ICS67.05

CCSX04

GDFCA

廣東省食品流通協(xié)會團體標準

T/GDFCA081—XXXX

黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定高

效液相色譜法

DeterminationofdioscincontentinpolygonatirhizomaanditsextractbyHPLC

method

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

2022-XX-XX發(fā)布2022-XX-XX實施

廣東省食品流通協(xié)會??發(fā)布

T/GDFCA081—XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由廣東省食品流通協(xié)會提出并歸口。

本文件起草單位：

本文件主要起草人：

本文件為首次發(fā)布。

II

T/GDFCA081—XXXX

黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定高效液相色譜法

1范圍

本文件描述了用高效液相色譜測定黃精和黃精提取物中薯蕷皂苷含量的方法，包括方法的原理、試

劑、儀器和設(shè)備、試樣制備、分析步驟、結(jié)果計算、精密度等要求。

本文件適用于黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定，其他植物性食品及中藥材可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣經(jīng)表面活性劑預(yù)發(fā)酵后超聲輔助提取，再經(jīng)正丁醇液-液萃取，氮吹濃縮、復(fù)溶，經(jīng)微孔濾膜

過濾，采用液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。

5試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純。水采用GB/T6682規(guī)定的一級水。

十二烷基硫酸鈉（C12H25SO4Na,CAS號:151-21-3）；

正丁醇（CH3CH23OH,CAS號:71-36-3），色譜純；

乙腈(C2H3N,CAS號:75-05-8):色譜純；

甲醇(CH3OH,CAS號:67-56-1):色譜純；

氯化鈉(NaCl,CAS號:7647-14-5):色譜純；

高氯酸(HClO4OH,CAS號:7601-90-3):分析純；

十二烷基硫酸鈉溶液（0.024mol/L）：稱取6.9g十二烷基硫酸鈉（5.1）及5.85g氯化鈉（5.5）

溶解于1L水；

薯蕷皂苷標準品（CAS號:19057?60?4），純度≥98%；

對照品溶液（500mg/L）：準確稱取5.0mg（精確至0.1mg）薯蕷皂苷標準品（5.8），用甲醇（5.4）

溶解，定容至10mL，置4℃條件下貯存，有效期7天。

6儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器；

分析天平：感量0.01mg和0.001g；

水浴鍋；

高速粉碎機；

超聲波清洗器；

1

T/GDFCA081—XXXX

離心機：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

微孔濾膜：0.22?m，有機相型；

其它實驗室常用器皿：如離心管、雞心瓶等。

7測定步驟

試樣制備

取固體樣品50g，粉碎后使其全部可通過80目標準網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中，密封，并標明標

記，于常溫下保存。

前處理

7.2.1準確稱取試樣1.0g（精確至0.001g）于50mL離心管中，加入25mL十二烷基硫酸鈉溶液（5.7）

浸泡8h后，在30℃條件下超聲輔助提取40min。

7.2.2將超聲提取完成的黃精粉末試樣補足試劑至25mL，5000r/min離心3min，轉(zhuǎn)移上清液至另一

50mL離心管中，分別加入20mL正丁醇萃取兩次，合并兩次上層萃取液至100mL平底燒瓶中。

7.2.3將萃取液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入20mL甲醇（5.4）溶解殘渣，溶液過0.22μm有機

相濾膜，用于測定。

測定

7.3.1液相色譜條件

a)色譜柱：C18色譜柱，250mm×4.6mm，5?m，或性能相當者

b)柱溫：30℃

c)檢測波長：203nm

d)進樣量：10?L

e)流速：1.0mL/min

f)流動相及梯度洗脫條件見表1。

表1流動相及梯度洗脫條件

時間/min流速（mL/min）流動相A（乙腈）/%流動相B（水）/%

0.000.44060

5.000.44060

15.000.47030

18.000.41000

20.000.44060

7.3.2液相色譜測定

7.3.2.1標準曲線的制作

分別移取對照品溶液（5.10）0.10mL，0.20mL，0.30mL，0.40mL，0.50mL，0.60mL于10mL具

塞試管中，揮盡溶劑，分別準確加入5.0mL高氯酸，于70℃水浴20min，冰水浴10min，在408nm

波長處測定吸收度，以薯蕷皂苷對照品的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，在0.1～0.6mg/

mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)不低于0.995，薯蕷皂苷標準色譜圖參見附錄A圖A.1。

7.3.2.2試樣溶液的測定

將試樣溶液注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間和吸收光譜圖定性，外標法峰面積定量。待測樣液

中的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍的則應(yīng)稀釋后重新進樣分析。

2

T/GDFCA081—XXXX

空白試驗

不稱取試樣，按7.2-7.3的步驟做空白實驗，確認不含有干擾待測組分的物質(zhì)。

8結(jié)果計算

試樣中薯蕷皂苷的含量按式（1）計算：

?×?

?=·························································(1)

?

式中：

?——試樣中薯蕷皂苷含量（mg/g）；

?——進樣溶液中薯蕷皂苷的色譜峰由標準曲線所獲得薯蕷皂苷的濃度（mg/mL）；

?——試樣溶液定容體積，20mL；

?——試樣稱樣量（g）。

注：計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

9精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。

3

T/GDFCA081—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

高效液相色譜法測定薯蕷皂苷的典型色譜圖

A.1薯蕷皂苷標準物質(zhì)色譜圖，見圖A.1。

4

T/GDFCA081—XXXX

目次

前言..................................................................................II

1范圍................................................................................1

2規(guī)范性引用文件......................................................................1

3術(shù)語和定義..........................................................................1

4原理................................................................................1

5試劑和材料..........................................................................1

6儀器和設(shè)備..........................................................................1

7測定步驟............................................................................2

8結(jié)果計算............................................................................3

9精密度..............................................................................3

附錄A（資料性）高效液相色譜法測定薯蕷皂苷的典型色譜圖................................4

I

T/GDFCA081—XXXX

黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定高效液相色譜法

1范圍

本文件描述了用高效液相色譜測定黃精和黃精提取物中薯蕷皂苷含量的方法，包括方法的原理、試

劑、儀器和設(shè)備、試樣制備、分析步驟、結(jié)果計算、精密度等要求。

本文件適用于黃精及其提取物中薯蕷皂苷含量的測定，其他植物性食品及中藥材可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣經(jīng)表面活性劑預(yù)發(fā)酵后超聲輔助提取，再經(jīng)正丁醇液-液萃取，氮吹濃縮、復(fù)溶，經(jīng)微孔濾膜

過濾，采用液相色譜分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。

5試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純。水采用GB/T6682規(guī)定的一級水。

十二烷基硫酸鈉（C12H25SO4Na,CAS號:151-21-3）；

正丁醇（CH3CH23OH,CAS號:71-36-3），色譜純；

乙腈(C2H3N,CAS號:75-05-8):色譜純；

甲醇(CH3OH,CAS號:67-56-1):色譜純；

氯化鈉(NaCl,CAS號:7647-14-5):色譜純；

高氯酸(HClO4OH,CAS號:7601-90-3):分析純；

十二烷基硫酸鈉溶液（0.024mol/L）：稱取6.9g十二烷基硫酸鈉（5.1）及5.85g氯化鈉（5.5）

溶解于1L水；

薯蕷皂苷標準品（CAS號:19057?60?4），純度≥98%；

對照品溶液（500mg/L）：準確稱取5.0mg（精確至0.1mg）薯蕷皂苷標準品（5.8），用甲醇（5.4）

溶解，定容至10mL，置4℃條件下貯存，有效期7天。

6儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器；

分析天平：感量0.01mg和0.001g；

水浴鍋；

高速粉碎機；

超聲波清洗器；

1

T/GDFCA081—XXXX

離心機：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

微孔濾膜：0.22?m，有機相型；

其它實驗室常用器皿：如離心管、雞心瓶等。

7測定步驟

試樣制備

取固體樣品50g，粉碎后使其全部可通過80目標準網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中，密封，并標明標

記，于常溫下保存。

前處理

7.2.1準確稱取試樣1.0g（精確至0.001g）于50mL離心管中，加入25mL十二烷基硫酸鈉溶液（5.7）

浸泡8h后，在30℃條件下超聲輔助提取40min。

7.2.2將超聲提取完成的黃精粉末試樣補足試劑至25mL，5000r/min離心3min，轉(zhuǎn)移上清液至另一

50mL離心管中，分別加入20mL正丁醇萃取兩次，合并兩次上層萃取液至100mL平底燒瓶中。

7.2.3將萃取液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入20mL甲醇（5.4）溶解殘渣，溶液過0.22μm有機

相濾膜，用于測定。

測定

7.3.1液相色譜條件

a)色譜柱：C18色譜柱，250mm×4.6mm，5?m，或性能相當者

b)柱溫：30℃

c)檢測波長：203nm

d)進樣量：10?L

e)流速：1.0mL/min

f)流動相及梯度洗脫條件見表1。

表1流動相及梯度洗脫條件

時間/min流速（mL/min）