2025/12/22儀器分析教程

第10章高效液相色譜法10.1概述HighPerformanceLiquidChromatography（HPLC)10.1.1HPLC的特點(diǎn)10.1.2HPLC與GC的比較2025/12/2210.1概述高壓高速高效高靈敏度應(yīng)用范圍廣10.1.1HPLC的特點(diǎn)高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較1.相同點(diǎn)①液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數(shù)、塔板高度分離度、選擇性等與氣相色譜一致。②液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致。2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較2.不同點(diǎn)由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中的氣體作為流動(dòng)相，而液體和氣體的性質(zhì)不相同；此外，液相色譜所用的儀器設(shè)備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定差別，主要有以下幾方面：2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較2.不同點(diǎn)

①流動(dòng)相

HPLC：液體（載液），會(huì)與樣品發(fā)生相互作用；GC：氣體（載氣），與樣品呈惰性。②固定相

HPLC：種類較少，僅十幾種，分離選擇性在很大程度上要通過選用不同的流動(dòng)相來改變。

GC：種類較多，數(shù)百種，分離選擇性主要通過選用不同的固定相來改變。

2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較2.不同點(diǎn)

③分析對(duì)象

HPLC：受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，非常適合分子量較大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析，大約占有機(jī)物的70～80%。GC：能分析在操作溫度下能氣化而不分解的物質(zhì)。對(duì)高沸點(diǎn)化合物、非揮發(fā)性物質(zhì)、熱不穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難。致使其應(yīng)用受到一定程度的限制，據(jù)統(tǒng)計(jì)只有大約20%的有機(jī)物能用氣相色譜分析；2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較2.不同點(diǎn)

④分離溫度HPLC：通常在室溫下操作，較低的溫度，一般有利于色譜分離條件的選擇GC：一般在高于室溫下分離，最高可達(dá)300～400℃左右。⑤色譜柱

HPLC:柱較短較細(xì)

GC：柱較長(zhǎng)較粗

2025/12/2210.1概述10.1.2HPLC與GC的比較2.不同點(diǎn)

⑥流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力HPLC：采用高壓泵GC：高壓載氣。

3.優(yōu)點(diǎn)與不足液相色譜中制備樣品簡(jiǎn)單，回收樣品也比較容易，而且回收是定量的，適合于大量制備。但液相色譜尚缺乏通用的檢測(cè)器，儀器比較復(fù)雜，價(jià)格昂貴。在實(shí)際應(yīng)用中，這兩種色譜技術(shù)是互相補(bǔ)充的。2025/12/22儀器分析教程10.2概述10.2.1高壓輸液系統(tǒng)10.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)10.2.3分離系統(tǒng)10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)2025/12/2210.2高效液相色譜儀液相色譜儀器2025/12/2210.2高效液相色譜儀液相色譜儀器2025/12/2210.2高效液相色譜儀液相色譜儀器2025/12/2210.2高效液相色譜儀液相色譜儀器2025/12/2210.2高效液相色譜儀2025/12/2210.2高效液相色譜儀高效液相色譜儀主要由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)和記錄系統(tǒng)四大部分組成。

HPLC流程示意圖

2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.1高壓輸液泵HPLC主要部件之一，為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。高壓輸液泵主要由貯液器、高壓泵、過濾器、梯度洗脫裝置等組成。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.1高壓輸液泵（1）貯液器

一般由玻璃、不銹鋼或聚四氟乙烯制成，容量為1～2L。貯液器應(yīng)帶有脫氣裝置。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.1高壓輸液泵（2）高壓泵一般要求泵的輸出壓力高達(dá)15～50Mpa。

①恒壓泵：輸出的壓力恒定，而流量則隨色譜系統(tǒng)阻力的變化而變化，不適于梯度洗脫，

②恒流泵：在一定的操作條件下，輸出的流量恒定，柱阻力或流動(dòng)相黏度改變只引起柱前壓力的變化，特別適合梯度洗脫。

2025/12/2210.2高效液相色譜儀外梯度:

利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度:一臺(tái)高壓泵,通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。10.2.1高壓輸液泵（3）梯度洗脫裝置2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.1高壓輸液泵梯度洗脫裝置示意圖2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)

（1）注射器進(jìn)樣2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示：（2）六通閥進(jìn)樣2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)（3）自動(dòng)進(jìn)樣器可自動(dòng)進(jìn)樣、適合大量樣品的分析、實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.3分離系統(tǒng)

柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長(zhǎng)5～40cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)

1.紫外檢測(cè)器原理：基于待測(cè)組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系服從比耳定律。

特點(diǎn)：靈敏度高；線形范圍高；流通池很小（容積8μL）；對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)可選，易于操作；可用于梯度洗脫。應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。2025/12/2210.2高效液相色譜儀

紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展：

光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)

2.熒光檢測(cè)器

高靈敏度、高選擇性；對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)；2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)

3.電導(dǎo)檢測(cè)器原理：基于被測(cè)組分的導(dǎo)電能力的不同，它對(duì)溫度和載液流速較敏感，是離子交換色譜中使用最廣泛的檢測(cè)器。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)

4.示差折光檢測(cè)器原理：基于被測(cè)組分和流動(dòng)相的折光率的不同，特點(diǎn)：該檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)），是除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器。其靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫類型：偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種。2025/12/2210.2高效液相色譜儀10.2.4檢測(cè)系統(tǒng)

4.示差折光檢測(cè)器類型：偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種。2025/12/22儀器分析教程10.3液相色譜速率理論10.3.1渦流擴(kuò)散10.3.2分子擴(kuò)散10.3.3固定相傳質(zhì)阻力10.3.4流動(dòng)相傳質(zhì)阻力10.3.5提高柱效的方法2025/12/2210.3液相色譜速率理論

HPLC的理論基礎(chǔ)與GC相似，但它們的流動(dòng)相不同。前者為液體、后者為氣體，二者流動(dòng)相的性質(zhì)有明顯的差別，液體的擴(kuò)散系數(shù)只有氣體的萬(wàn)分之一至十萬(wàn)分之一，液體的粘度比氣體大一百倍，而密度為氣體的一千倍左右。以上差別將影響組分在色譜兩相中的擴(kuò)散和傳質(zhì)運(yùn)動(dòng)，進(jìn)而影響色譜的分離分析過程，因此，在描述兩種色譜的速率理論時(shí)會(huì)有所不同。2025/12/2210.3液相色譜速率理論

由Giddings、Snyder等人提出的液相色譜速率理論方程如下：Hed

：渦流擴(kuò)散項(xiàng)；

Hid-分子擴(kuò)散項(xiàng)；Hm-流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)；Hsp-固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)。

2025/12/2210.3液相色譜速率理論1.渦流擴(kuò)散項(xiàng)減小固定相粒度、柱子填充均勻，均有利于提高柱效。式中，dp

：固定相的平均顆粒直徑，

λ

：固定相的填充不規(guī)則因子。2025/12/2210.3液相色譜速率理論2.分子擴(kuò)散項(xiàng)式中，

Cd：填充系數(shù)；

Dm：組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)

當(dāng)載液流動(dòng)的線速度μ>0.5cm/s時(shí)，Hid項(xiàng)通?？梢院雎圆挥?jì)

2025/12/2210.3液相色譜速率理論3.固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)

改善傳質(zhì)，加快溶質(zhì)分子在固定相上的解吸過程可解決由固定相傳質(zhì)所引起的峰擴(kuò)展。式中：df：固定液的液膜厚度；

Ds：試樣分子在固定液內(nèi)的擴(kuò)散系數(shù)；

Cs：與分配比k有關(guān)的系數(shù)。2025/12/2210.3液相色譜速率理論4.流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)

①流動(dòng)相流動(dòng)區(qū)域內(nèi)的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Hm

②在流動(dòng)相滯留區(qū)內(nèi)的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Hsm

2025/12/2210.3液相色譜速率理論5.提高柱效的方法1.采用粒度小而均勻、孔穴較淺的固定相擔(dān)體，這是提高液相色譜柱效最有效的途徑；2.采用低粘度溶劑作流動(dòng)相，以減小在柱內(nèi)的流動(dòng)阻力；3.適當(dāng)降低流動(dòng)相流速；4.適當(dāng)提高柱溫，以降低流動(dòng)相粘度，增大擴(kuò)散系數(shù)。5.盡量減小連接管、檢測(cè)器流通池死體積。

2025/12/22儀器分析教程10.4高效液相色譜法的分類10.4.1液-液分配色譜法10.4.2液-固色譜法10.4.3離子交換色譜法10.4.4空間排阻色譜法2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

根據(jù)分離機(jī)理不同，高效液相色譜法分為液—液分配色譜法、液—固吸附色譜法、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法、離子色譜法和空間排阻色譜法等。10.4.1液—液分配色譜法（Liquid—liquidpartitionchromatography）固定相與流動(dòng)相均為液體（互不相溶）。1.基本原理組分在固定相和流動(dòng)相上的分配，分離順序取決于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)K（或分配比k）大的組分，保留值大，后出柱。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.1液—液分配色譜法（Liquid—liquidpartitionchromatography）（1）正相液—液色譜法

固定液極性大于流動(dòng)相極性的色譜法。

應(yīng)用：分離極性較強(qiáng)的化合物，如脂肪酸、甾醇類、類脂化合物磷脂類化合物等有機(jī)物。

根據(jù)固定液和流動(dòng)相的極性不同：

（2）反相液—液色譜法固定液極性小于流動(dòng)相極性的色譜法。應(yīng)用：是目前應(yīng)用的最多最有效的液相色譜法。適合于分離芳烴、稠環(huán)芳烴及烷烴等非極性或弱極性化合物。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類10.4.1液—液分配色譜法（Liquid—liquidpartitionchromatography）2.液—液分配色譜固定相

早期為在全多孔型擔(dān)體或表面多孔性擔(dān)體上涂漬固定液，固定液流失，較少采用?，F(xiàn)多采用化學(xué)鍵合固定相：（將各種不同基團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠（擔(dān)體）表面的游離羥基上。如：硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—

C、硅氧碳鍵型：≡Si—O—C等。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.1液—液分配色譜法2.液—液分配色譜固定相

（1）傳質(zhì)快；（2）壽命長(zhǎng)，穩(wěn)定性好；

（4）選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)；（5）有利于梯度洗脫?；瘜W(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)：2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.1液—液分配色譜法（Liquid—liquidpartitionchromatography）3.液—液分配色譜流動(dòng)相

由洗脫劑和調(diào)節(jié)劑兩部分組成。前者的作用是將試樣溶解和分離；后者則用以調(diào)節(jié)前者的極性和強(qiáng)度，以改變組分在柱中的移動(dòng)速度和分離狀態(tài)。對(duì)流動(dòng)相的要求：①對(duì)試樣有適當(dāng)?shù)娜芙舛?，以防在柱頭產(chǎn)生沉淀；②與固定相不互溶，不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；③與所用檢測(cè)器相匹配；④粘度應(yīng)較小，以獲得較高的柱效；⑤純度高，毒性小，價(jià)格便宜，不污染環(huán)境和腐蝕儀器。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.1液—液分配色譜法（Liquid—liquidpartitionchromatography）4.應(yīng)用

液—液色譜法對(duì)極性化合物和非極性化合物都能達(dá)到滿意的分離效果。例如，Permaphase—ODS鍵合相反相液—液色譜對(duì)稠環(huán)芳烴完成了很好的分離。

2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.2液—固吸附色譜法（Liquid-solidadsorptionchromatography）1.分離原理組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；利用吸附劑對(duì)溶劑和各組分分子的吸附能力不同得以分離。

2.固定相

為固體吸附劑，極性：如硅膠、氧化鋁等，非極性：活性炭等。較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑；2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.2液—固吸附色譜法（Liquid-solidadsorptionchromatography）3.流動(dòng)相各種不同極性的一元溶劑或按一定比例混合的多元溶劑。4.應(yīng)用

不同類型的有機(jī)化合物及幾何異構(gòu)體的分離分析。如，有機(jī)氯農(nóng)藥的分析。

2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.3離子交換色譜法（Ion-exchangechromatography

）1.分離原理組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)。陰離子交換：

陽(yáng)離子交換：

2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.3離子交換色譜法（Ion-exchangechromatography

）2.固定相陰離子離子交換樹脂或陽(yáng)離子離子交換樹脂。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.3離子交換色譜法（Ion-exchangechromatography）3.流動(dòng)相陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽(yáng)離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液。分離離子或可離解的化合物，常用于無機(jī)離子和生物物質(zhì)的分離，例如堿金屬、堿土金屬、稀土金屬等金屬離子混合物的分離，；食品添加劑及污染物的分析；氨基酸、蛋白質(zhì)、糖類、核糖核酸、藥物等樣品的分離。4.應(yīng)用2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.4空間排阻色譜法（Stericexclusionchromatography）1.分離原理按組分分子的尺寸大小和形狀的差別進(jìn)行分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。全部在死體積前出峰；

2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.4空間排阻色譜法（Stericexclusionchromatography）2.固定相凝膠(具有一定大小孔隙分布)。（1）軟質(zhì)凝膠適用于常壓下低流速的分離與分析。（2）半硬質(zhì)凝膠目前應(yīng)用最多，適用于非極性有機(jī)流動(dòng)相。（3）硬質(zhì)凝膠流動(dòng)相可為水或非水溶劑，適應(yīng)于較高流速下工作。2025/12/2210.4高效液相色譜法的分類

10.4.4空間排阻色譜法（Stericexclusionchromatography）3.固定相空間排阻色譜中，選擇流動(dòng)相不是為了控制分離，而僅僅是作為試樣的載體。常用的流動(dòng)相有四氫呋喃、十氫化萘、氯仿、二甲基甲酰胺和水等。4.應(yīng)用主要用于分離相對(duì)分子質(zhì)量在2×103～2×106之間的生物大分子和高聚物。以及測(cè)定其相對(duì)分子質(zhì)量的分布（分級(jí)）狀況間）等，

2025/12/22儀器分析教程10.5高效液相色譜分析方法的建立及分析方法

10.5.1HPLC分析方法的建立10.5.2HPLC定性定量方法2025/12/2210.5HPLC分析方法的建立及分析方法10.5.1HPLC分析方法的建立1.了解樣品信息和分析目的

樣品的大體組成、濃度范圍、組分的物理性質(zhì)和紫外光譜圖及分析目的。

2.樣品預(yù)處理稱重、稀釋；液液萃取、液固萃取、提取，蒸餾等

2025/12/2210.5HPLC分析方法的建立及分析方法10.5.1HPLC分析方法的建立3.選擇合適的分析方法

原則：一般根據(jù)試樣的相對(duì)分子質(zhì)量大小，溶解度及分子結(jié)構(gòu)等進(jìn)行分離方法初步選擇。2025/12/2210.5HPLC分析方法的建立及分析方法10.5.1HPLC分析方法的建立4.樣品的檢測(cè)根據(jù)被測(cè)化合物性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器。如：紫外檢測(cè)器一般檢測(cè)含有共軛不飽和鍵的化合物。5.HPLC的注意事項(xiàng)①流動(dòng)相要清潔；②應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行凈化預(yù)處理；③樣品進(jìn)樣量適當(dāng)；④控制好pH值范圍（一般2-8）；⑤選擇適當(dāng)?shù)木彌_溶液；⑥控制好系統(tǒng)的壓力（一般＜15Mpa);⑦經(jīng)常清洗色譜柱。

2025/12/2210.5HPLC分析方法的建立及分析方法10.5.2HPLC定性定量方法1.HPLC定性方法①GC的定性方法基本上都可用于HPLC②利用HPLC檢測(cè)器的選擇性進(jìn)行定性③利用反相色譜中的“a，C”指數(shù)定性

反相色譜中有機(jī)調(diào)節(jié)劑的濃度c與待測(cè)組分的分配比k之間滿足對(duì)數(shù)線性關(guān)系，可表示為：某一組分的a，C指數(shù)與某已知標(biāo)樣相同，即可認(rèn)定兩者為同一種化合物

2025/12/2210.5HPLC分析方法的建立及分析方法10.5.2HPLC定性定量方法1.HPLC定量方法①GC的定量方法基本都可用于HPLC②標(biāo)準(zhǔn)加入法③痕量組采用峰高定量法

廢水樣品中五氯苯（PCP）的分析

2025/12/22儀器分析教程10.6高效毛細(xì)管電泳

10.6.1HPCE的裝置10.6.2HPCE的分離原理10.6.3HPCE的特點(diǎn)10.6.4HPCE的分離模式2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳

電泳：帶電粒子在外電場(chǎng)的作用下，向與其所帶電荷相反的電極遷移的現(xiàn)象。速度ν電泳

電滲流現(xiàn)象：玻璃表面存在硅羥基,pH>3時(shí),形成雙電層，在高電場(chǎng)的作用下引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度ν電滲流。

2025/12/22

10.6高效毛細(xì)管電泳1.經(jīng)典電泳分離法電泳法：利用電泳現(xiàn)象對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法。所用分離柱的柱徑大，柱較短，分離效率不高（遠(yuǎn)低于HPLC），溫度影響大。

2025/12/222.高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上采取了兩項(xiàng)重要改進(jìn)：

一是采用了0.05mm內(nèi)徑的毛細(xì)管；二是采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓。毛細(xì)管的采用使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場(chǎng)電壓可以很高。電壓升高，電場(chǎng)推動(dòng)力大，又可進(jìn)一步使柱徑變小，柱長(zhǎng)增加，高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬(wàn)塊/米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬(wàn)。

10.6高效毛細(xì)管電泳2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳

10.6.1HPCE的裝置HPCE的基本裝置為：高壓電源、毛細(xì)管柱、進(jìn)樣系統(tǒng)、檢測(cè)器、兩個(gè)貯液器和控制及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。其儀器裝置下圖所示。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳

10.6.1HPCE的裝置1.高壓電源一般為30kV，電流為200～300μA，穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源，具有恒壓、恒流和恒功率輸出。

2.毛細(xì)管柱

柱長(zhǎng)度一般為10～100cm、內(nèi)徑為25～100μm，最常用的是50μm。常用的毛細(xì)管為用高純石英拉制的圓柱形毛細(xì)管。

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10.6.1HPCE的裝置3.進(jìn)樣系統(tǒng)nL級(jí)進(jìn)樣

（1）壓差法進(jìn)樣靠虹吸作用將試樣吸入

（2）電動(dòng)進(jìn)樣簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化4.檢測(cè)器紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（可檢測(cè)到：10-19～10-21mol·L-1）2025/12/22高效毛細(xì)管電泳儀器（1）10.6高效毛細(xì)管電泳2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳儀器（2）2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳儀器（3）2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳

10.6.2分離原理電場(chǎng)作用下，柱中出現(xiàn)電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

帶電粒子的遷移速度等于電泳和電滲流兩種速度的矢量和。

正離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出；

中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽(yáng)離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反，ν電滲流>ν電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場(chǎng)力大小不一樣也同時(shí)被相互分離。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳10.6.3毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)

高靈敏度：可檢測(cè)出低至10-21

mol/L濃度的物質(zhì)。高分離效率：理論塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)塊，甚至數(shù)千萬(wàn)塊。高分析速度：可在3分鐘內(nèi)分離30種陰離子；1.7分鐘分離19種陽(yáng)離子;4分鐘內(nèi)將堿金屬和鑭系元素的24種陽(yáng)離子完全分離。試樣用量少：僅需幾nL（10-9L）的試樣儀器簡(jiǎn)單，操作成本低：分析一個(gè)試樣僅需幾毫升流動(dòng)液。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳10.6.3毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)

不足之處：進(jìn)樣不夠方便。應(yīng)用范圍相對(duì)較窄。分析陰離子時(shí)，由陰極進(jìn)樣，在陽(yáng)極檢測(cè)。但電滲流方向與陰離子受電場(chǎng)力作用移動(dòng)方向相反，出峰時(shí)間較長(zhǎng)。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳10.6.4毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)分離模式

按照毛細(xì)管內(nèi)的分離介質(zhì)和分離原理的不同，HPCE目前有以下6種主要的分離模式。

1.毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）

最普遍、最基本的一種分離模式。CZE分離是基于各組分的凈電荷與其質(zhì)量比（荷質(zhì)比）的差異而實(shí)現(xiàn)的，其分離介質(zhì)通常為電解質(zhì)水溶液，

主要應(yīng)用于氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、多種離子和帶電粒子的分離分析，還可用于對(duì)映體拆分和構(gòu)像分析等。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳10.6.4毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)分離模式

2.毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）將聚丙烯酰胺在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測(cè)定蛋白質(zhì)、DNA等。2025/12/2210.6高效毛細(xì)管電泳

在緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。在電場(chǎng)力的作