檢驗(yàn)科甲凝凝血功能檢測操作規(guī)范演講人：日期:目錄/CONTENTS2標(biāo)本采集規(guī)范3試劑與設(shè)備準(zhǔn)備4標(biāo)準(zhǔn)化操作流程5質(zhì)量控制管理6結(jié)果報(bào)告與審核1檢測原理與目的檢測原理與目的PART01甲凝功能概述凝血級聯(lián)反應(yīng)機(jī)制纖溶系統(tǒng)關(guān)聯(lián)性抗凝系統(tǒng)平衡原理甲凝檢測基于內(nèi)源性凝血途徑的激活過程，通過接觸因子（如Ⅻ因子）激活引發(fā)一系列酶原轉(zhuǎn)化反應(yīng)，最終形成纖維蛋白凝塊。該過程涉及多種凝血因子和輔因子的協(xié)同作用。甲凝功能檢測不僅反映促凝活性，同時(shí)評估抗凝系統(tǒng)（如抗凝血酶Ⅲ、蛋白C/S系統(tǒng)）的調(diào)節(jié)能力，體現(xiàn)凝血與抗凝的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。檢測結(jié)果受纖溶系統(tǒng)（如D-二聚體、纖溶酶原）活性影響，需結(jié)合纖溶指標(biāo)綜合判斷，避免單一指標(biāo)導(dǎo)致的臨床誤判。作為深靜脈血栓、肺栓塞等疾病的輔助診斷指標(biāo)，甲凝功能異?？商崾靖吣隣顟B(tài)或凝血因子缺乏，為抗凝治療提供依據(jù)。術(shù)前甲凝檢測能識別潛在出血傾向患者，特別是肝膽手術(shù)、心血管手術(shù)等高風(fēng)險(xiǎn)操作前必備的篩查項(xiàng)目。對于華法林、肝素等抗凝藥物使用的患者，定期甲凝功能檢測可精確調(diào)整用藥劑量，平衡治療效果與出血風(fēng)險(xiǎn)。通過異常甲凝結(jié)果可初步判斷血友病、血管性血友病等遺傳性凝血功能障礙，需進(jìn)一步行因子活性測定確診。臨床應(yīng)用價(jià)值血栓性疾病診斷手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)評估抗凝治療監(jiān)測遺傳性凝血病篩查檢測指標(biāo)定義活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）反映內(nèi)源性凝血途徑功能的核心指標(biāo)，正常值范圍通常為25-35秒，延長提示凝血因子缺乏或存在抑制物，縮短可能預(yù)示高凝狀態(tài)。凝血酶原時(shí)間（PT）評估外源性凝血途徑的關(guān)鍵參數(shù)，以國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）報(bào)告結(jié)果，主要用于維生素K依賴性凝血因子監(jiān)測，正常INR為0.8-1.2。纖維蛋白原濃度直接測定凝血終末底物含量，正常值2-4g/L，降低見于DIC、嚴(yán)重肝病，增高與炎癥、創(chuàng)傷等急性期反應(yīng)相關(guān)。凝血酶時(shí)間（TT）特異性反映纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白的過程異常，延長提示肝素污染、低纖維蛋白原血癥或異常纖維蛋白原血癥。標(biāo)本采集規(guī)范PART02采血管選擇標(biāo)準(zhǔn)必須使用含3.2%枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管，確保抗凝劑與血液比例為1:9，避免因比例偏差導(dǎo)致檢測結(jié)果誤差。專用抗凝采血管優(yōu)先選用高透明度、低吸附性的塑料或硅化玻璃材質(zhì)采血管，減少血小板活化及凝血因子吸附對檢測的干擾。管壁材質(zhì)要求采血管需明確標(biāo)注“凝血檢測專用”，容量通常為2.7mL或4.5mL，嚴(yán)格禁止使用過期或破損采血管。標(biāo)識與容量匹配穿刺部位選擇穿刺時(shí)需快速、精準(zhǔn)，避免反復(fù)穿刺導(dǎo)致組織因子釋放激活凝血系統(tǒng)，影響凝血酶原時(shí)間（PT）和活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）的準(zhǔn)確性。一針見血技術(shù)止血帶使用規(guī)范扎止血帶時(shí)間不超過1分鐘，松解止血帶后等待30秒再采血，防止靜脈淤血引起的假性凝血功能異常。首選肘正中靜脈或貴要靜脈，避免選擇細(xì)小靜脈或存在淤血、水腫的血管，確保血流順暢且減少組織液混入風(fēng)險(xiǎn)。靜脈穿刺操作要點(diǎn)采血后需立即輕柔顛倒混勻8-10次，確保抗凝劑與血液充分接觸，避免局部凝血或微小凝塊形成。立即輕柔混勻標(biāo)本采集后需在室溫下靜置30分鐘，使抗凝劑與血液充分反應(yīng)，但不得超過4小時(shí)，以防凝血因子降解。離心前靜置時(shí)間以1500×g離心15分鐘，獲取乏血小板血漿（PPP），離心后血漿血小板計(jì)數(shù)需<10×10^9/L，否則需重新離心處理。離心速度與時(shí)間標(biāo)本抗凝處理流程試劑與設(shè)備準(zhǔn)備PART03試劑存儲(chǔ)與復(fù)溫條件嚴(yán)格溫控存儲(chǔ)分裝與標(biāo)簽管理復(fù)溫時(shí)間控制所有凝血功能檢測試劑必須保存在2-8℃的專用冷藏柜中，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性成分降解，特殊試劑需避光保存。使用前需將試劑置于室溫平衡至少30分鐘，復(fù)溫過程中禁止使用水浴或加熱設(shè)備加速升溫，以防蛋白變性。大包裝試劑需按單次用量分裝并標(biāo)注開封日期，避免反復(fù)取用造成污染，分裝瓶需采用無菌密封容器。光電比色系統(tǒng)校準(zhǔn)采用微量稱重法驗(yàn)證加樣針的液體分配精度，要求10μL-100μL范圍內(nèi)的誤差小于±3%，并記錄壓力傳感器反饋數(shù)據(jù)。加樣精度驗(yàn)證溫度模塊檢測通過外接高精度溫度探頭驗(yàn)證反應(yīng)槽恒溫性能，37℃溫控波動(dòng)范圍需≤±0.3℃，每季度需進(jìn)行熱電偶校準(zhǔn)。每日檢測前需使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片校準(zhǔn)光度計(jì)，確保波長精度在±2nm范圍內(nèi)，吸光度線性誤差≤1.5%。儀器校準(zhǔn)驗(yàn)證步驟所有接觸樣本的離心管需通過溶血實(shí)驗(yàn)檢測，要求游離血紅蛋白含量＜0.02g/L，且無塑化劑析出。耗材質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)離心管材質(zhì)篩查每批次槍頭需抽樣進(jìn)行微生物限度檢查，細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)＜0.25EU/mL，并檢測孔徑一致性。移液槍頭無菌驗(yàn)證使用分光光度計(jì)檢測反應(yīng)杯在340nm波長下的透光率，要求基線吸光度＜0.1，批內(nèi)差異CV值＜5%。反應(yīng)杯透光率測試標(biāo)準(zhǔn)化操作流程PART04標(biāo)本離心處理參數(shù)標(biāo)本分層標(biāo)準(zhǔn)離心后血漿層應(yīng)透明無懸浮顆粒，若出現(xiàn)脂血或溶血需重新采集標(biāo)本并記錄異常情況。離心溫度控制保持離心機(jī)環(huán)境溫度在22-25℃，防止溫度波動(dòng)導(dǎo)致標(biāo)本成分不穩(wěn)定或凝血因子活性降低。離心速度與時(shí)間設(shè)定采用3000轉(zhuǎn)/分鐘的離心速度，持續(xù)15分鐘，確保血漿與血細(xì)胞有效分離，避免溶血或纖維蛋白原殘留影響檢測結(jié)果。上機(jī)檢測執(zhí)行步驟01檢測前需執(zhí)行光電校準(zhǔn)和質(zhì)控品測試，確保光學(xué)系統(tǒng)、加樣針和溫控模塊功能正常，質(zhì)控值在允許范圍內(nèi)方可進(jìn)行樣本檢測。優(yōu)先檢測急診標(biāo)本，常規(guī)標(biāo)本按接收時(shí)間排序上機(jī)，避免交叉污染；每批次檢測需包含陰性質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)品。實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)曲線變化，記錄凝固時(shí)間、吸光度變化率等參數(shù)，系統(tǒng)自動(dòng)判讀結(jié)果后需人工復(fù)核異常值。0203儀器預(yù)檢與校準(zhǔn)樣本加載順序反應(yīng)監(jiān)測與數(shù)據(jù)采集反應(yīng)體系配制比例試劑與樣本體積比嚴(yán)格按1:9比例混合枸櫞酸鈉抗凝血漿與凝血活酶試劑，誤差需控制在±2%以內(nèi)，避免因比例偏差導(dǎo)致PT/APTT結(jié)果失真。緩沖液添加要求重鈣化步驟使用0.025mol/L氯化鈣溶液，添加體積精確至100μL，以觸發(fā)標(biāo)準(zhǔn)化凝血級聯(lián)反應(yīng)。每測試孔加入50μL的Tris-HCl緩沖液（pH7.4），維持反應(yīng)體系離子強(qiáng)度穩(wěn)定，確保凝血酶原轉(zhuǎn)化效率一致。鈣離子濃度控制質(zhì)量控制管理PART05確保儀器狀態(tài)穩(wěn)定，檢測系統(tǒng)符合性能要求，避免因設(shè)備預(yù)熱不足導(dǎo)致結(jié)果偏差。每日開機(jī)后首次檢測前運(yùn)行針對高、中、低三個(gè)濃度水平質(zhì)控品進(jìn)行檢測，監(jiān)控檢測過程的精密度和準(zhǔn)確度，覆蓋臨床常見結(jié)果范圍。每批次樣本檢測中插入質(zhì)控品驗(yàn)證新試劑批號或校準(zhǔn)后的系統(tǒng)性能，確保檢測結(jié)果與之前保持一致，避免因試劑差異引入誤差。更換試劑或校準(zhǔn)后必須運(yùn)行質(zhì)控品運(yùn)行頻率失控結(jié)果處理流程03聯(lián)系專業(yè)工程師或廠家技術(shù)支持若重復(fù)檢測仍失控且排除操作問題，需由專業(yè)人員排查設(shè)備硬件或軟件故障，必要時(shí)重新校準(zhǔn)或更換部件。02核查儀器狀態(tài)及試劑有效性檢查試劑儲(chǔ)存條件、有效期、開瓶時(shí)間，確認(rèn)儀器管路無堵塞、光源穩(wěn)定、溫度控制系統(tǒng)正常。01立即暫停樣本檢測并復(fù)測質(zhì)控品排除偶然誤差，確認(rèn)失控是否持續(xù)存在，同時(shí)檢查質(zhì)控品是否失效或操作步驟是否規(guī)范。03質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)記錄規(guī)范02定期繪制質(zhì)控圖并分析趨勢使用Levey-Jennings質(zhì)控圖監(jiān)控均值偏移或標(biāo)準(zhǔn)差擴(kuò)大，識別潛在系統(tǒng)性誤差，如試劑降解或儀器性能漂移。歸檔保存紙質(zhì)與電子雙備份紙質(zhì)記錄需簽字確認(rèn)并存檔，電子數(shù)據(jù)應(yīng)加密存儲(chǔ)并定期備份，滿足實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證和審計(jì)的合規(guī)性要求。01完整記錄質(zhì)控?cái)?shù)值及操作信息包括質(zhì)控品批號、濃度水平、檢測時(shí)間、操作人員簽名，確保數(shù)據(jù)可追溯性，便于后續(xù)分析趨勢變化。結(jié)果報(bào)告與審核PART06結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)試劑說明書和實(shí)驗(yàn)室建立的參考范圍，結(jié)合患者臨床病史（如抗凝治療、肝病等）進(jìn)行綜合判讀，重點(diǎn)關(guān)注PT延長或縮短的病理意義。需區(qū)分內(nèi)源性凝血因子缺乏、肝素治療影響或狼瘡抗凝物干擾，結(jié)合混合試驗(yàn)結(jié)果判斷異常原因。低于參考下限提示低纖維蛋白原血癥或彌散性血管內(nèi)凝血（DIC），高于上限需排除炎癥或創(chuàng)傷等急性期反應(yīng)。嚴(yán)格依據(jù)抗凝治療目標(biāo)范圍（如2.0-3.0）評估，非治療患者INR異常需排查維生素K缺乏或肝功能異常。凝血酶原時(shí)間（PT）活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）纖維蛋白原（FIB）國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）異常值復(fù)檢規(guī)則自動(dòng)復(fù)檢條件當(dāng)PT、APTT超過儀器預(yù)設(shè)報(bào)警閾值（如PT>15秒或APTT>50秒），系統(tǒng)自動(dòng)觸發(fā)重復(fù)檢測，排除樣本凝塊或儀器誤差。01人工復(fù)核流程對連續(xù)兩次異常結(jié)果，需檢查樣本質(zhì)量（如溶血、脂血）、核對試劑批號有效性，必要時(shí)更換檢測通道或手工方法驗(yàn)證。臨床相關(guān)性分析若復(fù)檢結(jié)果仍異常，需聯(lián)系臨床醫(yī)師確認(rèn)患者用藥史（如華法林、肝素），并建議補(bǔ)充凝血因子活性檢測或抑制物篩查。危急值處理纖維蛋白原<1.0g/L或APTT>100秒等危急值需立即電話通知臨床，并在報(bào)告中標(biāo)注復(fù)核人員及處理時(shí)間。020304初級審核高級審核由檢測人員核對儀器原始數(shù)據(jù)與傳輸結(jié)果的一致性，確保無跨項(xiàng)目粘貼錯(cuò)誤，并標(biāo)注檢測方法（如光學(xué)法/磁珠法