2025年高職生物技術(shù)（基因克隆基礎(chǔ)）試題及答案

（考試時(shí)間：90分鐘滿(mǎn)分100分）班級(jí)______姓名______第I卷（選擇題共40分）答題要求：本卷共20小題，每小題2分。在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合題目要求的。1.基因克隆的核心步驟是A.目的基因的獲取B.載體的選擇與構(gòu)建C.目的基因與載體的連接D.重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞2.以下哪種方法不是獲取目的基因的常用方法A.從基因組文庫(kù)中篩選B.從cDNA文庫(kù)中篩選C.化學(xué)合成法D.細(xì)胞融合法3.用于構(gòu)建基因文庫(kù)的載體通常不具備以下哪種特性A.有多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶切點(diǎn)B.有篩選標(biāo)記C.能自我復(fù)制D.能與目的基因特異性結(jié)合4.限制性?xún)?nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端通常是A.平末端B.黏性末端C.平末端或黏性末端D.以上都不是5.連接目的基因與載體的酶是A.DNA聚合酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.DNA連接酶D.限制性?xún)?nèi)切酶6.以下哪種不是常用的DNA連接酶A.T4DNA連接酶B.E.coliDNA連接酶C.TaqDNA連接酶D.以上都是常用的7.將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法不包括A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.感染D.細(xì)胞凋亡8.藍(lán)白斑篩選中，含有重組質(zhì)粒的菌落呈現(xiàn)A.藍(lán)色B.白色C.無(wú)色D.綠色9.基因克隆中常用的受體細(xì)胞不包括A.大腸桿菌B.酵母菌C.植物細(xì)胞D.病毒10.以下關(guān)于PCR技術(shù)的說(shuō)法錯(cuò)誤的是A.是一種體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)B.需要引物C.反應(yīng)體系中需要DNA模板D.不需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶11.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括A.變性B.退火C.延伸D.連接12.用于PCR反應(yīng)的引物長(zhǎng)度一般為A.5-10bpB.10-15bpC.15-30bpD.30-50bp13.以下哪種不是PCR反應(yīng)的緩沖液成分A.Tris-HClB.MgCl2C.dNTPD.乙醇14.基因克隆過(guò)程中，對(duì)目的基因進(jìn)行測(cè)序的目的不包括A.驗(yàn)證目的基因的序列是否正確B.分析基因的結(jié)構(gòu)和功能C.確定基因的表達(dá)水平D.檢測(cè)基因是否發(fā)生突變15.常用的DNA測(cè)序方法是A.Sanger測(cè)序法B.化學(xué)降解法C.焦磷酸測(cè)序法D.以上都是16.以下關(guān)于基因文庫(kù)的說(shuō)法正確的是A.基因組文庫(kù)包含了生物體的全部基因B.cDNA文庫(kù)包含了生物體基因組中的所有基因C.基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)都只包含部分基因D.以上都不對(duì)17.構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)，首先要提取細(xì)胞中的A.DNAB.mRNAC.蛋白質(zhì)D.多糖18.以下哪種載體常用于構(gòu)建表達(dá)載體A.質(zhì)粒載體B.噬菌體載體C.人工染色體載體D.以上都可以19.基因克隆過(guò)程中，對(duì)重組DNA進(jìn)行鑒定的方法不包括A.酶切鑒定B.PCR鑒定C.核酸雜交鑒定D.細(xì)胞形態(tài)鑒定20.核酸雜交技術(shù)不包括A.Southern雜交B.Northern雜交C.Western雜交D.原位雜交第II卷（非選擇題共60分）（一）填空題（共10分）答題要求：請(qǐng)?jiān)诿款}的空格中填上正確答案。每空1分。1.基因克隆的基本流程包括目的基因的獲取、______、目的基因與載體的連接、重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞、______。2.限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別的DNA序列通常具有______性。3.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是變性、______、延伸。4.構(gòu)建基因文庫(kù)時(shí)，常用的載體有質(zhì)粒載體、______、人工染色體載體等。5.核酸雜交技術(shù)中，檢測(cè)DNA的是______雜交，檢測(cè)RNA的是______雜交。（二）名詞解釋?zhuān)ü?5分）答題要求：請(qǐng)對(duì)下列名詞進(jìn)行簡(jiǎn)要解釋。每題3分。1.基因克隆2.載體3.限制性?xún)?nèi)切酶（三）簡(jiǎn)答題（共15分）答題要求：簡(jiǎn)要回答下列問(wèn)題。每題5分。1.簡(jiǎn)述獲取目的基因的常用方法。2.說(shuō)明連接目的基因與載體的要點(diǎn)。3.闡述PCR技術(shù)的原理及應(yīng)用。（四）材料分析題（共10分）答題要求：閱讀以下材料，回答相關(guān)問(wèn)題。材料：在基因克隆實(shí)驗(yàn)中，研究人員從某生物基因組中獲取了一段目的基因，準(zhǔn)備將其克隆到載體上并導(dǎo)入大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)。研究人員首先用限制性?xún)?nèi)切酶切割目的基因和載體，然后用DNA連接酶將兩者連接，構(gòu)建成重組DNA分子。接著，采用熱休克法將重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)后，對(duì)菌落進(jìn)行篩選和鑒定。問(wèn)題1：在切割目的基因和載體時(shí)，如何選擇合適的限制性?xún)?nèi)切酶？（5分）問(wèn)題2：熱休克法導(dǎo)入重組DNA的原理是什么？（5分）（五）綜合應(yīng)用題（共20分）答題要求：結(jié)合所學(xué)知識(shí)，回答以下問(wèn)題。假設(shè)你要克隆一個(gè)植物抗病基因，設(shè)計(jì)一個(gè)完整的基因克隆方案，并說(shuō)明每一步驟的目的和原理。（20分）答案：1.C2.D3.D4.C5.C6.C7.D8.B9.D10.D11.D12.C13.D14.C15.D16.A17.B18.D19.D20.C填空題答案：1.載體的選擇與構(gòu)建；重組DNA的篩選與鑒定2.特異3.退火4.噬菌體載體5.Southern；Northern名詞解釋答案：1.基因克?。菏侵赴褋?lái)自不同生物的基因與有自主復(fù)制能力的載體DNA在體外人工連接，構(gòu)建成新的重組DNA，然后送入受體生物中去表達(dá)，從而產(chǎn)生遺傳物質(zhì)和狀態(tài)的轉(zhuǎn)移和重新組合。2.載體：是指能夠攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并在其中進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的工具。3.限制性?xún)?nèi)切酶：是一類(lèi)能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA雙鏈的核酸內(nèi)切酶。簡(jiǎn)答題答案：1.獲取目的基因的常用方法有：從基因組文庫(kù)中篩選；從cDNA文庫(kù)中篩選；化學(xué)合成法；PCR擴(kuò)增法等。2.連接目的基因與載體的要點(diǎn)：選擇合適的限制性?xún)?nèi)切酶切割目的基因和載體，使其產(chǎn)生互補(bǔ)的末端；用DNA連接酶將目的基因與載體連接，形成重組DNA分子；連接反應(yīng)體系中要保證目的基因和載體的濃度合適，反應(yīng)條件適宜。3.PCR技術(shù)的原理：以DNA為模板，在引物、dNTP、熱穩(wěn)定DNA聚合酶等存在的條件下，通過(guò)變性、退火、延伸三個(gè)步驟的循環(huán)，體外擴(kuò)增特定DNA片段。應(yīng)用：基因克隆、基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)、遺傳疾病診斷等。材料分析題答案：?jiǎn)栴}1：選擇合適的限制性?xún)?nèi)切酶要考慮以下幾點(diǎn)：識(shí)別序列應(yīng)包含目的基因兩端的特定序列；切割后產(chǎn)生的末端應(yīng)與載體末端互補(bǔ)；盡量避免在目的基因內(nèi)部有該酶的識(shí)別位點(diǎn)；要考慮酶切反應(yīng)的條件和效率等。問(wèn)題2：熱休克法導(dǎo)入重組DNA的原理是：通過(guò)短暫的高溫處理，使大腸桿菌細(xì)胞膜的通透性增加，從而允許重組DNA分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。綜合應(yīng)用題答案：方案：1.目的基因的獲取：采用PCR擴(kuò)增法從植物基因組中擴(kuò)增抗病基因。原理是利用已知抗病基因的序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR反應(yīng)特異性擴(kuò)增目的基因。目的是獲得大量的抗病基因片段。2.載體的選擇與構(gòu)建：選擇合適的質(zhì)粒載體，如pUC系列。將載體用限制性?xún)?nèi)切酶切割，產(chǎn)生與目的基因互補(bǔ)的末端。原理是載體具有多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶切點(diǎn)和篩選標(biāo)記，便于后續(xù)操作。目的是為目的基因提供運(yùn)載工具。3.目的基因與載體的連接：用DNA連接酶將目的基因與載體連接，形成重組DNA分子。原理是DNA連接酶能催化DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。目的是構(gòu)建重組表達(dá)載體。4.重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞：采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將