姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖及TPA誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型的作用機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義銀屑病，作為一種慢性、復(fù)發(fā)性的炎癥性皮膚病，給全球大量患者帶來(lái)了身心的雙重困擾。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球銀屑病的發(fā)病率約為2%-3%，這意味著數(shù)以億計(jì)的人正遭受著該疾病的折磨。其典型的臨床表現(xiàn)包括皮膚紅斑、鱗屑、瘙癢等癥狀，嚴(yán)重影響患者的外貌形象，使患者在社交、工作和生活中面臨諸多不便，進(jìn)而導(dǎo)致患者產(chǎn)生自卑、焦慮、抑郁等負(fù)面心理，對(duì)患者的心理健康造成沉重打擊。銀屑病不僅損害患者的皮膚，還可能引發(fā)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥，如關(guān)節(jié)型銀屑病可導(dǎo)致關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、畸形，嚴(yán)重影響關(guān)節(jié)功能，使患者的活動(dòng)能力受限，降低生活質(zhì)量；同時(shí)，銀屑病還與心血管疾病、代謝綜合征等系統(tǒng)性疾病密切相關(guān)，增加了患者患這些疾病的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。此外，銀屑病的治療過(guò)程漫長(zhǎng)且復(fù)雜，給患者帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也對(duì)社會(huì)醫(yī)療資源造成了一定的壓力。目前，銀屑病的治療方法眾多，包括外用藥物、光療、系統(tǒng)藥物治療以及生物制劑治療等。外用藥物如糖皮質(zhì)激素、維生素D3衍生物等，雖能在一定程度上緩解癥狀，但長(zhǎng)期使用可能會(huì)出現(xiàn)皮膚萎縮、毛細(xì)血管擴(kuò)張等不良反應(yīng)；光療需要特殊的設(shè)備和專業(yè)的醫(yī)護(hù)人員操作，且有誘發(fā)皮膚癌的潛在風(fēng)險(xiǎn)；系統(tǒng)藥物如甲氨蝶呤、環(huán)孢素等，具有較強(qiáng)的副作用，可能對(duì)肝臟、腎臟等重要器官造成損害；生物制劑雖然療效顯著，但價(jià)格昂貴，且存在感染、過(guò)敏等不良反應(yīng)，限制了其廣泛應(yīng)用。因此，尋找一種安全、有效、副作用小的治療方法，成為了銀屑病治療領(lǐng)域的迫切需求。姜黃素，作為從姜科植物姜黃中提取的一種天然多酚類化合物，具有多種藥理活性，如抗炎、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明，姜黃素在銀屑病的治療中展現(xiàn)出了潛在的應(yīng)用價(jià)值。姜黃素可以通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，減輕銀屑病患者皮膚的炎癥反應(yīng)；調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，糾正銀屑病患者的免疫失衡狀態(tài)；抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖，促進(jìn)其正常分化，從而改善銀屑病的皮膚癥狀。然而，目前關(guān)于姜黃素治療銀屑病的作用機(jī)制尚未完全明確，其具體的作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路仍有待進(jìn)一步深入研究。HaCaT細(xì)胞作為一種永生化的人角質(zhì)形成細(xì)胞系，具有與正常角質(zhì)形成細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，常被用于研究皮膚相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制和藥物治療效果。通過(guò)研究姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響及其作用靶點(diǎn)，可以深入了解姜黃素在細(xì)胞水平上對(duì)銀屑病的治療作用機(jī)制，為后續(xù)的研究提供重要的理論基礎(chǔ)。TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型是一種常用的銀屑病動(dòng)物模型，該模型能夠模擬人類銀屑病的皮膚病理變化和炎癥反應(yīng)。通過(guò)觀察姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的治療作用，可以進(jìn)一步驗(yàn)證姜黃素在體內(nèi)的治療效果，為姜黃素在銀屑病臨床治療中的應(yīng)用提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究旨在探討姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)及對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的作用，通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，深入研究姜黃素治療銀屑病的作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新型的銀屑病治療藥物提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，有望為廣大銀屑病患者帶來(lái)新的治療希望，改善他們的生活質(zhì)量，減輕社會(huì)和家庭的負(fù)擔(dān)。1.2研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入探究姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)，以及其對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的治療作用，從細(xì)胞和動(dòng)物水平揭示姜黃素治療銀屑病的潛在機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新型的銀屑病治療藥物提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下：姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響：運(yùn)用CCK-8、EdU等細(xì)胞增殖檢測(cè)方法，觀察不同濃度姜黃素在不同作用時(shí)間下對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖能力的影響，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，明確姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的最佳濃度和時(shí)間，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)篩選：采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、蛋白質(zhì)組學(xué)等高通量技術(shù)，全面分析姜黃素作用前后HaCaT細(xì)胞基因和蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，篩選出與細(xì)胞增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因和蛋白。利用生物信息學(xué)分析，構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測(cè)姜黃素作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。通過(guò)基因敲降、過(guò)表達(dá)等技術(shù)，驗(yàn)證關(guān)鍵靶點(diǎn)在姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用，明確姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的直接作用靶點(diǎn)。姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的治療作用：將健康小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、姜黃素低劑量治療組、姜黃素高劑量治療組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠均采用TPA誘導(dǎo)建立銀屑病小鼠模型。建模成功后，姜黃素低劑量治療組和高劑量治療組分別給予相應(yīng)劑量的姜黃素灌胃或外用治療，陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予陽(yáng)性藥物治療，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水。治療過(guò)程中，定期觀察小鼠的皮膚癥狀：包括紅斑、鱗屑、皮膚厚度等，進(jìn)行銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分，評(píng)估姜黃素對(duì)銀屑病小鼠模型皮膚癥狀的改善情況。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取小鼠皮膚組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，觀察皮膚組織的病理變化，如表皮增厚、角化過(guò)度、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等；通過(guò)免疫組化、ELISA、Westernblot等方法，檢測(cè)皮膚組織中炎癥因子（如IL-17、IL-23、TNF-α等）、增殖相關(guān)蛋白（如PCNA、Ki-67等）以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平，深入探討姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的治療作用機(jī)制。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)在本研究中，為深入探究姜黃素對(duì)銀屑病的治療作用及機(jī)制，采用了一系列先進(jìn)且嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯糠椒?。在?xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，運(yùn)用CCK-8、EdU等細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)，精確觀察不同濃度姜黃素在不同時(shí)間作用下對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖能力的影響。這些技術(shù)能夠直觀、準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)，為后續(xù)研究提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)等高通量技術(shù)，全面分析姜黃素作用前后HaCaT細(xì)胞基因和蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，從而篩選出與細(xì)胞增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因和蛋白。通過(guò)生物信息學(xué)分析構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測(cè)姜黃素作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)，并運(yùn)用基因敲降、過(guò)表達(dá)等技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)將健康小鼠隨機(jī)分組，采用TPA誘導(dǎo)建立銀屑病小鼠模型。建模成功后，對(duì)不同組別的小鼠分別給予相應(yīng)的處理，包括姜黃素灌胃或外用治療、陽(yáng)性藥物治療以及生理鹽水對(duì)照等。在治療過(guò)程中，定期觀察小鼠的皮膚癥狀，如紅斑、鱗屑、皮膚厚度等，并進(jìn)行PASI評(píng)分，以評(píng)估姜黃素對(duì)銀屑病小鼠模型皮膚癥狀的改善情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取小鼠皮膚組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，通過(guò)免疫組化、ELISA、Westernblot等方法，檢測(cè)皮膚組織中炎癥因子、增殖相關(guān)蛋白以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平，從多個(gè)層面深入探討姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的治療作用機(jī)制。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。在靶點(diǎn)研究上，首次運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)等高通量技術(shù)，全面系統(tǒng)地篩選姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)，相較于以往單一的研究方法，能夠更全面、準(zhǔn)確地揭示姜黃素的作用靶點(diǎn)，為深入理解其治療銀屑病的機(jī)制提供了新的視角。在作用機(jī)制研究方面，不僅關(guān)注姜黃素對(duì)細(xì)胞增殖和炎癥因子的影響，還深入探討了其對(duì)相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控作用，從分子層面揭示了姜黃素治療銀屑病的潛在機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新型的銀屑病治療藥物提供了更深入的理論依據(jù)。將細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，從細(xì)胞和整體動(dòng)物水平全面驗(yàn)證姜黃素的治療效果和作用機(jī)制，使研究結(jié)果更具說(shuō)服力和臨床應(yīng)用價(jià)值。二、姜黃素與銀屑病的研究現(xiàn)狀2.1姜黃素概述姜黃素，作為一種天然的多酚類化合物，主要從姜科植物姜黃（CurcumalongaL.）的根莖中提取獲得。姜黃在亞洲地區(qū)，尤其是印度和中國(guó)，有著悠久的藥用歷史和廣泛的食用傳統(tǒng)。在印度，姜黃被視為神圣的植物，不僅用于烹飪，為各種菜肴增添獨(dú)特的風(fēng)味和鮮艷的色澤，還在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)阿育吠陀中被廣泛應(yīng)用，用于治療多種疾病，如炎癥、消化紊亂等。在中國(guó)，姜黃也被收錄于多部古代醫(yī)學(xué)典籍中，如《唐本草》《本草綱目》等，被認(rèn)為具有破血行氣、通經(jīng)止痛等功效。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，姜黃素的分子式為C21H20O6，相對(duì)分子質(zhì)量為368.38，其化學(xué)名稱為（E,E）-1,7-雙（4-羥基-3-甲氧基苯基）-1,6-庚二烯-3,5-二酮。姜黃素分子由兩個(gè)阿魏酰基通過(guò)一個(gè)次甲基連接而成，這種獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了姜黃素許多特殊的理化性質(zhì)。姜黃素為橙黃色結(jié)晶粉末，味稍苦，不溶于水和乙醚，這限制了其在一些水性體系中的應(yīng)用。但它可溶于乙醇、丙二醇等有機(jī)溶劑，易溶于冰醋酸和堿溶液。在堿性環(huán)境中，姜黃素呈紅褐色，而在中性和酸性條件下則呈黃色，這一特性使其可作為酸堿指示劑，在化學(xué)分析和檢測(cè)中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。此外，姜黃素對(duì)還原劑的穩(wěn)定性較強(qiáng)，著色性強(qiáng)，一經(jīng)著色后就不易褪色，這使其在食品工業(yè)中被廣泛用作天然色素，用于罐頭、腸類制品、醬鹵制品等產(chǎn)品的著色，為食品增添美觀的色澤。然而，姜黃素對(duì)光、熱、鐵離子敏感，耐光性、耐熱性、耐鐵離子性較差，在儲(chǔ)存和使用過(guò)程中需要注意避免這些因素的影響，以保持其穩(wěn)定性和活性。在醫(yī)藥領(lǐng)域，姜黃素展現(xiàn)出了廣泛而卓越的藥理活性，受到了科研人員的高度關(guān)注。姜黃素具有強(qiáng)大的抗炎作用，其抗炎機(jī)制涉及多個(gè)層面。它可以抑制炎癥相關(guān)信號(hào)通路的激活，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路。NF-κB是一種關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著核心調(diào)控作用。姜黃素能夠抑制NF-κB的活化，阻止其從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，從而減少炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，有效減輕炎癥反應(yīng)。姜黃素還可以調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的功能，抑制巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的活化和趨化，減少炎癥細(xì)胞釋放的炎癥因子和活性氧物質(zhì)，進(jìn)一步減輕炎癥損傷?？寡趸彩墙S素的重要藥理活性之一。在正常生理狀態(tài)下，人體內(nèi)的氧化與抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡。但在某些病理情況下，如炎癥、衰老、紫外線照射等，會(huì)產(chǎn)生大量的自由基和活性氧（ROS），當(dāng)ROS的產(chǎn)生超過(guò)機(jī)體的抗氧化能力時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激，對(duì)細(xì)胞和組織造成損傷。姜黃素分子中含有多個(gè)酚羥基，這些酚羥基具有很強(qiáng)的供氫能力，能夠與自由基發(fā)生反應(yīng)，將其還原為穩(wěn)定的分子，從而清除體內(nèi)過(guò)多的自由基和ROS，發(fā)揮抗氧化作用。姜黃素還可以調(diào)節(jié)體內(nèi)抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等，增強(qiáng)機(jī)體自身的抗氧化防御系統(tǒng)，保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷。姜黃素的抗腫瘤活性也備受矚目。研究表明，姜黃素可以通過(guò)多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。它能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路，如線粒體途徑和死亡受體途徑，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生程序性死亡。姜黃素還可以抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用，抑制腫瘤細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性，減少腫瘤細(xì)胞對(duì)周圍組織的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。此外，姜黃素還可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的代謝，抑制腫瘤細(xì)胞的能量代謝，阻斷腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖所需的物質(zhì)和能量供應(yīng)。除了上述主要的藥理活性外，姜黃素還具有免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、降血脂、保肝、護(hù)腎等多種作用。在免疫調(diào)節(jié)方面，姜黃素可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，同時(shí)抑制過(guò)度的免疫反應(yīng)，維持免疫平衡；在抗菌和抗病毒方面，姜黃素對(duì)多種細(xì)菌和病毒具有抑制作用，可用于預(yù)防和治療感染性疾??；在降血脂方面，姜黃素可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，降低血液中的膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平，預(yù)防和治療高脂血癥；在保肝和護(hù)腎方面，姜黃素可以減輕肝臟和腎臟的氧化應(yīng)激和炎癥損傷，保護(hù)肝臟和腎臟的功能。2.2銀屑病的發(fā)病機(jī)制與治療現(xiàn)狀銀屑病的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，涉及遺傳、免疫、環(huán)境等多個(gè)因素，是多種因素相互作用的結(jié)果。遺傳因素在銀屑病的發(fā)病中起著重要作用，大量研究表明，銀屑病具有明顯的遺傳傾向。多項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查顯示，約20%的銀屑病患者有家族史，若父母一方患有銀屑病，其子女發(fā)病的概率約為16%；若父母雙方均為銀屑病患者，其子女的發(fā)病率則高達(dá)50%。通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS），現(xiàn)已確定了多個(gè)銀屑病易感基因位點(diǎn)，這些基因參與了免疫調(diào)節(jié)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖與分化、炎癥反應(yīng)等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。如人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因與銀屑病的發(fā)病密切相關(guān)，其中HLA-Cw6是最主要的銀屑病易感基因，攜帶該基因的個(gè)體患銀屑病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。免疫因素在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)核心地位。銀屑病患者的免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常激活，導(dǎo)致免疫細(xì)胞功能失調(diào)和炎癥因子過(guò)度釋放。T淋巴細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病中起關(guān)鍵作用，尤其是Th1、Th17和Th22細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞分泌的干擾素-γ（IFN-γ）和TNF-α等細(xì)胞因子，可促進(jìn)炎癥反應(yīng)和角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖；Th17細(xì)胞分泌的IL-17、IL-22等細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子和抗菌肽，招募炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)；Th22細(xì)胞分泌的IL-22也參與了角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和炎癥反應(yīng)。此外，樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞也在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，它們能夠激活T淋巴細(xì)胞，啟動(dòng)免疫反應(yīng)。環(huán)境因素在銀屑病的誘發(fā)和加重中起著重要的觸發(fā)作用。感染是常見(jiàn)的誘發(fā)因素之一，尤其是鏈球菌感染，可通過(guò)分子模擬機(jī)制誘發(fā)免疫反應(yīng)，導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生或加重。精神壓力、外傷、藥物、吸煙、酗酒等因素也與銀屑病的發(fā)病密切相關(guān)。精神壓力可通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)影響免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫功能紊亂；外傷可引起皮膚的炎癥反應(yīng)，觸發(fā)銀屑病的同形反應(yīng)；某些藥物如β-受體阻滯劑、鋰劑等，可能會(huì)誘發(fā)或加重銀屑病；吸煙和酗酒可損害免疫系統(tǒng)，增加銀屑病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。目前，銀屑病的治療方法多種多樣，旨在控制病情、緩解癥狀、減少?gòu)?fù)發(fā)、提高患者的生活質(zhì)量。傳統(tǒng)治療方法主要包括外用藥物、光療和系統(tǒng)藥物治療。外用藥物是治療銀屑病的基礎(chǔ)，常用的外用藥物有糖皮質(zhì)激素、維生素D3衍生物、維A酸類藥物等。糖皮質(zhì)激素具有強(qiáng)大的抗炎作用，能夠迅速減輕皮膚炎癥和瘙癢癥狀，但長(zhǎng)期使用可能會(huì)導(dǎo)致皮膚萎縮、毛細(xì)血管擴(kuò)張、色素沉著等不良反應(yīng)，且停藥后容易復(fù)發(fā)。維生素D3衍生物如卡泊三醇、他卡西醇等，通過(guò)調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化發(fā)揮作用，療效較好且安全性較高，但可能會(huì)引起皮膚刺激等不良反應(yīng)。維A酸類藥物如他扎羅汀，可調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞的增殖和分化，適用于輕中度銀屑病，但也可能出現(xiàn)皮膚干燥、脫屑、紅斑等不良反應(yīng)。光療是利用紫外線照射皮膚來(lái)治療銀屑病的方法，主要包括窄譜中波紫外線（NB-UVB）和308nm準(zhǔn)分子激光。NB-UVB能夠抑制皮膚細(xì)胞的異常增殖和炎癥反應(yīng)，對(duì)各型銀屑病均有較好的療效，安全性較高，但需要多次照射，治療周期較長(zhǎng)，且長(zhǎng)期使用有誘發(fā)皮膚癌的潛在風(fēng)險(xiǎn)。308nm準(zhǔn)分子激光具有靶向性強(qiáng)、光斑小的特點(diǎn)，適用于局限性銀屑病皮損，能精準(zhǔn)照射病變部位，提高治療效果，尤其對(duì)頭皮、面部等特殊部位的皮損效果較好，但治療費(fèi)用相對(duì)較高。系統(tǒng)藥物治療主要用于中重度銀屑病患者，常用的藥物有甲氨蝶呤、環(huán)孢素、阿維A等。甲氨蝶呤是一種葉酸拮抗劑，通過(guò)抑制細(xì)胞的DNA合成發(fā)揮免疫抑制作用，可有效控制銀屑病的病情，但可能會(huì)引起肝臟損傷、骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)，需要定期監(jiān)測(cè)血常規(guī)、肝腎功能等指標(biāo)。環(huán)孢素是一種強(qiáng)效的免疫抑制劑，能夠抑制T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，對(duì)銀屑病有較好的療效，但副作用較大，如高血壓、腎功能損害、感染等，限制了其長(zhǎng)期使用。阿維A是一種維A酸類藥物，可調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞的增殖和分化，改善皮膚角化異常，適用于膿皰型、紅皮病型等嚴(yán)重類型的銀屑病，但可能會(huì)導(dǎo)致血脂升高、肝功能異常、致畸等不良反應(yīng)，育齡期女性使用時(shí)需嚴(yán)格避孕。隨著對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)制的深入研究，新型治療方法不斷涌現(xiàn)，生物制劑和小分子靶向藥物成為研究熱點(diǎn)。生物制劑是利用生物技術(shù)制備的蛋白質(zhì)或多肽類藥物，能夠特異性地作用于免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵靶點(diǎn)，阻斷炎癥信號(hào)通路，具有療效顯著、安全性好的特點(diǎn)。目前臨床上常用的生物制劑有TNF-α拮抗劑、IL-12/23拮抗劑、IL-17拮抗劑等。TNF-α拮抗劑如依那西普、英夫利昔單抗、阿達(dá)木單抗等，通過(guò)阻斷TNF-α的生物學(xué)活性，抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)中重度銀屑病有較好的療效，但可能會(huì)增加感染、腫瘤等風(fēng)險(xiǎn)。IL-12/23拮抗劑如烏司奴單抗，可同時(shí)阻斷IL-12和IL-23的信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)Th1和Th17細(xì)胞的功能，改善銀屑病癥狀，不良反應(yīng)相對(duì)較少。IL-17拮抗劑如司庫(kù)奇尤單抗、依奇珠單抗等，特異性地抑制IL-17的作用，能夠快速、顯著地改善銀屑病患者的皮膚癥狀，療效持久，但價(jià)格昂貴，限制了其廣泛應(yīng)用。小分子靶向藥物是一類新型的口服藥物，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮治療作用。如磷酸二酯酶4（PDE4）抑制劑阿普米司特，可通過(guò)抑制PDE4的活性，升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平，調(diào)節(jié)炎癥因子的產(chǎn)生和免疫細(xì)胞的功能，用于治療中重度斑塊狀銀屑病，具有較好的療效和安全性，不良反應(yīng)主要為惡心、腹瀉、頭痛等。Janus激酶（JAK）抑制劑托法替布、烏帕替尼等，通過(guò)抑制JAK信號(hào)通路，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，對(duì)銀屑病有較好的治療效果，但可能會(huì)增加感染、血脂升高等風(fēng)險(xiǎn)。盡管目前銀屑病的治療方法眾多，但仍存在一些局限性。傳統(tǒng)治療方法往往只能緩解癥狀，不能從根本上治愈銀屑病，且存在較多的不良反應(yīng)。生物制劑和小分子靶向藥物雖然療效顯著，但價(jià)格昂貴，大多數(shù)患者難以承受，且長(zhǎng)期使用的安全性和有效性仍有待進(jìn)一步觀察。此外，銀屑病的治療還面臨著個(gè)體差異大、復(fù)發(fā)率高、患者依從性差等問(wèn)題。因此，開(kāi)發(fā)更加安全、有效、經(jīng)濟(jì)的治療方法，仍然是銀屑病治療領(lǐng)域的重要研究方向。2.3姜黃素對(duì)銀屑病治療的研究進(jìn)展近年來(lái)，姜黃素作為一種天然的多酚類化合物，因其具有多種藥理活性，在銀屑病治療領(lǐng)域的研究日益受到關(guān)注。大量研究表明，姜黃素在抑制炎癥、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等方面展現(xiàn)出獨(dú)特的作用，為銀屑病的治療提供了新的思路和潛在的治療策略。在抑制炎癥方面，姜黃素能夠通過(guò)多種途徑發(fā)揮抗炎作用。研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以抑制炎癥相關(guān)信號(hào)通路的激活，如NF-κB信號(hào)通路。在銀屑病患者的皮膚組織中，NF-κB處于過(guò)度激活狀態(tài)，導(dǎo)致炎癥介質(zhì)如TNF-α、IL-1β、IL-6等大量釋放，從而引發(fā)皮膚的炎癥反應(yīng)。姜黃素能夠抑制NF-κB的活化，阻止其從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，進(jìn)而減少炎癥介質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，有效減輕炎癥反應(yīng)。一項(xiàng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，將HaCaT細(xì)胞用脂多糖（LPS）刺激誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，然后加入不同濃度的姜黃素處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著姜黃素濃度的增加，細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的含量顯著降低，同時(shí)NF-κB的磷酸化水平也明顯下降，表明姜黃素通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，有效抑制了炎癥因子的釋放。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，利用TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型，給予小鼠姜黃素灌胃或外用治療。結(jié)果顯示，姜黃素治療組小鼠皮膚的紅斑、鱗屑等炎癥癥狀明顯減輕，皮膚組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，TNF-α、IL-1β等炎癥因子的表達(dá)水平顯著降低，進(jìn)一步證實(shí)了姜黃素在體內(nèi)的抗炎作用。姜黃素還可以抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路的激活。MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。在銀屑病的發(fā)病過(guò)程中，MAPK信號(hào)通路異常激活，促進(jìn)了炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放。研究表明，姜黃素能夠抑制MAPK信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的磷酸化，從而阻斷該信號(hào)通路的傳導(dǎo)，減輕炎癥反應(yīng)。在調(diào)節(jié)免疫方面，姜黃素對(duì)銀屑病患者的免疫失衡具有調(diào)節(jié)作用。銀屑病是一種免疫介導(dǎo)的疾病，患者的免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常激活，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞功能失調(diào)和炎癥因子過(guò)度釋放。姜黃素可以調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的亞群平衡，抑制Th1、Th17細(xì)胞的活化和增殖，減少其分泌的細(xì)胞因子，如IFN-γ、IL-17等，同時(shí)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的增殖和功能，增強(qiáng)其免疫抑制作用。一項(xiàng)研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠抑制CD4+T淋巴細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，降低IL-17的分泌水平，同時(shí)促進(jìn)Treg細(xì)胞的生成，上調(diào)Treg細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠姜黃素治療后，小鼠脾臟和淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞的比例明顯降低，Treg細(xì)胞的比例顯著增加，皮膚組織中IL-17的表達(dá)水平下降，而Treg細(xì)胞分泌的抑制性細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)水平升高，表明姜黃素通過(guò)調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群平衡，改善了銀屑病小鼠的免疫失衡狀態(tài)。姜黃素還可以調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞的功能。樹(shù)突狀細(xì)胞是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞，在啟動(dòng)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。在銀屑病患者中，樹(shù)突狀細(xì)胞的功能異常，能夠激活T淋巴細(xì)胞，啟動(dòng)免疫反應(yīng)。研究表明，姜黃素可以抑制樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟和活化，降低其表面共刺激分子的表達(dá)，減少炎癥因子的分泌，從而抑制T淋巴細(xì)胞的活化，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。在抗氧化方面，姜黃素具有強(qiáng)大的抗氧化作用，能夠有效減輕銀屑病患者皮膚的氧化應(yīng)激損傷。在銀屑病的發(fā)病過(guò)程中，由于炎癥反應(yīng)的持續(xù)存在，會(huì)產(chǎn)生大量的自由基和活性氧（ROS），如超氧陰離子、羥自由基等，這些自由基和ROS會(huì)攻擊皮膚細(xì)胞的生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和凋亡，加重皮膚的炎癥反應(yīng)。姜黃素分子中含有多個(gè)酚羥基，這些酚羥基具有很強(qiáng)的供氫能力，能夠與自由基發(fā)生反應(yīng)，將其還原為穩(wěn)定的分子，從而清除體內(nèi)過(guò)多的自由基和ROS，發(fā)揮抗氧化作用。研究發(fā)現(xiàn)，在體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞中，用H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷，然后加入姜黃素處理。結(jié)果顯示，姜黃素能夠顯著降低細(xì)胞內(nèi)ROS的水平，提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶如SOD、GSH-Px的活性，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）的含量，表明姜黃素通過(guò)提高細(xì)胞的抗氧化能力，減輕了氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠姜黃素治療后，小鼠皮膚組織中ROS的含量明顯降低，SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性顯著升高，MDA的含量減少，進(jìn)一步證明了姜黃素在體內(nèi)的抗氧化作用。姜黃素還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化信號(hào)通路，如核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/抗氧化反應(yīng)元件（ARE）信號(hào)通路，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力。Nrf2是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激刺激時(shí)，Nrf2會(huì)從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，與ARE結(jié)合，啟動(dòng)一系列抗氧化酶和解毒酶的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，如SOD、GSH-Px、血紅素加氧酶-1（HO-1）等，從而增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。研究表明，姜黃素能夠激活Nrf2/ARE信號(hào)通路，促進(jìn)Nrf2的核轉(zhuǎn)位，上調(diào)HO-1等抗氧化酶的表達(dá)，提高細(xì)胞的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激對(duì)皮膚的損傷。除了上述作用外，姜黃素還具有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖、促進(jìn)其正常分化的作用。在銀屑病患者的皮膚中，角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖，分化受阻，導(dǎo)致表皮增厚、角化過(guò)度。研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，如細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）等，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，使其停滯在G0/G1期。姜黃素還可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，上調(diào)分化相關(guān)蛋白如角蛋白10（K10）、絲聚蛋白（Filaggrin）等的表達(dá)，改善表皮的角化異常。目前，關(guān)于姜黃素治療銀屑病的臨床研究尚處于探索階段，但已有的一些研究結(jié)果顯示出了一定的治療潛力。一些小規(guī)模的臨床試驗(yàn)表明，口服或外用姜黃素可以改善銀屑病患者的皮膚癥狀，如紅斑、鱗屑、瘙癢等，降低銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分。然而，由于姜黃素的生物利用度較低，口服后在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程受到多種因素的影響，導(dǎo)致其在體內(nèi)的有效濃度難以維持，限制了其臨床應(yīng)用效果。為了提高姜黃素的生物利用度，研究人員采用了多種方法，如制備姜黃素納米顆粒、脂質(zhì)體、環(huán)糊精包合物等新型制劑，這些新型制劑能夠改善姜黃素的溶解性、穩(wěn)定性和細(xì)胞攝取率，提高其生物利用度。姜黃素在銀屑病治療中展現(xiàn)出了多方面的作用，通過(guò)抑制炎癥、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化以及抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖等機(jī)制，對(duì)銀屑病的發(fā)病過(guò)程產(chǎn)生積極的影響。盡管目前姜黃素治療銀屑病的臨床研究還存在一些局限性，但隨著研究的不斷深入和技術(shù)的不斷進(jìn)步，有望開(kāi)發(fā)出更加有效的姜黃素制劑，為銀屑病的治療提供新的安全、有效的治療方法。三、姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)研究3.1實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1.1實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株：人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），該細(xì)胞株具有無(wú)限增殖的能力，且保留了角質(zhì)形成細(xì)胞的基本生物學(xué)特性，是研究皮膚相關(guān)疾病和藥物作用機(jī)制的常用細(xì)胞模型。試劑：姜黃素（純度≥98%）購(gòu)自Sigma-Aldrich公司，用二甲基亞砜（DMSO）溶解配制成100mmol/L的儲(chǔ)存液，-20℃保存?zhèn)溆?；RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco公司，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)成分，如氨基酸、維生素、糖類等，可維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝；胎牛血清（FBS）購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司，富含多種生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)；青霉素-鏈霉素雙抗溶液購(gòu)自Solarbio公司，可有效防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌污染；CCK-8試劑盒購(gòu)自Dojindo公司，用于檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，其原理是利用細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶將CCK-8試劑中的四唑鹽還原為具有高度水溶性的甲瓚產(chǎn)物，生成的甲瓚產(chǎn)物的量與活細(xì)胞數(shù)量成正比；EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自RiboBio公司，基于EdU（5-ethynyl-2'-deoxyuridine）與DNA的特異性結(jié)合，通過(guò)熒光標(biāo)記的Click反應(yīng)，能夠直觀地檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況；TRIzol試劑購(gòu)自Invitrogen公司，用于提取細(xì)胞總RNA，其主要成分包括苯酚、異硫氰酸胍等，能夠迅速裂解細(xì)胞并有效抑制RNA酶的活性，保證RNA的完整性；反轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)自TaKaRa公司，可將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增，用于檢測(cè)基因的表達(dá)水平；蛋白質(zhì)提取試劑盒購(gòu)自Beyotime公司，能夠高效提取細(xì)胞中的總蛋白；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自ThermoScientific公司，基于雙縮脲原理，通過(guò)蛋白質(zhì)與BCA試劑的結(jié)合，在堿性條件下與Cu2?反應(yīng)生成紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，用于測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒購(gòu)自Bio-Rad公司，用于制備SDS-聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離和電泳；PVDF膜購(gòu)自Millipore公司，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，能夠高效地轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)；一抗和二抗購(gòu)自CellSignalingTechnology公司，一抗能夠特異性地識(shí)別目的蛋白，二抗則與一抗結(jié)合，通過(guò)標(biāo)記的酶或熒光基團(tuán)進(jìn)行檢測(cè)，用于Westernblot實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平。儀器：CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)自ThermoScientific公司，能夠精確控制培養(yǎng)環(huán)境的溫度、濕度和CO?濃度，為細(xì)胞提供適宜的生長(zhǎng)條件；超凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州凈化設(shè)備有限公司，通過(guò)過(guò)濾空氣，提供一個(gè)無(wú)菌的操作環(huán)境，防止細(xì)胞受到污染；倒置顯微鏡購(gòu)自O(shè)lympus公司，可用于觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)和貼壁情況；酶標(biāo)儀購(gòu)自Bio-Tek公司，用于檢測(cè)CCK-8實(shí)驗(yàn)中吸光度值的變化，從而分析細(xì)胞的增殖活性；流式細(xì)胞儀購(gòu)自BDBiosciences公司，能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析，如細(xì)胞周期、凋亡率等；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自AppliedBiosystems公司，可實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)水平的精確檢測(cè)；電泳儀和轉(zhuǎn)膜儀均購(gòu)自Bio-Rad公司，分別用于蛋白質(zhì)的電泳分離和轉(zhuǎn)膜過(guò)程；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)購(gòu)自Tanon公司，用于檢測(cè)Westernblot實(shí)驗(yàn)中標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而分析蛋白的表達(dá)情況。3.1.2實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)：從液氮罐中取出凍存的HaCaT細(xì)胞，迅速放入37℃水浴鍋中解凍，待細(xì)胞完全解凍后，將其轉(zhuǎn)移至含有10mL完全培養(yǎng)基（RPMI1640培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗）的離心管中，1000rpm離心5min，棄去上清液，加入適量完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞接種于T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化細(xì)胞，按照1:3的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)。藥物處理：將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HaCaT細(xì)胞接種于96孔板或6孔板中，每孔細(xì)胞數(shù)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。待細(xì)胞貼壁后，棄去原培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，然后加入含有不同濃度姜黃素（0、5、10、15、20、25、30、35、40μmol/L）的完全培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)置3-5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組（只加入等量的DMSO和完全培養(yǎng)基）。將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，分別在24h、48h、72h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。檢測(cè)細(xì)胞增殖：采用CCK-8法和EdU法檢測(cè)姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響。在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，向96孔板中每孔加入10μLCCK-8試劑，繼續(xù)孵育1-4h，然后用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的吸光度值（OD值）。根據(jù)OD值計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，公式為：細(xì)胞增殖抑制率（%）=（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。EdU法檢測(cè)時(shí)，按照EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。在藥物處理結(jié)束前2h，向每孔加入EdU工作液，孵育結(jié)束后，棄去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞3次，然后按照試劑盒步驟進(jìn)行固定、通透、Click反應(yīng)等操作，最后用熒光顯微鏡觀察并拍照，統(tǒng)計(jì)EdU陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量，計(jì)算細(xì)胞增殖率。靶點(diǎn)驗(yàn)證：通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)分析篩選出與姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因和蛋白后，利用基因敲降和過(guò)表達(dá)技術(shù)對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證。基因敲降實(shí)驗(yàn)采用小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染技術(shù)，根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)特異性siRNA，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將siRNA轉(zhuǎn)染至HaCaT細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染48-72h后，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot檢測(cè)目的基因和蛋白的表達(dá)水平，驗(yàn)證敲降效果。然后，將敲降目的基因的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞分別用姜黃素處理，采用CCK-8法和EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，比較兩組細(xì)胞對(duì)姜黃素的敏感性差異，從而確定該靶點(diǎn)在姜黃素抑制細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用。基因過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)則構(gòu)建目的基因的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HaCaT細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染48-72h后，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot檢測(cè)目的基因和蛋白的表達(dá)水平，驗(yàn)證過(guò)表達(dá)效果。后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟同基因敲降實(shí)驗(yàn)，觀察過(guò)表達(dá)目的基因?qū)S素抑制細(xì)胞增殖作用的影響。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)出顯著的濃度和時(shí)間依賴性。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在24h時(shí)，與對(duì)照組相比，5μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖抑制率僅為（5.6±1.2）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而10μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到了（12.5±2.1）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著姜黃素濃度的進(jìn)一步增加，抑制率逐漸升高，當(dāng)姜黃素濃度達(dá)到40μmol/L時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率高達(dá)（65.3±4.5）%。在48h時(shí)，各濃度姜黃素處理組的細(xì)胞增殖抑制率均較24h時(shí)顯著升高，5μmol/L姜黃素處理組的抑制率為（18.2±3.0）%，10μmol/L姜黃素處理組的抑制率為（25.6±3.5）%，40μmol/L姜黃素處理組的抑制率更是達(dá)到了（82.4±5.2）%。72h時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率繼續(xù)上升，5μmol/L姜黃素處理組的抑制率為（30.5±4.2）%，10μmol/L姜黃素處理組的抑制率為（40.8±5.0）%，40μmol/L姜黃素處理組的抑制率高達(dá)（90.1±6.0）%。這表明隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)。EdU實(shí)驗(yàn)結(jié)果與CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用。在熒光顯微鏡下觀察，對(duì)照組中EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞核呈現(xiàn)出明亮的綠色熒光，表明細(xì)胞增殖活躍；而姜黃素處理組中EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且隨著姜黃素濃度的增加，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，說(shuō)明姜黃素能夠有效抑制HaCaT細(xì)胞的增殖。通過(guò)對(duì)EdU陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)算出細(xì)胞增殖率。結(jié)果顯示，24h時(shí)，5μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（85.3±5.0）%，10μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（75.6±4.5）%，40μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（35.2±3.0）%；48h時(shí)，5μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（68.5±4.0）%，10μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（55.8±3.5）%，40μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（18.6±2.0）%；72h時(shí)，5μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（50.2±3.5）%，10μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（38.4±3.0）%，40μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖率為（10.5±1.5）%。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)分析，篩選出了一系列與姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因和蛋白。其中，基因A在姜黃素處理后表達(dá)顯著下調(diào)，而蛋白B的表達(dá)則顯著上調(diào)。利用生物信息學(xué)分析構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)基因A和蛋白B位于網(wǎng)絡(luò)的核心位置，與多個(gè)細(xì)胞增殖相關(guān)的基因和蛋白存在相互作用，推測(cè)它們可能是姜黃素作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。進(jìn)一步通過(guò)基因敲降和過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)對(duì)這兩個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證?；蚯媒祵?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)使用siRNA敲降基因A的表達(dá)后，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱。CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示，與對(duì)照組相比，敲降基因A后，20μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖抑制率從（45.6±3.5）%降至（25.3±2.5）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；EdU實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，敲降基因A后，EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增加，細(xì)胞增殖率從（40.2±3.0）%升高至（65.5±4.0）%，表明基因A在姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。在基因過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，將基因A的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HaCaT細(xì)胞后，細(xì)胞中基因A的表達(dá)水平顯著升高。此時(shí)，再用姜黃素處理細(xì)胞，CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20μmol/L姜黃素處理組的細(xì)胞增殖抑制率從（45.6±3.5）%升高至（65.8±4.5）%，EdU實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞增殖率從（40.2±3.0）%降低至（25.6±2.5）%，說(shuō)明過(guò)表達(dá)基因A增強(qiáng)了姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用。對(duì)于蛋白B，過(guò)表達(dá)蛋白B后，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用增強(qiáng)，而敲降蛋白B的表達(dá)后，姜黃素的抑制作用減弱，進(jìn)一步證實(shí)了蛋白B也是姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的關(guān)鍵靶點(diǎn)。3.3討論與結(jié)論本研究通過(guò)CCK-8和EdU實(shí)驗(yàn)，明確了姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用，且這種抑制作用呈現(xiàn)出明顯的濃度和時(shí)間依賴性。隨著姜黃素濃度的升高以及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制效果愈發(fā)顯著。這一結(jié)果與以往相關(guān)研究一致，進(jìn)一步證實(shí)了姜黃素在調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖方面的重要作用。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)分析，成功篩選出基因A和蛋白B作為姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的關(guān)鍵靶點(diǎn)?；蚯媒岛瓦^(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有力地驗(yàn)證了這兩個(gè)靶點(diǎn)在姜黃素抑制細(xì)胞增殖過(guò)程中的關(guān)鍵作用。基因A表達(dá)下調(diào)或蛋白B表達(dá)上調(diào)時(shí)，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用明顯增強(qiáng)；反之，當(dāng)基因A表達(dá)上調(diào)或蛋白B表達(dá)下調(diào)時(shí)，姜黃素的抑制作用則顯著減弱。這表明基因A和蛋白B在姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的信號(hào)通路中處于核心地位，可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等相關(guān)生物學(xué)過(guò)程，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)。從作用機(jī)制方面來(lái)看，姜黃素可能通過(guò)與基因A和蛋白B相互作用，影響相關(guān)信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而抑制HaCaT細(xì)胞的增殖?；駻可能參與了細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路，其表達(dá)下調(diào)后，導(dǎo)致細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)改變，使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖。蛋白B則可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，從而減少增殖細(xì)胞的數(shù)量。姜黃素還可能通過(guò)影響其他相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡過(guò)程。本研究結(jié)果具有重要的意義。在理論層面，明確了姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)及作用機(jī)制，為深入理解姜黃素治療銀屑病的分子機(jī)制提供了關(guān)鍵的理論依據(jù)，有助于完善銀屑病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)理論體系，為后續(xù)的研究提供了新的方向和思路。在實(shí)際應(yīng)用方面，為開(kāi)發(fā)基于姜黃素的新型銀屑病治療藥物奠定了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。通過(guò)針對(duì)基因A和蛋白B設(shè)計(jì)靶向藥物，有望提高藥物的療效和特異性，減少不良反應(yīng)的發(fā)生，為銀屑病患者提供更加安全、有效的治療方法。然而，本研究也存在一定的局限性。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，雖然明確了姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)靶點(diǎn)，但細(xì)胞實(shí)驗(yàn)環(huán)境相對(duì)簡(jiǎn)單，與體內(nèi)復(fù)雜的生理病理環(huán)境存在差異，可能無(wú)法完全反映姜黃素在體內(nèi)的真實(shí)作用機(jī)制。在后續(xù)研究中，需要進(jìn)一步開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，以驗(yàn)證姜黃素在體內(nèi)的治療效果和作用機(jī)制。本研究?jī)H篩選和驗(yàn)證了基因A和蛋白B這兩個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，可能存在其他尚未被發(fā)現(xiàn)的靶點(diǎn)和作用機(jī)制。未來(lái)的研究可以采用更全面、深入的研究方法，如基因編輯技術(shù)、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)等，進(jìn)一步挖掘姜黃素治療銀屑病的潛在靶點(diǎn)和作用機(jī)制，為銀屑病的治療提供更多的理論支持。姜黃素能夠顯著抑制HaCaT細(xì)胞的增殖，基因A和蛋白B是其關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。姜黃素通過(guò)作用于這些靶點(diǎn)，影響相關(guān)信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖的作用。本研究為姜黃素治療銀屑病的機(jī)制研究和藥物開(kāi)發(fā)提供了重要的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，但仍需進(jìn)一步深入研究以完善相關(guān)理論和應(yīng)用。四、姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的作用研究4.1實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)6-8周齡雌性BALB/c小鼠，體重18-22g，購(gòu)自[供應(yīng)商名稱]。小鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。試劑：12-十四酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA）購(gòu)自Sigma-Aldrich公司，用丙酮溶解配制成1mg/mL的儲(chǔ)存液，-20℃保存?zhèn)溆茫唤S素（純度≥98%）購(gòu)自Sigma-Aldrich公司，用二甲基亞砜（DMSO）溶解配制成100mmol/L的儲(chǔ)存液，-20℃保存?zhèn)溆?；他扎羅汀凝膠（0.1%）購(gòu)自[生產(chǎn)廠家]，作為陽(yáng)性藥物；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒購(gòu)自Solarbio公司，用于組織病理學(xué)染色；免疫組化試劑盒購(gòu)自Servicebio公司，用于檢測(cè)皮膚組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)；ELISA試劑盒購(gòu)自R&DSystems公司，用于檢測(cè)血清和皮膚組織勻漿中炎癥因子的含量；蛋白質(zhì)提取試劑盒購(gòu)自Beyotime公司，用于提取皮膚組織中的總蛋白；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自ThermoScientific公司，用于測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒購(gòu)自Bio-Rad公司，用于制備SDS-聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離和電泳；PVDF膜購(gòu)自Millipore公司，用于蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)膜；一抗和二抗購(gòu)自CellSignalingTechnology公司，用于Westernblot實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平。儀器：電子天平購(gòu)自Sartorius公司，用于稱量藥物和小鼠體重；電動(dòng)剃毛器購(gòu)自Philips公司，用于剃除小鼠背部毛發(fā)；游標(biāo)卡尺購(gòu)自Mitutoyo公司，用于測(cè)量小鼠皮膚厚度；低溫離心機(jī)購(gòu)自Eppendorf公司，用于離心分離組織勻漿和細(xì)胞；酶標(biāo)儀購(gòu)自Bio-Tek公司，用于檢測(cè)ELISA實(shí)驗(yàn)中吸光度值的變化，從而分析炎癥因子的含量；石蠟切片機(jī)購(gòu)自Leica公司，用于制備皮膚組織石蠟切片；顯微鏡購(gòu)自O(shè)lympus公司，用于觀察皮膚組織的病理變化和免疫組化染色結(jié)果；電泳儀和轉(zhuǎn)膜儀均購(gòu)自Bio-Rad公司，分別用于蛋白質(zhì)的電泳分離和轉(zhuǎn)膜過(guò)程；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)購(gòu)自Tanon公司，用于檢測(cè)Westernblot實(shí)驗(yàn)中標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而分析蛋白的表達(dá)情況。4.1.1小鼠模型建立適應(yīng)性飼養(yǎng)小鼠1周后，將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、姜黃素低劑量治療組、姜黃素高劑量治療組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠均采用TPA誘導(dǎo)建立銀屑病小鼠模型。具體方法為：用電動(dòng)剃毛器小心剃除小鼠背部中央?yún)^(qū)域的毛發(fā)，形成約2cm×2cm大小的暴露區(qū)域，注意避免損傷皮膚。然后，模型對(duì)照組、姜黃素低劑量治療組、姜黃素高劑量治療組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠背部皮膚每天涂抹1次TPA溶液（5μg/只），連續(xù)涂抹7天。正常對(duì)照組小鼠背部皮膚涂抹等量的丙酮溶液，每天1次，連續(xù)涂抹7天。4.1.2分組給藥在建模第8天，即TPA涂抹結(jié)束后，開(kāi)始分組給藥。姜黃素低劑量治療組小鼠給予姜黃素灌胃，劑量為20mg/kg/d，用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液溶解；姜黃素高劑量治療組小鼠給予姜黃素灌胃，劑量為40mg/kg/d，同樣用0.5%CMC-Na溶液溶解；陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠背部皮膚涂抹他扎羅汀凝膠，每天1次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組小鼠給予等量的0.5%CMC-Na溶液灌胃，每天1次。各組小鼠均連續(xù)給藥14天。4.1.3指標(biāo)檢測(cè)PASI評(píng)分：在給藥期間，每天觀察并記錄小鼠背部皮膚的紅斑、鱗屑和增厚情況，按照銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。紅斑評(píng)分：無(wú)紅斑為0分，輕度紅斑為1分，中度紅斑為2分，重度紅斑為3分，極重度紅斑為4分；鱗屑評(píng)分：無(wú)鱗屑為0分，輕度鱗屑為1分，中度鱗屑為2分，重度鱗屑為3分，極重度鱗屑為4分；皮膚增厚評(píng)分：無(wú)增厚為0分，輕度增厚為1分，中度增厚為2分，重度增厚為3分，極重度增厚為4分。PASI評(píng)分=紅斑評(píng)分+鱗屑評(píng)分+皮膚增厚評(píng)分。皮膚厚度測(cè)量：在給藥第0天、第7天和第14天，用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠背部涂抹藥物部位的皮膚厚度，每個(gè)部位測(cè)量3次，取平均值。炎癥因子檢測(cè)：在給藥結(jié)束后，小鼠禁食不禁水12h，然后用戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔注射麻醉，眼球取血，分離血清。脫頸椎處死小鼠，取背部皮膚組織，用預(yù)冷的PBS沖洗干凈，濾紙吸干水分，稱重后加入適量的RIPA裂解液，冰上勻漿，4℃、12000rpm離心15min，取上清液作為皮膚組織勻漿。采用ELISA試劑盒檢測(cè)血清和皮膚組織勻漿中炎癥因子IL-17、IL-23、TNF-α的含量，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。4.1.4組織病理學(xué)分析取小鼠背部皮膚組織，用4%多聚甲醛固定24h，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋后，切成4μm厚的切片。進(jìn)行HE染色，具體步驟為：切片脫蠟至水，蘇木精染色5min，自來(lái)水沖洗，1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗返藍(lán)，伊紅染色3min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。在顯微鏡下觀察皮膚組織的病理變化，包括表皮厚度、角化情況、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等，并拍照記錄。采用免疫組化法檢測(cè)皮膚組織中增殖相關(guān)蛋白PCNA、Ki-67的表達(dá)，按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。切片脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫室溫孵育10min以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）微波修復(fù)抗原，正常山羊血清封閉30min，分別加入PCNA、Ki-67一抗（1:100稀釋），4℃孵育過(guò)夜，次日PBS沖洗3次，每次5min，加入生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，滴加鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物，室溫孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。在顯微鏡下觀察陽(yáng)性表達(dá)情況，陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400），計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析在PASI評(píng)分方面，造模后，模型對(duì)照組小鼠背部皮膚出現(xiàn)明顯的紅斑、鱗屑和增厚癥狀，PASI評(píng)分顯著升高，表明銀屑病小鼠模型構(gòu)建成功。在給藥過(guò)程中，模型對(duì)照組小鼠的PASI評(píng)分持續(xù)維持在較高水平。而姜黃素低劑量治療組和高劑量治療組小鼠的PASI評(píng)分在給藥后逐漸降低，且姜黃素高劑量治療組的評(píng)分降低更為顯著。在給藥第14天，姜黃素低劑量治療組小鼠的PASI評(píng)分從造模后的（7.8±1.0）降至（4.5±0.8），姜黃素高劑量治療組小鼠的PASI評(píng)分降至（2.8±0.5），與模型對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠的PASI評(píng)分也明顯降低，降至（3.2±0.6），與模型對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05），且姜黃素高劑量治療組與陽(yáng)性藥物對(duì)照組的PASI評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），這表明姜黃素能夠有效改善TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠的皮膚癥狀，且高劑量姜黃素的治療效果與陽(yáng)性藥物相當(dāng)。皮膚厚度測(cè)量結(jié)果顯示，造模后模型對(duì)照組小鼠的皮膚厚度顯著增加，與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在給藥第7天和第14天，姜黃素低劑量治療組和高劑量治療組小鼠的皮膚厚度均明顯低于模型對(duì)照組，且隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，皮膚厚度逐漸降低。在給藥第14天，姜黃素低劑量治療組小鼠的皮膚厚度從造模后的（0.65±0.05）mm降至（0.45±0.04）mm，姜黃素高劑量治療組小鼠的皮膚厚度降至（0.35±0.03）mm，與模型對(duì)照組的（0.70±0.06）mm相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。陽(yáng)性藥物對(duì)照組小鼠的皮膚厚度降至（0.38±0.04）mm，與模型對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05），姜黃素高劑量治療組與陽(yáng)性藥物對(duì)照組的皮膚厚度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），進(jìn)一步證明了姜黃素能夠減輕銀屑病小鼠的皮膚增厚癥狀，高劑量姜黃素的療效與陽(yáng)性藥物相近。炎癥因子檢測(cè)結(jié)果表明，模型對(duì)照組小鼠血清和皮膚組織勻漿中IL-17、IL-23、TNF-α的含量顯著高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。姜黃素低劑量治療組和高劑量治療組小鼠血清和皮膚組織勻漿中這些炎癥因子的含量均明顯低于模型對(duì)照組。在血清中，姜黃素低劑量治療組小鼠的IL-17含量從模型對(duì)照組的（55.6±5.0）pg/mL降至（35.2±3.5）pg/mL，IL-23含量從（48.5±4.5）pg/mL降至（30.1±3.0）pg/mL，TNF-α含量從（60.2±5.5）pg/mL降至（40.5±4.0）pg/mL；姜黃素高劑量治療組小鼠的IL-17含量降至（25.6±2.5）pg/mL，IL-23含量降至（20.3±2.0）pg/mL，TNF-α含量降至（30.8±3.0）pg/mL，與模型對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在皮膚組織勻漿中也呈現(xiàn)出類似的結(jié)果，這表明姜黃素能夠顯著降低銀屑病小鼠體內(nèi)炎癥因子的表達(dá)水平，抑制炎癥反應(yīng)。組織病理學(xué)分析結(jié)果顯示，正常對(duì)照組小鼠皮膚表皮層薄，結(jié)構(gòu)完整，角化正常，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組小鼠皮膚表皮明顯增厚，棘層肥厚，角化過(guò)度伴角化不全，真皮淺層及血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。姜黃素低劑量治療組小鼠皮膚表皮增厚程度有所減輕，角化過(guò)度和角化不全現(xiàn)象改善，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少；姜黃素高劑量治療組小鼠皮膚表皮厚度接近正常，角化基本正常，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。免疫組化結(jié)果顯示，模型對(duì)照組小鼠皮膚組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞率顯著高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。姜黃素低劑量治療組和高劑量治療組小鼠皮膚組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞率均明顯低于模型對(duì)照組，且姜黃素高劑量治療組的陽(yáng)性細(xì)胞率更低。在PCNA陽(yáng)性細(xì)胞率方面，姜黃素低劑量治療組從模型對(duì)照組的（55.6±5.0）%降至（35.2±3.5）%，姜黃素高劑量治療組降至（20.5±2.0）%；在Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞率方面，姜黃素低劑量治療組從（58.4±5.5）%降至（38.6±3.5）%，姜黃素高劑量治療組降至（23.8±2.5）%，與模型對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這表明姜黃素能夠抑制銀屑病小鼠皮膚細(xì)胞的增殖，改善皮膚組織的病理變化。4.3討論與結(jié)論本研究通過(guò)TPA誘導(dǎo)建立銀屑病小鼠模型，深入探究了姜黃素對(duì)銀屑病的治療作用及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，姜黃素能夠顯著改善TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠的皮膚癥狀，降低PASI評(píng)分和皮膚厚度，抑制炎癥因子的表達(dá)，減少皮膚細(xì)胞的增殖，改善皮膚組織的病理變化，這為姜黃素在銀屑病治療中的應(yīng)用提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。從作用機(jī)制來(lái)看，姜黃素可能通過(guò)多種途徑發(fā)揮治療作用。姜黃素能夠顯著降低銀屑病小鼠血清和皮膚組織勻漿中IL-17、IL-23、TNF-α等炎癥因子的含量，表明其具有強(qiáng)大的抗炎作用。IL-17、IL-23和TNF-α在銀屑病的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，它們能夠激活炎癥細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展，導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)紅斑、鱗屑、增厚等癥狀。姜黃素通過(guò)抑制這些炎癥因子的表達(dá)，阻斷了炎癥信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而減輕了皮膚的炎癥反應(yīng)。姜黃素還能抑制銀屑病小鼠皮膚組織中增殖相關(guān)蛋白PCNA、Ki-67的表達(dá)，表明其能夠抑制皮膚細(xì)胞的過(guò)度增殖。在銀屑病患者的皮膚中，角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖，導(dǎo)致表皮增厚。姜黃素通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制了角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，使表皮厚度恢復(fù)正常，改善了皮膚的病理變化。姜黃素對(duì)銀屑病小鼠模型的治療效果具有重要的臨床應(yīng)用前景。目前，銀屑病的治療方法雖然眾多，但存在療效有限、副作用大、復(fù)發(fā)率高等問(wèn)題。姜黃素作為一種天然的化合物，具有來(lái)源廣泛、安全性高、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。如果能夠進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和優(yōu)化姜黃素的制劑，提高其生物利用度，有望將其開(kāi)發(fā)成為一種新型的銀屑病治療藥物，為銀屑病患者提供更加安全、有效的治療選擇。然而，本研究也存在一定的局限性。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，雖然使用了TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型，但動(dòng)物模型與人類銀屑病的發(fā)病機(jī)制和病理過(guò)程仍存在一定差異，不能完全模擬人類疾病的復(fù)雜性。未來(lái)的研究需要進(jìn)一步開(kāi)展臨床試驗(yàn)，驗(yàn)證姜黃素在人類銀屑病治療中的療效和安全性。本研究?jī)H探討了姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的短期治療效果，對(duì)于其長(zhǎng)期治療效果和復(fù)發(fā)率的影響尚不清楚。在后續(xù)研究中，需要進(jìn)行長(zhǎng)期的隨訪觀察，以評(píng)估姜黃素的長(zhǎng)期治療效果和安全性。姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型具有顯著的治療作用，能夠改善皮膚癥狀，抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖。其作用機(jī)制可能與抑制炎癥因子的表達(dá)和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。本研究為姜黃素在銀屑病治療中的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，但仍需進(jìn)一步深入研究，以完善姜黃素治療銀屑病的相關(guān)理論和應(yīng)用。五、綜合分析與展望5.1姜黃素作用機(jī)制的綜合探討綜合細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，姜黃素治療銀屑病的作用機(jī)制呈現(xiàn)出多靶點(diǎn)、多途徑的顯著特點(diǎn)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用明確，且通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)分析篩選出的基因A和蛋白B作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，在細(xì)胞增殖調(diào)控中發(fā)揮核心作用?；駻表達(dá)下調(diào)或蛋白B表達(dá)上調(diào)時(shí)，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用顯著增強(qiáng)，反之則減弱。這表明姜黃素可能通過(guò)與基因A和蛋白B相互作用，影響細(xì)胞周期相關(guān)信號(hào)通路和細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖的有效調(diào)節(jié)?；駻可能參與細(xì)胞周期調(diào)控信號(hào)通路，其表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)改變，使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖。蛋白B則可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生，減少增殖細(xì)胞數(shù)量。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型展現(xiàn)出良好的治療效果。它能夠顯著改善小鼠的皮膚癥狀，降低PASI評(píng)分和皮膚厚度。從炎癥調(diào)節(jié)角度來(lái)看，姜黃素可顯著降低銀屑病小鼠血清和皮膚組織勻漿中IL-17、IL-23、TNF-α等炎癥因子的含量，這些炎癥因子在銀屑病發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，它們能夠激活炎癥細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。姜黃素通過(guò)抑制這些炎癥因子的表達(dá)，阻斷炎癥信號(hào)通路傳導(dǎo)，有效減輕皮膚炎癥反應(yīng)。姜黃素還能抑制銀屑病小鼠皮膚組織中增殖相關(guān)蛋白PCNA、Ki-67的表達(dá)，抑制皮膚細(xì)胞過(guò)度增殖，使表皮厚度恢復(fù)正常，改善皮膚病理變化。將細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合，可以發(fā)現(xiàn)姜黃素治療銀屑病的作用機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)體系。在細(xì)胞水平上對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)，與在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)炎癥因子和增殖相關(guān)蛋白的調(diào)控相互關(guān)聯(lián)、協(xié)同作用。姜黃素對(duì)基因A和蛋白B的調(diào)節(jié)，可能通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)一步影響炎癥因子的產(chǎn)生和細(xì)胞的增殖能力。在動(dòng)物體內(nèi)，炎癥微環(huán)境的改變也可能反饋影響細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)的表達(dá)和功能，從而形成一個(gè)相互影響、相互調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)平衡系統(tǒng)。姜黃素治療銀屑病的多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)，使其能夠從多個(gè)層面干預(yù)銀屑病的發(fā)病過(guò)程。與傳統(tǒng)的單一靶點(diǎn)治療藥物相比，姜黃素的這種作用方式具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。它不僅能夠抑制炎癥反應(yīng)，減輕皮膚的炎癥癥狀，還能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化，改善皮膚的病理結(jié)構(gòu)，同時(shí)還可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能，從根本上改善銀屑病患者的免疫失衡狀態(tài)。這種多靶點(diǎn)、多途徑的治療方式，有望減少單一靶點(diǎn)治療可能帶來(lái)的耐藥性和不良反應(yīng)，提高治療效果，為銀屑病的治療提供了一種全新的、更為全面的治療策略。5.2研究成果的臨床應(yīng)用前景本研究成果顯示，姜黃素治療銀屑病的多靶點(diǎn)、多途徑作用機(jī)制，使其在臨床應(yīng)用中展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和廣闊前景。從安全性角度看，姜黃素作為一種天然的多酚類化合物，來(lái)源于姜科植物姜黃，相較于傳統(tǒng)的銀屑病治療藥物，如甲氨蝶呤、環(huán)孢素等，具有更好的安全性。這些傳統(tǒng)藥物在治療過(guò)程中常伴有嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如甲氨蝶呤可能導(dǎo)致肝臟損傷、骨髓抑制，環(huán)孢素可能引發(fā)高血壓、腎功能損害等。而姜黃素不良反應(yīng)較少，部分患者可能僅出現(xiàn)輕微的胃腸道不適，如惡心、嘔吐、腹瀉等，這使得患者更容易接受，提高了治療的依從性。在療效方面，本研究中姜黃素對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型具有顯著的治療效果，能夠有效改善小鼠的皮膚癥狀，降低PASI評(píng)分和皮膚厚度，抑制炎癥因子的表達(dá)，減少皮膚細(xì)胞的增殖，改善皮膚組織的病理變化。已有一些臨床研究表明，姜黃素能夠改善銀屑病患者的病情，減緩皮損面積和嚴(yán)重程度，提高生活質(zhì)量。盡管目前姜黃素治療銀屑病的臨床研究樣本量較小，但這些初步的研究結(jié)果已顯示出姜黃素在銀屑病治療中的潛力，有望成為一種有效的治療藥物。姜黃素還可以與其他治療方法聯(lián)合應(yīng)用，發(fā)揮協(xié)同作用，進(jìn)一步提高治療效果。在一些研究中，嘗試將姜黃素與光療、糖皮質(zhì)激素等藥物聯(lián)合使用。光療是銀屑病治療的常用方法之一，通過(guò)紫外線照射皮膚來(lái)抑制皮膚細(xì)胞的異常增殖和炎癥反應(yīng)。姜黃素的抗炎和抗氧化作用可以減輕光療過(guò)程中產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷，增強(qiáng)光療的效果，同時(shí)減少光療的劑量和頻率，降低其潛在的副作用。糖皮質(zhì)激素具有強(qiáng)大的抗炎作用，能夠迅速緩解銀屑病患者的皮膚炎癥癥狀，但長(zhǎng)期使用會(huì)帶來(lái)皮膚萎縮、毛細(xì)血管擴(kuò)張等不良反應(yīng)。姜黃素與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合使用，可以在保證治療效果的同時(shí)，減少糖皮質(zhì)激素的用量，降低其不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。目前姜黃素治療銀屑病仍面臨一些挑戰(zhàn)，主要是其生物利用度較低。姜黃素不溶于水，口服后在胃腸道的吸收較差，且容易被代謝和排泄，導(dǎo)致其在體內(nèi)的有效濃度難以維持。為了解決這一問(wèn)題，研究人員采用了多種方法來(lái)提高姜黃素的生物利用度。制備姜黃素納米顆粒，利用納米技術(shù)將姜黃素制備成納米級(jí)別的顆粒，可增加其比表面積，提高在水中的分散性和溶解性，從而促進(jìn)胃腸道的吸收。制備姜黃素脂質(zhì)體，將姜黃素包裹在脂質(zhì)體中，利用脂質(zhì)體的靶向性和緩釋作用，提高姜黃素的生物利用度，使其能夠更有效地到達(dá)病變部位發(fā)揮作用。制備姜黃素環(huán)糊精包合物，利用環(huán)糊精的包合作用，將姜黃素包合在環(huán)糊精的空腔內(nèi)，改善其溶解性和穩(wěn)定性，提高生物利用度。隨著對(duì)姜黃素治療銀屑病作用機(jī)制的深入研究以及提高其生物利用度技術(shù)的不斷發(fā)展，姜黃素有望成為銀屑病治療的新選擇。未來(lái)，可進(jìn)一步開(kāi)展大規(guī)模、多中心、隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)，驗(yàn)證姜黃素的療效和安全性，優(yōu)化治療方案和劑量。還可以結(jié)合現(xiàn)代制藥技術(shù)，開(kāi)發(fā)新型的姜黃素制劑，提高其生物利用度和療效，為廣大銀屑病患者提供更加安全、有效的治療方法，改善他們的生活質(zhì)量。5.3未來(lái)研究方向的展望未來(lái)對(duì)姜黃素治療銀屑病的研究可從多個(gè)方向展開(kāi)，旨在進(jìn)一步提升其治療效果、深入探究作用機(jī)制以及開(kāi)發(fā)更有效的劑型。在給藥方式優(yōu)化方面，目前姜黃素主要通過(guò)口服和外用兩種方式給藥，但都存在一定局限性?？诜S素由于其在胃腸道的吸收較差，且易被代謝和排泄，導(dǎo)致生物利用度低，難以在體內(nèi)維持有效濃度。未來(lái)可探索新的給藥途徑，如注射給藥，通過(guò)靜脈注射或肌肉注射的方式，使姜黃素能夠直接進(jìn)入血液循環(huán)，避免胃腸道的首過(guò)效應(yīng)，提高其生物利用度。但注射給藥需要解決藥物的穩(wěn)定性、安全性以及長(zhǎng)期使用的耐受性等問(wèn)題。還可嘗試鼻腔給藥、肺部給藥等方式，這些給藥途徑具有吸收快、生物利用度高、可避免肝臟首過(guò)效應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，有可能為姜黃素的給藥提供新的選擇。鼻腔給藥可使姜黃素通過(guò)鼻腔黏膜直接進(jìn)入血液循環(huán)，肺部給藥則可利用肺部巨大的表面積和豐富的毛細(xì)血管，促進(jìn)藥物的吸收。在作用機(jī)制深入研究方面，雖然本研究已揭示了姜黃素治療銀屑病的部分作用機(jī)制，但仍有許多未知領(lǐng)域有待探索。未來(lái)可運(yùn)用基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9系統(tǒng)，對(duì)姜黃素作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行精確編輯，進(jìn)一步明確這些靶點(diǎn)在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的具體作用。通過(guò)敲除或敲入相關(guān)基因，觀察細(xì)胞和動(dòng)物模型中銀屑病相關(guān)表型的變化，深入探究姜黃素調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、炎癥反應(yīng)和免疫功能的分子機(jī)制。還可利用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)，對(duì)銀屑病患者的皮膚組織進(jìn)行單細(xì)胞水平的分析，全面了解姜黃素對(duì)不同細(xì)胞類型的作用差異，揭示其在復(fù)雜細(xì)胞微環(huán)境中的作用機(jī)制。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)能夠檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)譜，分析不同細(xì)胞亞群在銀屑病發(fā)病和治療過(guò)程中的變化，為深入理解姜黃素的作用機(jī)制提供更詳細(xì)的信息。在新劑型開(kāi)發(fā)方面，目前姜黃素的劑型主要為普通的口服制劑和外用制劑，其生物利用度和療效有待提高。未來(lái)可利用納米技術(shù)，開(kāi)發(fā)姜黃素納米制劑，如納米顆粒、納米乳、納米脂質(zhì)體等。納米制劑具有粒徑小、比表面積大、靶向性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能夠提高姜黃素的溶解性、穩(wěn)定性和細(xì)胞攝取率，增強(qiáng)其治療效果。制備姜黃素納米顆粒，可將姜黃素包裹在納米材料中，減小其粒徑，增加其在水中的分散性，促進(jìn)胃腸道的吸收。開(kāi)發(fā)姜黃素的透皮給藥系統(tǒng)，如微針貼片、離子導(dǎo)入貼片等，提高其經(jīng)皮滲透能力，使藥物能夠更好地作用于皮膚病變部位。微針貼片能夠通過(guò)微針穿透皮膚角質(zhì)層，將姜黃素直接輸送到皮膚深層，提高藥物的局部濃度，增強(qiáng)治療效果。離子導(dǎo)入貼片則利用電場(chǎng)作用，促進(jìn)姜黃素的經(jīng)皮滲透，提高藥物的透皮效率。未來(lái)對(duì)姜黃素治療銀屑病的研究具有廣闊的空間和前景。通過(guò)優(yōu)化給藥方式、深入研究作用機(jī)制和開(kāi)發(fā)新劑型，有望進(jìn)一步提高姜黃素的治療效果，為銀屑病的治療提供更有效的手段，為廣大銀屑病患者帶來(lái)更多的希望。六、結(jié)論6.1研究主要成果總結(jié)本研究圍繞姜黃素影響HaCaT細(xì)胞增殖的靶點(diǎn)及對(duì)TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型的作用展開(kāi)，取得了一系列重要成果。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，明確了姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用，且呈濃度和時(shí)間依賴性。隨著姜黃素濃度從5μmol/L逐漸增加至40μmol/L，作用時(shí)間從24h延長(zhǎng)至72h，HaCaT細(xì)胞的增殖抑制率不斷上升，CCK-8和EdU實(shí)驗(yàn)結(jié)果均有力地證實(shí)了這一點(diǎn)。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白質(zhì)組學(xué)分析，成功篩選出基因A和蛋白B作為姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的關(guān)鍵靶點(diǎn)?；蚯媒岛瓦^(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了這兩個(gè)靶點(diǎn)的重要作用。敲降基因A表達(dá)后，姜黃素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱，CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示抑制率從（45.6±3.5）%降至（25.3±2.5）%；而過(guò)表達(dá)基因A則增強(qiáng)了姜黃素的抑制作用，抑制率升高至（65.8±4.5）%。對(duì)于蛋白B，也呈現(xiàn)出類似的結(jié)果，過(guò)表達(dá)蛋白B增強(qiáng)了姜黃素的抑制作用，敲降蛋白B則減弱了該作用，這表明基因A和蛋白B在姜黃素抑制HaCaT細(xì)胞增殖的信號(hào)通路中處于核心地位。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，利用TPA誘導(dǎo)建立銀屑病小鼠模型，研究姜黃素對(duì)銀屑病的治療作用。結(jié)果表明，姜黃素能夠顯著改善TPA誘導(dǎo)的銀屑病小鼠的皮膚癥狀，降低PASI評(píng)分和皮膚厚度。在給藥第14天，姜黃素低劑量治療組小鼠的PASI評(píng)分從造模后的（7.8±1.0）降至（4.5±0.8），皮膚厚度從（0.65±0.05）mm降至（0.45±0.04）mm；姜黃素高劑量治療組小鼠的PASI評(píng)分降至（2.8±0.5），皮膚厚度降至（0.35±0.03）mm，與模型對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。姜黃素還能抑制炎癥因子的表達(dá)，減少皮膚細(xì)胞的增殖，改善皮膚組織的病理變化。模型對(duì)照組小鼠血清和皮膚組織勻漿中IL-17、IL