(19)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局(10)申請(qǐng)公布號(hào)(10)申請(qǐng)公布號(hào)CN114514024A(21)申請(qǐng)?zhí)?02080060418.5(30)優(yōu)先權(quán)數(shù)據(jù)(85)PCT國(guó)際申請(qǐng)進(jìn)入國(guó)家階段日PCT/GB2020/0521222020WO2021/044158EN2021.03.地址英國(guó)劍橋(74)專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11314專(zhuān)利代理師程偉A61K31/437(2006.01)A61K31/155(2006.01)A61K31/137(2006.01)A61K31/352(2006.01)用異丁司特與二甲雙胍、大麻二酚、舍曲林或槲皮素的組合對(duì)脆性X綜合征的治療本發(fā)明涉及組合物和試劑盒，所述組合物和試劑盒包括：(i)異丁司特或其藥學(xué)上可接受的中化合物A選自：二甲雙胍(metformin)、大麻二酚(cannabidiol)、舍曲林(sertraline)和槲皮素(quercetin)。所述組合物和試劑盒可用于治條件恐懼2(i)異丁司特(ibudilast)或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及(ii)化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中化合物A選自以下列表：二甲雙胍(metformin)、大麻二酚(cannabidiol)、舍曲林(sertraline)和槲皮素2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中化合物A選自二甲雙胍、大麻二酚和舍曲林。3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其包括10mg到300mg的異丁司特，優(yōu)選地20mg到150mg的異丁司特。(i)至少一個(gè)劑量的異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及(ii)至少一個(gè)劑量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中化合物A選自以下列表：5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括權(quán)利要求2或3的優(yōu)選特征中的任何優(yōu)選特征。(i)異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及(ii)化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述組合物用于治療脆性X綜合征，其中化合物A選自以下列表：7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述患者表現(xiàn)出多動(dòng)、社交焦慮、破壞性行為或記憶障礙的體征。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的組合物，其中施用是通過(guò)單次日劑量進(jìn)行的。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述單次日劑量包括10mg到300mg的異丁司特，10.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的組合物，其中施用是通過(guò)每日兩次劑量進(jìn)行的。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中兩次日劑量包括20mg到100mg的異丁司特或20mg到50mg的異丁司特。(i)至少一個(gè)劑量的異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及(ii)至少一個(gè)劑量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述(i)和(ii)同時(shí)、單獨(dú)或依次使用以治療脆性X綜合征，其中化合物A選自以下列表：13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的試劑盒，其具有權(quán)利要求7到11的額外特征中的任何額外特14.根據(jù)權(quán)利要求6到13中任一項(xiàng)所述的組合物或試劑盒，其進(jìn)一步包括權(quán)利要求2或33的優(yōu)選特征中的任何優(yōu)選特征。15.一種治療脆性X綜合征的方法，所述方法包括同時(shí)、單獨(dú)或依次向所述患者施用以(i)至少一個(gè)劑量的異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及(ii)至少一個(gè)劑量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中化合物A選自以下列表：16.一種異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于制造用于治療患有脆性X綜合征的患者的藥物，其中所述患者已施用化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物選自以下列表：17.一種化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于制造用于治療患有脆性X綜合征的患者的藥物，其中所述患者已施用異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中化合物A選自以下列表：4技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及包括用于治療脆性X綜合征的異丁司特(ibudilast)的組合物、試劑盒和組合療法。背景技術(shù)[0002]脆性X綜合征，通常被稱(chēng)為脆性X,是智力障礙的最常見(jiàn)的遺傳原因，并且是自閉癥的最常見(jiàn)的單基因原因。其影響全球大約4000分之1的男性和6000分之1的女性。[0003]與脆性X相關(guān)聯(lián)的特征的范圍很廣，并且通常男性比女性更容易受到影響。與脆性X綜合征相關(guān)聯(lián)的主要特征之一是智力障礙，如認(rèn)知、執(zhí)行和語(yǔ)言表現(xiàn)困難?；加写嗾鞯膫€(gè)體通常具有社交焦慮，其特征在于與極度害羞、缺乏眼神交流和形成同伴關(guān)系的挑戰(zhàn)相關(guān)的社交、情感和溝通困難。脆性X綜合征還與如注意持續(xù)時(shí)間短、注意力分散、沖動(dòng)、躁動(dòng)、過(guò)度活躍和感覺(jué)問(wèn)題等多動(dòng)和破壞性行為相關(guān)聯(lián)。此外，患有脆性X綜合征的個(gè)體通常患有癲癇。[0004]脆性X綜合征是由被稱(chēng)為脆性X智力遲鈍基因1(FMR1)的單個(gè)基因中的突變引起發(fā)啟動(dòng)子的甲基化，并且這進(jìn)而導(dǎo)致缺乏基因的表達(dá)和其所編碼的蛋白質(zhì)，即脆性X智力遲鈍蛋白(FMRP)的翻譯。FMRP是參與mRNA代謝的不同步驟，如翻譯控制(在體細(xì)胞和樹(shù)突棘[0005]目前，尚無(wú)用于治療脆性X綜合征的有效療法。然而，已經(jīng)做出了相當(dāng)大的努力來(lái)標(biāo)識(shí)用于治療此類(lèi)病癥的藥理學(xué)靶點(diǎn)。尤其是，脆性X綜合征一直是開(kāi)發(fā)中的藥物的改變用途的努力以及重新定位的常見(jiàn)靶點(diǎn)。已對(duì)此任務(wù)應(yīng)用了許多不同的標(biāo)準(zhǔn)和方法。在許多情況下，改變用途的侯選物主要基于臨床模式匹配來(lái)標(biāo)識(shí)，而在其它情況下，已對(duì)基本疾病機(jī)制進(jìn)行了廣泛研究以標(biāo)識(shí)治療靶點(diǎn)，然后進(jìn)行徹底的臨床前驗(yàn)證。[0006]總體而言，治療脆性X綜合征的努力帶來(lái)了一些令人興奮的可能性，但盡管做出了[0007]異丁司特是磷酸二酯酶抑制劑并且用作抗炎。其用于治療哮喘、中風(fēng)和多發(fā)性硬化癥。異丁司特的系統(tǒng)名稱(chēng)為2-甲基-1-(2-丙烷-2-基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)丙烷-1-酮。發(fā)明內(nèi)容[0008]本發(fā)明基于體內(nèi)數(shù)據(jù)。下面列出的化合物已被標(biāo)識(shí)為當(dāng)與異丁司特組合使用時(shí)可用于治療脆性X綜合征。這可以從附圖中的體內(nèi)數(shù)據(jù)中看出。[0010](i)異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及[0011](ii)化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，[0012]其中化合物A選自以下列表：5[0013]舍曲林(sertraline)、二甲雙胍(metformin)、大麻二酚(cannabidiol)、槲皮素(quercetin)和米諾環(huán)素(minocycline)。[0015](i)至少一個(gè)劑量的異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及[0016](ii)至少一個(gè)劑量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，[0017]其中化合物A選自以下列表：[0018]舍曲林、二甲雙胍、大麻二酚、槲皮素和米諾環(huán)素。[0019]在本發(fā)明的第三方面中，提供了一種組合物，其包括：[0020](i)異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及[0021](ii)化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，[0022]所述組合物用于治療脆性X綜合征，[0023]其中化合物A選自以下列表：[0024]舍曲林、二甲雙胍、大麻二酚、槲皮素和米諾環(huán)素。[0025]在本發(fā)明的第四方面中，提供了一種試劑盒，其包括：[0026](i)至少一個(gè)劑量的異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及[0027](ii)至少一個(gè)劑量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽，[0028]所述(i)和(ii)同時(shí)、單獨(dú)或依次使用以治療脆性X綜合征，[0029]其中化合物A選自以下列表：[0030]舍曲林、二甲雙胍、大麻二酚、槲皮素和米諾環(huán)素。附圖說(shuō)明[0031]圖1示出了來(lái)自異丁司特(3mg/kg)體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。[0032]圖2示出了來(lái)自異丁司特(12mg/kg)體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。[0033]圖3示出了來(lái)自異丁司特和舍曲林體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。[0034]圖4示出了來(lái)自異丁司特和二甲雙胍體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。[0035]圖5示出了來(lái)自異丁司特和大麻二酚體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。[0036]圖6示出了來(lái)自異丁司特和槲皮素體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。具體實(shí)施方式[0037]由于脆性X是綜合征，因此患者中存在許多不同的表現(xiàn)和癥狀。這些表現(xiàn)和癥狀包含：智力障礙，如認(rèn)知、執(zhí)行和語(yǔ)言表現(xiàn)、短期記憶、執(zhí)行功能、視覺(jué)記憶、視覺(jué)-空間關(guān)系困難；自閉癥；社交焦慮(即，社交互動(dòng)困難),如缺乏眼神交流、厭惡凝視、開(kāi)始社交互動(dòng)的時(shí)間延長(zhǎng)以及形成同伴關(guān)系的挑戰(zhàn)；多動(dòng)和重復(fù)行為，包含注意力持續(xù)時(shí)間非常短、對(duì)視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、觸覺(jué)和嗅覺(jué)刺激超敏感、注意力分散、沖動(dòng)、躁動(dòng)和過(guò)度活躍；破壞性行為，包含情緒波動(dòng)、易怒、自我傷害和攻擊性；強(qiáng)迫癥(OCD);眼科問(wèn)題，如斜視；癲癇；工作記憶困難，這涉及在處理相同或其它信息時(shí)臨時(shí)存儲(chǔ)信息；語(yǔ)音記憶(或口頭工作記憶)困難；以及脆性X相關(guān)原發(fā)性卵巢功能不全(FXPOI)。[0038]在本發(fā)明中，并且如由以下在體內(nèi)數(shù)據(jù)中所證明的，異丁司特用于治療以上癥狀中的一種或多種癥狀，并且因此是脆性X綜合征的有效治療。優(yōu)選地，異丁司特用于治療脆6性X綜合征，其中患者表現(xiàn)出所述綜合征的典型癥狀，包含社交焦慮、多動(dòng)、記憶喪失和/或破壞性行為。更優(yōu)選地，異丁司特用于治療脆性X綜合征，其中患者表現(xiàn)出多動(dòng)、記憶喪失和/或破壞性行為。[0039]術(shù)語(yǔ)“多動(dòng)”具有其在本領(lǐng)域中的正常含義。多動(dòng)可以包含注意力持續(xù)時(shí)間非常短、對(duì)視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、觸覺(jué)和嗅覺(jué)刺激超敏感、注意力分散、沖動(dòng)、躁動(dòng)和/或過(guò)度活躍。[0040]術(shù)語(yǔ)“社交焦慮”具有其在本領(lǐng)域中的正常含義。其還可以被稱(chēng)為社交互動(dòng)困難或社交低。社交焦慮可以包含缺乏眼神交流、厭惡凝視、開(kāi)始社交互動(dòng)的時(shí)間延長(zhǎng)、社交回避或退縮以及形成同伴關(guān)系的挑戰(zhàn)。[0041]術(shù)語(yǔ)“記憶喪失”具有其在本領(lǐng)域中的正常含義。其還可以被稱(chēng)為記憶障礙。其是指無(wú)法短期或長(zhǎng)期地保留信息。其可以包含認(rèn)知、執(zhí)行和語(yǔ)言表現(xiàn)、執(zhí)行功能和視覺(jué)記憶困難。其還可以包含工作記憶，也稱(chēng)為短期記憶(即，在處理相同或其它信息的同時(shí)臨時(shí)存儲(chǔ)信息)困難和語(yǔ)音記憶(或口頭工作記憶)困難。[0042]術(shù)語(yǔ)“破壞性行為”具有其在本領(lǐng)域中的正常含義。它還可以包含重復(fù)行為。其還可以包含情緒波動(dòng)、易怒、自我傷害和攻擊性。[0043]如本文所使用的，藥學(xué)上可接受的鹽是具有藥學(xué)上可接受的酸或堿的鹽。藥學(xué)上可接受的酸包含：無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸或硝酸；以及有機(jī)酸，如檸檬酸、硬脂酸、苯磺酸或?qū)妆交撬帷Ｋ帉W(xué)上可接受的堿包含堿金屬(例如，鈉或鉀)和堿土金屬(例如，鈣或鎂)氫氧化物和有機(jī)堿，如烷基胺、芳基胺或雜環(huán)胺。[0044]舍曲林是選擇性血清素再攝取抑制劑(SSRI),其用于治療重度抑郁癥。[0045]二甲雙胍是雙胍類(lèi)降糖藥劑，其用于治療非胰島素依賴(lài)型糖尿病。[0046]大麻二酚是植物性大麻素。[0047]槲皮素是多酚類(lèi)黃酮，其存在于植物食物來(lái)源中。[0048]米諾環(huán)素是四環(huán)素抗生素，其用于治療細(xì)菌感染和尋常痤瘡。[0049]在一優(yōu)選實(shí)施例中，化合物A選自舍曲林、二甲雙胍、大麻二酚和米諾環(huán)素。[0050]在替代性實(shí)施例中，化合物A選自舍曲林、二甲雙胍、槲皮素和大麻二酚。[0051]在另外的優(yōu)選實(shí)施例中，化合物A選自二甲雙胍和大麻二酚，優(yōu)選地為二甲雙胍。[0052]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物可以多種劑型施用。在一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒或組合物可以被調(diào)配成適合于口服、直腸、腸胃外、鼻內(nèi)或經(jīng)皮施用或通過(guò)吸入或通過(guò)栓劑施用的形式。[0053]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物可以例如以片劑、含片、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散粉末或顆粒的形式口服施用。優(yōu)選地，所述試劑盒或組合物被調(diào)配成使得其適合于口服施用，例如片劑和膠囊。[0054]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物還可以腸胃外施用，無(wú)論是皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、胸骨內(nèi)施用、經(jīng)皮施用還是通過(guò)輸注技術(shù)。所述試劑盒或組合物還可以以栓劑的形式施用。[0055]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物也可以通過(guò)吸入施用。與通過(guò)口服途徑攝取的許多藥物相比，吸入藥物的優(yōu)點(diǎn)在于其直接遞送到血液供應(yīng)豐富的區(qū)域。由于肺泡具有巨大的表面積和豐富的血液供應(yīng)，并且繞過(guò)首過(guò)代謝，因此吸收非常迅速。7[0056]本發(fā)明還提供了含有根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物的吸入裝置。通常，所述裝置是定量吸入器(metereddoseinhaler,MDI),其含有用于將藥物推出吸入器的藥學(xué)上可接受的化學(xué)推進(jìn)劑。[0057]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物也可以通過(guò)鼻內(nèi)施用來(lái)施用。鼻腔的高度可滲透組織非常易于接受藥物并且快速且有效地吸收藥物。與注射相比，鼻腔藥物遞送的痛苦和侵入性更小，從而減少患者的焦慮。通過(guò)這種方法，吸收會(huì)非常迅速并且通常會(huì)繞過(guò)首過(guò)代謝，從而降低患者間的變異性。進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供含有根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物的鼻內(nèi)裝置。[0058]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物也可以通過(guò)經(jīng)皮施用來(lái)施用。對(duì)于局部遞送，可以據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物的經(jīng)皮貼劑。[0059]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物也可以通過(guò)舌下施用來(lái)施用。因此，本發(fā)明還提供了包括根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物的舌下片劑。[0060]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物也可以與通過(guò)除了患者的正常代謝之外的過(guò)程減少物質(zhì)的降解的藥劑一起調(diào)配，所述藥劑如抗菌劑或蛋白酶抑制劑，所述蛋白酶抑制劑可能存在于患者體內(nèi)或患者身上或體內(nèi)的共生或寄生蟲(chóng)生物體內(nèi)，并且所述蛋白酶能夠使所述化合物降解。[0061]用于口服施用的液體分散體可以是糖漿、乳液和懸浮液。纖維素或聚乙烯醇作為載體。用于肌內(nèi)注射的懸浮液或溶液可以與活性化合物一起含有藥[0063]用于注射或輸注的溶液可以含有例如無(wú)菌水作為載體，或者優(yōu)選地所述溶液可以[0064]在本發(fā)明的一實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的試劑盒或組合物以對(duì)于治療脆性X綜合征的癥狀有效的量施用。有效劑量對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言將是顯而易見(jiàn)的，并且取決于[0065]在一優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的組合物包括10mg到300mg的異丁司特，優(yōu)選地20mg到150mg的異丁司特。[0066]優(yōu)選地，化合物A的總?cè)談┝坎怀^(guò)制造商所推薦的最大日劑量。[0067]在一優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的組合物包括：100mg到2000mg的二甲雙胍；10mg到500mg的舍曲林，更優(yōu)選地50mg到300mg的舍曲林；10mg到1500mg的大麻二酚；50mg到[0068]任何上述劑量可以每天一次、每天兩次、每[0069]在一實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物至少每天一次施用。優(yōu)選地，其以單次日劑量的形式施用。優(yōu)選地，所述單次日劑量包括10mg到300mg的異丁司特，優(yōu)選地20mg到150mg的異丁8[0070]在一實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物一天兩次施用。優(yōu)選地，每個(gè)劑量包括20mg到[0071]優(yōu)選地，劑量方案為使得異丁司特的總?cè)談┝坎怀^(guò)300mg。[0072]為了治療脆性X綜合征，異丁司特和化合物A用于慢性劑量方案，即慢性、長(zhǎng)期治療。[0073]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒提供了多于一種藥物的施用，并且所述藥物可以同時(shí)、依次或單獨(dú)施用。不必將所述藥物包裝在一起(但這是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例)。也不必同時(shí)施用數(shù)天)施用，但優(yōu)選地在同一天施用。如本文所用，“同時(shí)”是指[0074]優(yōu)選地，所述試劑盒同時(shí)施用，即一起服用或調(diào)配物單一組合物。最優(yōu)選地，所述試劑盒被調(diào)配為單一組合物。[0075]在本發(fā)明的實(shí)施例中，試劑盒至少每天一次施用。優(yōu)選地，其以單次日劑量的形式施用。優(yōu)選地，所述單次日劑量是同時(shí)施用的，即異丁司特和化合物A一起服用或被調(diào)配成[0076]在此實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述試劑盒包括10mg到300mg的異丁司特，優(yōu)選地20mg到150mg的異丁司特。[0077]在此實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述試劑盒包括：100mg到2000mg的二甲雙胍；10mg到500mg的舍曲林，更優(yōu)選地50mg到300mg的舍曲林；10mg到1500mg的大麻二酚；50mg到1500mg的槲皮素；或50mg到500mg的米諾環(huán)素。所述試劑盒可以依次施用，即大約同時(shí)，并且優(yōu)選[0078]在本發(fā)明的一實(shí)施例中，所述試劑盒可以每天兩次施用。優(yōu)選地，每個(gè)日劑量同時(shí)施用，即異丁司特和化合物A一起服用或調(diào)配為單一試劑盒被調(diào)配為單一組合物，每天兩次施用。[0079]在此實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述試劑盒包括20mg到100mg的異丁司特，或20mg到50mg的異丁司特。[0080]在此實(shí)施例中，優(yōu)選地，所述試劑盒包括：100mg到1000mg的二甲雙胍；50mg到素。[0081]每個(gè)日劑量也可以依次施用，即異丁司特和化合物A大約同時(shí)施用，并且優(yōu)選地彼此間隔約1小時(shí)內(nèi)施用。[0082]本發(fā)明還涉及治療脆性X綜合征的方法，所述方法包括向患者施用如本文所述的試劑盒或組合物。本發(fā)明的此實(shí)施例可以具有上述任何優(yōu)選特征。施用方法可以根據(jù)上述任何途徑。[0083]本發(fā)明還涉及一種異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于制造用于治療患有脆性X綜合征的患者的藥物，其中所述患者已施用了化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的此實(shí)施例可以具有上述任何優(yōu)選特征。9[0084]本發(fā)明還涉及一種化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于制造用于治療患有脆性X綜合征的患者的藥物，其中所述患者已施用了異丁司特或其藥學(xué)上可接受的鹽。[0085]為了避免疑問(wèn)，本發(fā)明還涵蓋在體內(nèi)反應(yīng)以得到本發(fā)明的化合物的前藥。[0088]通過(guò)缺失Fmr1的啟動(dòng)子和第一外顯子產(chǎn)生了Fmr1敲除2(Fmr1K02)小鼠。Fmr1K02,其為蛋白質(zhì)和mRNA兩者無(wú)效的。在此研究中，使用了在C57BL/6J背景上生成的Fmr1[0090]將Fmr1K02小鼠按4-5只每籠相同基因型的組圈養(yǎng)在溫度(21±1℃)和濕度控制的房間中，其中為12小時(shí)明暗循環(huán)(早上7點(diǎn)-晚上7點(diǎn)開(kāi)燈)。食物和水可隨意獲得。將小鼠圈養(yǎng)在商業(yè)塑料籠中，并且根據(jù)1986年英國(guó)動(dòng)物(科學(xué)程序)法案(requirementsoftheUKAnimals(ScientificProcedures)Act)的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。方案由IEB,智利大學(xué)研究所審查委員會(huì)(UniversityofChileInstitutereviewboard)審查和批準(zhǔn)。所有實(shí)驗(yàn)都是在工作人員不了解基因型和藥物治療的情況下進(jìn)行的。單獨(dú)的研究人員制備給藥溶液并對(duì)[0092]研究中每種化合物有五個(gè)治療組，其中每個(gè)治療組有10只雄性小鼠(全部均為8周齡):第1組：用媒劑治療的野生型同窩仔小鼠(WT-媒劑);第2組：用媒劑治療的Fmr1K02小療的Fmr1KO2小鼠(KO-[化合物A]);第5組：用異丁司特和化合物A治療的Fmr1K02小鼠(KO-異丁司特/[化合物A])。[0093]行為測(cè)試[0094]對(duì)于實(shí)驗(yàn)，在同一設(shè)備中對(duì)所有小鼠測(cè)試一次。在測(cè)試之前，在實(shí)驗(yàn)前將小鼠放置在設(shè)備中持續(xù)幾分鐘。在對(duì)每只小鼠進(jìn)行測(cè)試之前，用潮濕和干燥的紙巾清潔所述設(shè)備。目的是為所有實(shí)驗(yàn)受試者創(chuàng)造低但恒定的背景老鼠氣味。在所有測(cè)試和數(shù)據(jù)分析期間，測(cè)試[0095]曠場(chǎng)(多動(dòng))[0096]曠場(chǎng)設(shè)備用于測(cè)試多動(dòng)。所述設(shè)備是被分成10×10cm網(wǎng)格的50×9×30cm灰色PVC封閉的競(jìng)技場(chǎng)(arena)。在測(cè)試之前5-20分鐘將小鼠帶到實(shí)驗(yàn)室。將小鼠置于面向角落的盤(pán)角方格(cornersquare)中并且觀察3分鐘。對(duì)全身進(jìn)入的方格的數(shù)量(自主活動(dòng))進(jìn)行計(jì)數(shù)。用視頻跟蹤裝置記錄小鼠在場(chǎng)周?chē)囊苿?dòng)，持續(xù)3分鐘(NT4.0版本，Viewpoint)。[0098]在單獨(dú)的籠子中進(jìn)行測(cè)試。普通墊子覆蓋地板，深度為0.5cm。每個(gè)籠子均供應(yīng)有“Nestlet”,一種5cm2的壓制棉絮(Ancare)。在黑暗期之前1小時(shí)，將小鼠單獨(dú)置于巢籠中，并且在第二天早上評(píng)估結(jié)果。[0099]以5分量表對(duì)筑巢進(jìn)行評(píng)分。[0100]評(píng)分1:Nestlet在很大程度上未受影響(>90%完整)。[0101]評(píng)分2:Nestlet被部分撕毀(50-90%保持完整)。[0102]評(píng)分3:Nestlet大部分被撕碎，但通常沒(méi)有可鑒定的巢位點(diǎn)：<50%的Nestlet。[0103]評(píng)分4:可鑒定但扁平的巢，<90%的Nestlet被撕毀，將材料聚集成扁平巢(所述扁平巢的壁在不到其圓周的50%上高于在其一側(cè)卷起的小鼠高度)。[0104]評(píng)分5:(接近)完美巢：>90%的Nestlet被撕毀，巢是陷坑，所述巢的壁在其圓周的50%以上高于小鼠身高。[0105]條件恐懼[0106]在情景條件恐懼中使用的依賴(lài)性量度是在未經(jīng)調(diào)節(jié)的刺激(足底電擊)與經(jīng)調(diào)節(jié)的刺激(特定情景)配對(duì)之后的僵直反應(yīng)。僵直是對(duì)恐懼的物種特異性反應(yīng)，其被定義為“除了呼吸之外不存在移動(dòng)”。這可以持續(xù)數(shù)秒至數(shù)分鐘，這取決于厭惡刺激的力量、次數(shù)的次數(shù)以及受試者所達(dá)到的學(xué)習(xí)程度。測(cè)試涉及將動(dòng)物置于新環(huán)境(暗室)中，提供令人厭惡的刺激(對(duì)爪子進(jìn)行1秒電擊，0.2mA),并且然后將其去除。[0108]在三室社交任務(wù)中，評(píng)估測(cè)試小鼠(subjectmouse)對(duì)新社交刺激(新小鼠)的探索。三室社交接近任務(wù)監(jiān)測(cè)當(dāng)向測(cè)試小鼠呈現(xiàn)了與新小鼠或空杯待在一起的選擇時(shí)的直接社交接近行為。社交被定義為測(cè)試小鼠在含有小鼠的室中所花費(fèi)的時(shí)間比在空室中所花費(fèi)的時(shí)間多。社交新奇偏好被定義為在室中與新小鼠待在一起的時(shí)間更多。所述設(shè)備是矩形三室箱子，其中每個(gè)室的測(cè)量大小為20cm(長(zhǎng)度)×40.5cm(寬度)×22cm(高度)。分隔壁由透明的復(fù)雜材料(perplex)制成，帶有允許進(jìn)入每個(gè)室的小開(kāi)口(10cm寬度×5cm高度)。三室任務(wù)從下方照亮(10勒克斯)。允許小鼠在三個(gè)10分鐘試驗(yàn)中自由探索三室設(shè)備。在試驗(yàn)期間，將一個(gè)金屬絲杯倒置放置在側(cè)室中的一個(gè)側(cè)室中，并且將新小鼠放置在另一個(gè)側(cè)室中的另一個(gè)金屬絲杯下面(新小鼠刺激),使中間室為空。新小鼠在整個(gè)試驗(yàn)中的位置被抵消，以使由于對(duì)室位置的偏好而引起的任何潛在混雜最小化。將探索新小鼠所花費(fèi)的時(shí)間記為探索比率。[0109]行為數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析[0110]通過(guò)單向方差分析與杜內(nèi)特多重比較事后檢驗(yàn)(Dunnett'smultiplecomparisonposthoctest)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其中將WT媒劑組用作參考并與所有其它組進(jìn)行比較。[0113]·WT組和任何其它組平均值在統(tǒng)計(jì)上