廣西pcr上崗證考試及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈式反應(yīng)B.核酸雜交反應(yīng)C.基因測序反應(yīng)D.蛋白質(zhì)電泳反應(yīng)2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成方向3'→5'D.有校對功能3.PCR反應(yīng)體系中不包括以下哪種成分（）A.dNTPB.引物C.限制性內(nèi)切酶D.模板DNA4.引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50-100bp5.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.55℃左右B.72℃左右C.94-95℃D.4℃6.熒光定量PCR技術(shù)中，常用的熒光化學(xué)物質(zhì)是（）A.溴酚藍B.二甲苯青C.SYBRGreenID.考馬斯亮藍7.進行PCR實驗時，防止污染的關(guān)鍵步驟不包括（）A.實驗環(huán)境清潔B.試劑分裝保存C.隨意使用移液器D.設(shè)立陰性對照8.以下哪種樣本不適合作為PCR模板（）A.全血B.血清C.新鮮組織D.已腐敗的組織9.PCR產(chǎn)物的分析方法不包括（）A.凝膠電泳B.高效液相色譜C.測序D.比色法10.在PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)一般為（）A.10-15次B.20-35次C.40-50次D.50-60次答案：1.A2.A3.C4.B5.C6.C7.C8.D9.D10.B二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.物種進化研究2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物濃度C.Taq酶活性D.反應(yīng)緩沖液成分3.引物設(shè)計的原則包括（）A.避免引物自身互補B.上下游引物之間避免互補C.GC含量適當D.引物長度合適4.以下屬于PCR儀器的品牌有（）A.羅氏B.賽默飛世爾C.伯樂D.尼康5.PCR實驗中，常用的核酸提取方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠柱吸附法C.磁珠法D.鹽析法6.熒光定量PCR的優(yōu)點有（）A.靈敏度高B.特異性強C.能定量分析D.操作簡單快速7.在PCR實驗室布局中，一般需要劃分的區(qū)域有（）A.試劑準備區(qū)B.樣本處理區(qū)C.擴增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)8.防止PCR實驗污染的措施有（）A.嚴格分區(qū)操作B.定期清潔儀器和環(huán)境C.戴口罩和手套D.使用一次性耗材9.以下哪些物質(zhì)可用于PCR反應(yīng)的緩沖體系（）A.Tris-HClB.KClC.MgCl?D.NaCl10.PCR產(chǎn)物出現(xiàn)非特異性擴增的原因可能是（）A.引物特異性差B.退火溫度過低C.模板濃度過高D.Taq酶用量過多答案：1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABC6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)只能擴增已知序列的DNA片段。（）2.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，所以PCR產(chǎn)物準確性較低。（）3.引物濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）4.熒光定量PCR可以對起始模板進行絕對定量和相對定量。（）5.PCR實驗室可以不進行嚴格分區(qū)。（）6.只要引物設(shè)計正確，就不會出現(xiàn)非特異性擴增。（）7.核酸提取過程中，若樣本量不足會影響PCR結(jié)果。（）8.PCR反應(yīng)中，退火溫度是固定不變的。（）9.實驗中使用的移液器可以隨意在不同區(qū)域使用。（）10.保存PCR試劑時，不需要考慮溫度和濕度。（）答案：1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.×10.×四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)以DNA為模板，在引物、dNTP、Taq酶等作用下，經(jīng)高溫變性使雙鏈DNA解開，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環(huán)擴增目的DNA片段。2.列舉三種常見的PCR產(chǎn)物分析方法及原理。答案：凝膠電泳：根據(jù)不同大小DNA在電場中遷移速率不同分離產(chǎn)物；測序：測定DNA序列確定產(chǎn)物準確性；熒光定量分析：利用熒光信號強度與產(chǎn)物量的關(guān)系進行定量。3.簡述核酸提取的一般步驟。答案：首先破碎細胞釋放核酸，如物理、化學(xué)方法；接著去除雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖等，常用酚氯仿抽提等；最后通過沉淀、洗滌等步驟純化核酸，獲得高質(zhì)量核酸用于后續(xù)實驗。4.說明PCR實驗室嚴格分區(qū)的重要性。答案：防止不同操作區(qū)域的試劑、樣本等相互污染，如避免擴增產(chǎn)物污染樣本處理區(qū)和試劑準備區(qū)，保證實驗結(jié)果準確性，降低假陽性、假陰性結(jié)果的出現(xiàn)概率。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論如何提高PCR反應(yīng)的特異性。答案：優(yōu)化引物設(shè)計，提高特異性；調(diào)整退火溫度，適當提高可減少非特異性結(jié)合；控制模板濃度和Taq酶用量，避免過高導(dǎo)致非特異性擴增；優(yōu)化反應(yīng)體系，選擇合適緩沖液等。2.若PCR實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性，可能的原因及解決方法有哪些？答案：原因可能是污染，如實驗環(huán)境、試劑污染等；引物特異性差；退火溫度低。解決方法：嚴格清潔環(huán)境、更換試劑；重新設(shè)計引物；適當提高退火溫度。3.熒光定量PCR與普通PCR在應(yīng)用上有哪些區(qū)別？答案：普通PCR主要用于擴增目的DNA片段，進行定性分析。熒光定量PCR不僅能擴增，還可對起始模板進行定量分析，在病毒載