傳統(tǒng)中藥制劑檢測實驗操作指南一、引言傳統(tǒng)中藥制劑作為中醫(yī)藥傳承與應(yīng)用的核心載體，其質(zhì)量直接關(guān)聯(lián)臨床療效與用藥安全。檢測實驗需結(jié)合中藥“成分多源性、劑型多樣性”的特點，嚴格遵循《中國藥典》及行業(yè)標準，從樣品前處理到結(jié)果判定全流程把控，確保數(shù)據(jù)科學可靠，為制劑質(zhì)量評價提供支撐。二、樣品前處理（一）樣品采集中藥制劑因劑型（丸劑、片劑、顆粒劑、膏劑等）差異，取樣需兼顧代表性與均一性：丸劑/片劑：取不少于20份最小包裝（如丸劑20丸、片劑20片），粉碎后混合均勻，以“四分法”縮分至檢驗用量的3倍以上。顆粒劑/散劑：混合均勻后，用潔凈取樣器從不同部位取樣，縮分后過三號篩（孔徑500μm）備用。膏劑/糖漿劑：膏劑水浴（≤60℃）融化后攪拌均勻；糖漿劑搖勻后分層取樣（避免沉淀干擾），合并后過濾除雜。（二）樣品制備1.粉碎與過篩硬質(zhì)樣品（如蜜丸、片劑）用萬能粉碎機粉碎，過三號篩（500μm）；含揮發(fā)性成分的樣品（如芳香水劑、酊劑）需低溫（≤40℃）粉碎，防止成分揮發(fā)。過篩后樣品應(yīng)無肉眼可見大顆粒，否則需再次粉碎，確保后續(xù)提取均勻。2.提取與純化溶劑提取：根據(jù)檢測項目選擇溶劑（水、乙醇、甲醇等），固液比一般為1:10~1:20（g/mL）。超聲提取（功率200~400W，溫度≤60℃，時間30~60min）或回流提取（溫度依溶劑沸點調(diào)整，時間1~2h）后，趁熱過濾（或離心，轉(zhuǎn)速3000~5000r/min，時間10~15min），收集濾液。純化處理：若樣品含雜質(zhì)干擾檢測（如多糖、蛋白），可采用固相萃取（SPE）或液-液萃?。↙LE）。例如，生物堿類成分用稀酸溶解后，加氨試液堿化，再用三氯甲烷萃取，收集有機相揮干備用。三、鑒別檢測（一）顯微鑒別適用于含藥材粉末的制劑（如丸劑、散劑），操作要點：1.制片：取樣品粉末（過四號篩，250μm）少許，加甘油醋酸試液（或水合氯醛試液），加熱透化（水合氯醛試液需邊加熱邊滴加，防止碳化），放冷后封片。2.鏡檢：顯微鏡下觀察特征顯微結(jié)構(gòu)（如淀粉粒、草酸鈣結(jié)晶、石細胞等），與對照藥材顯微特征比對。需觀察至少5個不同視野，確保特征一致。（二）薄層鑒別（TLC）1.供試品溶液制備：根據(jù)成分極性選擇溶劑（如黃酮類用甲醇，揮發(fā)油用乙醚），提取后濃縮至適宜濃度（一般1~5mg/mL）。2.對照品/對照藥材溶液：對照品用同溶劑配成0.1~1mg/mL溶液；對照藥材同法制備供試品溶液。3.點樣與展開：點樣：用微量注射器（或毛細管）點樣，斑點直徑≤3mm，間距≥8mm，避免點樣量過多導致拖尾。展開：薄層板（硅膠G板需105℃活化30min）放入展開缸，展開劑（如正己烷-乙酸乙酯-甲酸，比例需預試驗優(yōu)化）預飽和15min后，將板浸入展開劑（深度≤5mm），展開至前沿距原點8~15cm。4.顯色與檢視：取出薄層板，晾干后，根據(jù)成分性質(zhì)選擇顯色劑（如香草醛-硫酸試液用于萜類，三氯化鋁試液用于黃酮類），噴霧后加熱（105℃，5~10min）顯色，在可見光或紫外光（254nm/365nm）下檢視，與對照品/藥材斑點的Rf值（相對比移值，一般0.2~0.8）、顏色、形態(tài)比對。四、檢查項檢測（一）水分測定根據(jù)制劑類型選擇方法：烘干法：適用于不含揮發(fā)性成分的制劑（如片劑、丸劑）。取樣品（過二號篩，850μm）2~5g，平鋪于扁形稱量瓶，105℃干燥至恒重（兩次稱量差≤0.3mg），計算水分（%）=（干燥前重-干燥后重）/取樣量×100。甲苯法：適用于含揮發(fā)性成分的制劑（如酊劑、流浸膏）。甲苯需先蒸餾除水，裝置連接后加熱回流，待水層不再增加時，讀取水的體積，計算水分含量。（二）灰分測定1.總灰分：樣品（過二號篩）2~3g，置于已恒重的坩堝，緩緩熾熱至完全炭化，500~600℃熾灼至恒重，灰分重/取樣量×100為總灰分。2.酸不溶性灰分：總灰分加稀鹽酸（10%）煮沸，用無灰濾紙過濾，殘渣連同濾紙置坩堝，熾灼至恒重，計算酸不溶性灰分（%）=殘渣重/取樣量×100。（三）重金屬檢查（硫代乙酰胺法）1.樣品處理：取樣品灰分（或直接取樣品）適量，加硝酸（或鹽酸）蒸干，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2mL，水20mL，加熱溶解，轉(zhuǎn)移至納氏比色管。2.對照管：取標準鉛溶液（10μgPb/mL）2mL，同法處理。3.顯色：兩管各加硫代乙酰胺試液2mL，搖勻，放置2min后，于白紙上自上而下觀察，供試品管顏色不得深于對照管。五、含量測定（一）高效液相色譜法（HPLC）1.色譜條件：色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），或根據(jù)成分極性選擇（如氨基柱用于糖類）。流動相：甲醇-水（或乙腈-水）梯度洗脫（需預試驗優(yōu)化比例），流速1.0mL/min，柱溫30℃，檢測波長根據(jù)成分紫外吸收確定（如黃芩苷276nm，人參皂苷203nm）。2.樣品溶液制備：提取液經(jīng)0.45μm濾膜過濾（或離心，____r/min，10min），取續(xù)濾液作為供試品溶液。3.進樣與測定：精密吸取供試品溶液與對照品溶液（濃度0.1~1mg/mL）各10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，用外標法計算含量（含量=（供試品峰面積×對照品濃度）/（對照品峰面積×供試品取樣量）×稀釋倍數(shù)）。（二）紫外-可見分光光度法1.顯色反應(yīng)：根據(jù)成分選擇顯色劑（如蒽醌類用堿性酒石酸銅，黃酮類用亞硝酸鈉-硝酸鋁），嚴格控制反應(yīng)時間（如15min）、溫度（室溫）、試劑加入順序。2.測定：取顯色后的樣品溶液，以空白試劑為參比，在最大吸收波長（如蘆丁510nm）處測定吸光度，代入標準曲線（A=kc+b）計算含量。六、數(shù)據(jù)記錄與報告（一）原始記錄實驗過程需實時記錄：樣品信息（名稱、批號、來源）、儀器參數(shù)（如HPLC的流動相比例、柱溫）、操作時間（提取、干燥、熾灼時長）、觀測現(xiàn)象（如薄層斑點顏色、灰分狀態(tài)）、數(shù)據(jù)（稱量值、峰面積、吸光度）等，確?？勺匪?。（二）報告撰寫檢測報告應(yīng)包含：基本信息：樣品名稱、批號、委托單位、檢測日期。檢測項目：鑒別、檢查、含量測定的具體方法（如“薄層鑒別（以黃芩苷為對照）”“水分測定（烘干法）”）。結(jié)果：鑒別結(jié)果（“與對照藥材/品色譜一致”）、檢查項數(shù)值（如“水分3.2%，符合藥典≤9.0%要求”）、含量（如“黃芩苷含量5.8mg/g，符合標準≥5.0mg/g”）。結(jié)論：“本品按《中國藥典》2020年版一部檢驗，結(jié)果符合規(guī)定”（或“不符合規(guī)定，原因：水分9.5%，超出標準≤9.0%”）。七、注意事項1.儀器維護：HPLC泵定期排氣、清洗，色譜柱用后沖洗（如C18柱用10%甲醇-水過渡，再用純甲醇保存）；顯微鏡用后清潔鏡頭，避免試劑殘留。2.試劑管理：易揮發(fā)試劑（如乙醚、三氯甲烷）密封保存；標準品置冰箱（-20