自身免疫病發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制。

*陰性選擇過(guò)程：胸腺細(xì)胞表達(dá)自身MHC分子，若其TCR能與自身MHC-自身多肽復(fù)合物呈高親和力結(jié)合，則會(huì)受到胸腺上皮細(xì)胞的“死亡信號(hào)”（如Fas-FasL），誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（凋亡小體被巨噬細(xì)胞吞噬清除）。

(2)外周耐受：在胸腺外場(chǎng)所，通過(guò)多種機(jī)制防止免疫應(yīng)答攻擊自身組織。

*高親和力克隆清除：低親和力的自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆可能存活，但若再次遇到相同抗原并增殖至高親和力狀態(tài)，可能被清除。

*陰性調(diào)節(jié)：表達(dá)抑制性受體（如PD-1、CTLA-4）的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）或效應(yīng)T細(xì)胞，通過(guò)與效應(yīng)T細(xì)胞相互作用或分泌抑制性細(xì)胞因子（如IL-10、TGF-β），抑制其功能。

*腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）中的調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群（如Treg、抑制性NK細(xì)胞）在維持腫瘤耐受中發(fā)揮作用。

*胸腺輸出過(guò)程中發(fā)生的“陰性選擇”是主要的耐受機(jī)制，清除大部分具有高親和力自身反應(yīng)性的T細(xì)胞。

2.免疫抑制：

(1)腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等抑制免疫應(yīng)答。

*TNF-α：由巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，但過(guò)高的TNF-α水平可能導(dǎo)致組織損傷和免疫抑制（如與IL-10協(xié)同作用）。

*IL-10：主要由Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，是強(qiáng)效的免疫抑制因子，能抑制巨噬細(xì)胞的促炎反應(yīng)、B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生、T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子分泌。

(2)肝素酶等酶類(lèi)降解免疫激活分子，如TNF-α。肝素酶可以滅活TNF-α，減少其生物學(xué)活性，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。此外，一些小分子化合物也可通過(guò)抑制特定酶的活性來(lái)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。

**二、免疫原理應(yīng)用**

（一）疾病診斷

1.免疫熒光檢測(cè)：利用抗體標(biāo)記抗原，通過(guò)熒光顯微鏡觀察免疫細(xì)胞或組織中的目標(biāo)分子。

*操作步驟：

(1)制備樣本：制備細(xì)胞涂片、組織切片或組織培養(yǎng)上清。

(2)固定：用甲醇、乙醇或福爾馬林等固定樣本，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

(3)封閉：用血清（如羊血清、人血清）或非免疫性抗體封閉樣本，防止非特異性結(jié)合。

(4)一抗孵育：加入特異性抗體（一抗），與目標(biāo)分子結(jié)合，孵育一定時(shí)間。

(5)洗滌：用磷酸鹽緩沖液（PBS）或TBS洗滌樣本，去除未結(jié)合的一抗。

(6)二抗孵育：加入熒光標(biāo)記的二抗（能與一抗特異性結(jié)合），孵育一定時(shí)間。

(7)洗滌：再次洗滌樣本，去除未結(jié)合的二抗。

(8)成像：使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察熒光信號(hào)，記錄圖像。

*應(yīng)用：檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記（如CD3、CD8）、細(xì)胞因子表達(dá)、病毒感染（如EB病毒）等。

2.流式細(xì)胞術(shù)：通過(guò)抗體識(shí)別不同免疫細(xì)胞亞群，定量分析細(xì)胞表型和數(shù)量。

*操作步驟：

(1)樣本制備：收集外周血、組織單細(xì)胞懸液等樣本。

(2)染色：加入多種不同熒光標(biāo)記的抗體，分別識(shí)別不同的細(xì)胞表面分子或細(xì)胞內(nèi)分子（需使用通透劑處理以染色細(xì)胞內(nèi)分子）。

(3)阻斷：用同型抗體封閉Fc受體，防止非特異性結(jié)合。

(4)洗滌：洗滌樣本，去除未結(jié)合的抗體。

(5)上機(jī)檢測(cè)：將樣本加入流式細(xì)胞儀，通過(guò)激光激發(fā)熒光，探測(cè)器收集熒光信號(hào)和散射光信號(hào)。

(6)數(shù)據(jù)分析：使用流式軟件對(duì)收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行門(mén)控分析，區(qū)分不同細(xì)胞群體，定量分析各群體的細(xì)胞數(shù)量、比例和表型特征。

*應(yīng)用：分析免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）的亞群分布、活化狀態(tài)（如表達(dá)CD25、CD69）、細(xì)胞因子表達(dá)等。

3.ELISA檢測(cè)：通過(guò)酶標(biāo)抗體檢測(cè)樣本中的抗體或細(xì)胞因子水平。

*操作步驟（以雙抗體夾心法檢測(cè)抗體為例）：

(1)包被：將捕獲抗體固定在酶標(biāo)板孔底。

(2)封閉：用封閉液（如BSA、脫脂奶粉）封閉板孔，防止非特異性結(jié)合。

(3)加樣：加入待測(cè)樣本，若樣本中存在目標(biāo)抗體，則與包被抗體結(jié)合。

(4)洗滌：洗滌板孔，去除未結(jié)合的樣本成分。

(5)加入檢測(cè)抗體：加入酶標(biāo)二抗（能與樣本中結(jié)合的抗體結(jié)合），孵育。

(6)洗滌：再次洗滌板孔。

(7)底物顯色：加入酶的底物（如TMB、OPD），若存在酶標(biāo)二抗，則底物被酶催化產(chǎn)生顯色產(chǎn)物。

(8)終止反應(yīng)：加入終止液（如H2SO4），停止酶促反應(yīng)。

(9)定量：使用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光度值（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中目標(biāo)抗體的濃度。

*應(yīng)用：檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的抗體（如IgG、IgM、IgA）或細(xì)胞因子（如IL-2、IL-4、TNF-α）水平。

（二）疫苗開(kāi)發(fā)

1.死亡疫苗：完整病原體滅活，誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，但安全性較低。

*疫苗制備方法：使用物理方法（如高壓、干燥）或化學(xué)方法（如甲醛、紫外線）滅活完整的細(xì)菌或病毒。

*優(yōu)點(diǎn)：通常能誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。

*缺點(diǎn)：可能存在殘留的免疫原性物質(zhì)引發(fā)副反應(yīng)；安全性相對(duì)較低，可能引起發(fā)熱、局部紅腫等；難以誘導(dǎo)持久的免疫記憶。

*應(yīng)用實(shí)例：狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)滅活）、乙型腦炎疫苗（地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)滅活）。

2.減毒活疫苗：弱化病原體，保留免疫原性，適用于多次接種。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程或傳統(tǒng)方法改造病原體，使其毒力減弱但保留其感染和復(fù)制能力。

*優(yōu)點(diǎn)：通常能誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，免疫效果接近自然感染；易于生產(chǎn)和保存（常為凍干粉）；可制成鼻噴劑等黏膜給藥形式。

*缺點(diǎn)：仍可能存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)；可能在某些免疫缺陷人群中引起嚴(yán)重感染；不能用于孕婦和免疫功能低下者。

*應(yīng)用實(shí)例：麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎三聯(lián)疫苗（麻腮風(fēng)疫苗）、口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗（OPV）、水痘減毒活疫苗。

3.亞單位疫苗：僅使用病原體抗原成分，如重組蛋白或多糖，安全性更高。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程表達(dá)病原體的特定抗原成分（如蛋白或多糖），純化后制成疫苗。

*優(yōu)點(diǎn)：安全性高，無(wú)感染風(fēng)險(xiǎn)；成分明確，易于純化和質(zhì)量控制；易于制備和運(yùn)輸（多為凍干粉或液體制劑）。

*缺點(diǎn)：通常誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答較弱，可能需要佐劑或多次接種；可能難以誘導(dǎo)足夠的細(xì)胞免疫。

*應(yīng)用實(shí)例：重組乙肝疫苗（乙肝表面抗原）、破傷風(fēng)疫苗（純化毒素）、白喉疫苗（白喉類(lèi)毒素）。

（三）免疫治療

1.過(guò)繼性細(xì)胞療法（ACT）：提取患者免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞）體外改造后回輸，用于腫瘤或感染治療。

*操作步驟（以CAR-T細(xì)胞為例）：

(1)細(xì)胞采集：從患者外周血中采集T細(xì)胞。

(2)基因改造：將編碼嵌合抗原受體（CAR）的基因（通過(guò)病毒載體或非病毒載體）導(dǎo)入T細(xì)胞中，構(gòu)建CAR-T細(xì)胞。

(3)細(xì)胞擴(kuò)增：在體外培養(yǎng)體系中大量擴(kuò)增改造后的CAR-T細(xì)胞。

(4)細(xì)胞回輸：將擴(kuò)增后的CAR-T細(xì)胞輸回患者體內(nèi)。

(5)監(jiān)測(cè)與支持治療：密切監(jiān)測(cè)患者反應(yīng)，必要時(shí)進(jìn)行細(xì)胞因子支持治療（如IL-2）。

*應(yīng)用：治療血液腫瘤（如B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病）。

2.免疫檢查點(diǎn)抑制劑：阻斷PD-1/PD-L1或CTLA-4信號(hào)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答。

*作用機(jī)制：腫瘤細(xì)胞常高表達(dá)PD-L1，與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活性。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑）能阻斷這一相互作用，解除對(duì)T細(xì)胞的抑制，從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫。

*應(yīng)用：治療黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、腎癌等多種實(shí)體瘤。

3.單克隆抗體療法：使用工程化抗體靶向阻斷炎癥或腫瘤相關(guān)通路。

*疫苗制備方法：通過(guò)基因工程技術(shù)（如雜交瘤技術(shù)、單克隆抗體噬菌體展示技術(shù)）生產(chǎn)針對(duì)特定靶點(diǎn)的單克隆抗體。

*應(yīng)用實(shí)例：

*阻斷細(xì)胞因子：如TNF-α抑制劑（依那西普、英夫利西單抗）用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病。

*阻斷細(xì)胞表面分子：如CD20單抗（利妥昔單抗）用于治療B細(xì)胞淋巴瘤。

*阻斷生長(zhǎng)因子受體：如針對(duì)HER2的單抗（曲妥珠單抗）用于治療乳腺癌。

**三、免疫原理研究方法**

（一）體外實(shí)驗(yàn)

1.細(xì)胞培養(yǎng)：分離免疫細(xì)胞，通過(guò)添加刺激物或抑制劑研究其功能。

*操作要點(diǎn)：

(1)細(xì)胞分離：從組織或體液中分離目