ICS11.220

CCSB41

1304

邯鄲市地方標準

DB1304/T516—2025

噬菌體及其裂解酶防控禽氣源性病原

菌感染技術規(guī)程

2025-06-27發(fā)布2025-07-20實施

邯鄲市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1304/T516—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河北工程大學提出。

本文件起草單位：河北工程大學。

本文件主要起草人：鐘翠紅、王方方、崔國林、左海龍、王艷梅、張占麗、霍志闖、和彥澤、張永

英、張延明、李培、劉嘉楠、石玉祥、左海堂、韓曉飛、康金哲、馮莎莎。

I

DB1304/T516—2025

噬菌體及其裂解酶防控禽氣源性病原菌感染技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了噬菌體及其裂解酶防控禽氣源性病原菌感染技術的術語和定義、空舍消毒、引種補欄、

飼養(yǎng)管理。

本文件適用于規(guī)模化養(yǎng)禽場氣源性病原菌感染的防控。豬、羊、兔等其它舍飼動物養(yǎng)殖場也可參照

執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB13078飼料衛(wèi)生標準

GB/T25886養(yǎng)雞場帶雞消毒技術要求

NY5027無公告食品畜禽飲用水質

NY/T388畜禽場環(huán)境質量標準

NY∕T472綠色食品獸藥使用準則

DB13/T6114—2025養(yǎng)雞場飲水線殺菌技術規(guī)程

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

禽氣源性病原菌感染

存在于禽舍空氣的病原菌，通過空氣、飼料等媒介感染禽類呼吸道、消化道等組織器官，進而引起

機體發(fā)生疾病。

3.2

禽舍通風系統(tǒng)

為保證禽舍空氣溫度、濕度、空氣衛(wèi)生和氣流速度等參數(shù)達到畜禽場環(huán)境質量標準的要求，對禽舍

空氣進行集中處理、輸送的所有設備、管道及附屬設施的總稱。

4空舍消毒

用1:600過硫酸氫鉀等消毒劑或火焰噴槍焚燒等方法對禽舍地面和墻面消毒處理，將清洗干凈的飼

養(yǎng)禽類所需物品移到舍內，然后再按空氣熏蒸劑說明對禽舍環(huán)境進行熏蒸消毒，消毒過程中，封閉雞舍，

舍內溫度保持在20℃以上，相對濕度達到60%～80%。

5引種補欄

從具備種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營資格的場區(qū)引進禽類，引進的禽類應有產(chǎn)地動物檢疫合格證明。對即將進場

（舍）的禽類需進行檢疫，參照家禽產(chǎn)地檢疫規(guī)程農(nóng)醫(yī)發(fā)[2010]20號執(zhí)行。

1

DB1304/T516—2025

6飼養(yǎng)管理

6.1禽舍空氣質量監(jiān)測

根據(jù)養(yǎng)禽場空氣污染和禽發(fā)病狀況，確定禽舍空氣環(huán)境質量監(jiān)測頻度。參照NY/T388檢測方法要求，

采集禽舍內空氣樣品并進行檢測，禽舍空氣細菌濃度、總懸浮微粒(TSP)、PM10、硫化氫、氨氣等空氣

環(huán)境質量指標符合NY/T388要求；否則，調控禽舍通風系統(tǒng)加強禽舍通風，同時增加消毒次數(shù)。

6.2禽舍環(huán)境消毒

參照GB/T25886進行帶禽消毒，利用禽舍噴霧消毒線或消毒設備向禽舍噴灑1×106PFU/ml噬菌體

噬菌體及其0.2mg/ml的裂解酶懸液，每周噴灑噬菌體及其裂解酶懸液、消毒液各1次。利用消毒設備向

禽舍糞便傳送帶、地面噴灑噬菌體及其裂解酶懸液，每周噴灑1-2次；及時更換通風口的空氣凈化過濾

濾膜。禽發(fā)病期間，增加禽舍環(huán)境消毒次數(shù)。

6.3飲水質量

按照DB13/T6114-2025進行禽舍飲水線消毒，每周1次。保證飲生質量達到NY5027畜禽飲用水質

標準要求。

6.4飼料質量

保證飼料質量達到GB13078飼料衛(wèi)生標準要求。

6.5人員和物品管理

禁止無關人員進入禽舍，工作人員應經(jīng)消毒后才能進入禽舍，禁止串舍。進入禽舍的所有物品都應

消毒處理，各棟舍之間禁止串用飼養(yǎng)工具、器具。

6.7無害化處理

參照GB16548規(guī)定對病死及病害動物進行無害化處理；及時清理禽舍內糞便，糞便及其污物處理按

NY/T1168規(guī)定執(zhí)行。

6.8禽氣源性細菌疾病的防治

6.9禽氣源性細菌疾病的預防

向禽飼料中添加0.1%濃度為3×1010PFU/g噬菌體微囊和0.5‰裂解酶脂質體，每月2次。禽類疾病

發(fā)生流行期間，增加消毒次數(shù)和飼喂噬菌體微囊和裂解酶脂質體次數(shù)。也可參照NY∕T472要求，進行

預防性投喂獸藥。

6.10禽氣源性細菌疾病的治療

參照NY∕T472要求，結合藥敏試驗投喂獸藥。向飼料中添加3×1010PFU/g噬菌體微囊和0.5‰裂解

酶脂質體。

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DB1304/T516—2025

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

噬菌體混懸液的制備方法

A.1采樣

按照GB/T5750從養(yǎng)雞場飲水管道采集水樣。

A.2分離鑒定

A.2.1細菌分離鑒定

按照GB4789.3、GB4789.4、GB4789.5分離鑒定沙門氏菌、大腸桿菌和志賀氏菌；按傳統(tǒng)細菌分

離純化方法和16srRNA鑒定銅綠假單胞菌、空腸彎曲菌。

A.2.2噬菌體分離鑒定純化

A.2.2.1分離

將鑒定的病原菌作為誘導菌，利用雙層瓊脂平板法培養(yǎng)噬菌體，挑選大小一致噬菌斑。

A.2.2.2形態(tài)鑒定

吸取噬菌體培養(yǎng)液，加至電鏡專用銅網(wǎng)上，用2%醋酸鈾染色，干燥，通過透射電子顯微鏡觀察噬

菌體超微結構。

A.2.2.3純化

利用雙層瓊脂平板法對具有典型形態(tài)特征的噬菌體進行純化。

A.3混懸液制備

將上述純化后的大腸桿菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌、空腸彎曲菌和志賀氏菌噬菌體按照1:1:1:1:1

的比例，制備成噬菌體混懸液，效價應不低于109PFU/ml。

3

DB1304/T516—2025

B

B

附錄B

（規(guī)范性）

噬菌體裂解酶混懸液的制備方法

B.1噬菌體裂解酶基因鑒定

B.1.1噬菌體全基因組測序

提取噬菌體基因組并測序，對測序原始數(shù)據(jù)進行質控與組裝，采用注釋工具（如RAST、Prokka、

PHANOTATE）預測開放閱讀框（ORFs）。

B.1.2噬菌體裂解酶基因鑒定

通過NCBIBLAST進行同源性比對，利用保守結構域數(shù)據(jù)庫（NCBICDD、Pfam、InterPro）確認裂解

酶功能域。

B.2噬菌體裂解酶表達系統(tǒng)構建

B.2.1噬菌體裂解酶表達質粒構建

根據(jù)噬菌體裂解酶堿基序列設計引物，PCR擴增裂解酶基因，采用限制性內切酶對裂解酶基因及表

達載體進行雙酶切，使用T4DNA連接酶構建重組裂解酶表達質粒。

B.2.2噬菌體裂解酶大腸桿菌表達系統(tǒng)構建

采用熱激法將重組質粒轉化至大腸桿菌表達菌株，涂布于含相應抗性的培養(yǎng)基，篩選陽性表達菌株。

B.3噬菌體裂解酶誘導表達

將陽性菌株接種至含相應抗性的LB培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)至菌液OD600值達0.6，加入終濃度為0.8

mM的IPTG誘導劑，28℃誘導培養(yǎng)10h。

B.4噬菌體裂解酶純化

B.4.1表達菌株超聲破碎

收集誘導后菌液，5000r/min離心5min，菌體沉淀用非變性裂解液洗滌3次，菌體沉淀用非變性裂

解液重懸，采用超聲破碎儀破碎菌體，釋放裂解酶。

B.4.2噬菌體裂解酶純化

超聲后菌液于10000r/min離心5min