1、,血細(xì)胞分析儀原理及散點(diǎn)圖臨床應(yīng)用,一、血細(xì)胞各通道分析原理及散點(diǎn)圖分析 二、散點(diǎn)圖案例分析,一、血細(xì)胞各通道分析原理及散點(diǎn)圖分析,血細(xì)胞分析儀提供了大量的警示信息和可供參考的研究 參數(shù)，如直方圖，DIFF散點(diǎn)圖， NRBC散點(diǎn)圖等。實(shí)驗(yàn)人員可根據(jù)這些信息從大量的標(biāo)本中挑出需要重點(diǎn)關(guān)注的,進(jìn)行涂片復(fù)檢確認(rèn)，提高工作效率，減少漏診率。,DIFF WBC/BASO NRBC,半導(dǎo)體激光 熒光染色（聚次甲基+噁嗪 ）,主要原理,FSC前向散射光：細(xì)胞大小 SSC側(cè)向散射光：復(fù)雜程度（細(xì)胞的顆粒 和細(xì)胞核等內(nèi)含物的信息） SFL側(cè)向熒光：核酸含量（DNA 、RNA),DIFF通道分析原理,4DL(陰離

2、子表面活性劑）, ,完全溶解RBC PLT 在WBC膜上打孔,溶血素中加入有機(jī)酸，與嗜酸粒細(xì)胞內(nèi)的堿 性蛋白粘附，使Eo顆粒的復(fù)雜程度增加，在 SSC顯示復(fù)雜程度是最大的。,4DS 對(duì)核酸染色 縱坐標(biāo)：側(cè)向熒光（SFL） 反映核酸含量 橫坐標(biāo)：側(cè)向散射光（SSC） 反映細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜程度 化學(xué)粘附,大分子有機(jī)酸與嗜酸 粒細(xì)胞中的堿性顆粒 發(fā)生化學(xué)粘附,嗜酸粒細(xì)胞,大分子有機(jī)酸,RNA/DNA熒光染色原理,成熟白細(xì)胞：高熒光特性 網(wǎng)織紅細(xì)胞：弱熒光特性,血小板： 成熟RBC： 原始細(xì)胞： 幼稚細(xì)胞：,微弱熒光特性 無熒光特性 極高熒光特性 極高熒光特性,熒光染色WBC分類的優(yōu)勢(shì),檢測(cè)異常細(xì)胞 提供

3、幼稚粒細(xì)胞信息（IG） 提供原始細(xì)胞信息（Other）,10,SFB溶血?jiǎng)?（酸性，低滲） 溶解RBC PLT 除嗜堿性粒細(xì)胞以外的白細(xì)胞處理成 裸核形態(tài) Baso保持原狀,縱坐標(biāo)：前向散射光（FSC） 反映細(xì)胞大小 橫坐標(biāo)：側(cè)向散射光（SSC） 反映細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜程度,嗜堿,其它有 核細(xì)胞,嗜堿粒細(xì)胞溶血素為酸性低滲溶液， Baso內(nèi)的蛋白為酸性蛋白，因此在該 溶液中受到保護(hù)，而其他有核細(xì)胞則被 溶解成裸核,WBC/BASO 通道分析原理,NRBC通道分析原理,NR溶血?jiǎng)?完全溶解RBC，PLT WBC保持原狀 NRBC溶解為裸核 NR染液對(duì)核酸染色 縱坐標(biāo)：前向散射光（FSC）,反映細(xì)胞大小

4、,橫坐標(biāo)：側(cè)向熒光（SFL）,反映核酸含量,NRBC% = NRBC# / NRBC_WBC#,出現(xiàn)有核紅時(shí),WBC的修正,紅系增生活躍時(shí)，外周血易見較多的NRBC，在WBC 計(jì)數(shù)時(shí)不被溶解，常被計(jì)入淋巴細(xì)胞中。,WBC增多對(duì)RBC計(jì)數(shù)的干擾,RBC：阻抗法RBC值含WBC WBC100*109/L時(shí)，需校正紅系統(tǒng)參數(shù) 貧血越嚴(yán)重，對(duì)RBC影響越大,血紅蛋白通道,光電比色法 SLS（十二烷基磺酸鈉）：無氰無毒,二、散點(diǎn)圖案例分析,嗜堿性粒細(xì)胞增多癥,在BASO散點(diǎn)圖上，嗜堿區(qū) 域出現(xiàn)大量散點(diǎn)，另外 DIFF散點(diǎn)圖上，中性區(qū)域 的左下方也為嗜堿區(qū)域， 也出現(xiàn)了大量的散點(diǎn)。 BASO%：儀器13.

5、4%,鏡檢13.5%,AML-M1(例1),不可信 DIFF散點(diǎn)圖顯示淋巴與單核之 間融合，有分類結(jié)果，但不可 信。 IMI散點(diǎn)圖也提示大量原始細(xì) 胞。 鏡檢發(fā)現(xiàn)有77.5%的原始細(xì)胞。 細(xì)胞表面標(biāo)志CD13和CD33陽 性，CD36陰性；為急性髓細(xì) 胞性白血病。,AML-M2,DIFF散點(diǎn)圖顯示白細(xì)胞完全融合 且不分類。 IMI散點(diǎn)圖顯示大量原始細(xì)胞和幼 稚粒細(xì)胞。 NRBC散點(diǎn)圖：紅色散點(diǎn) 鏡檢發(fā)現(xiàn)有90%的原始細(xì)胞、3% 的早幼粒細(xì)胞哦、1%中幼粒細(xì)胞。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞表 面標(biāo)志CD13和CD33陽性，為髓 細(xì)胞性白血病。,AML-M3,DIFF散點(diǎn)圖顯示白細(xì)胞完全融合且不分

6、 類。 IMI散點(diǎn)圖也顯示大量原始細(xì)胞和幼稚粒 細(xì)胞。 NRBC散點(diǎn)圖：紅色散點(diǎn) 鏡檢發(fā)現(xiàn)3%的原始細(xì)胞，91%的早幼粒 細(xì)胞、3.5%的中幼粒細(xì)胞，0.5%晚幼 粒細(xì)胞。,AML-M4,DIFF散點(diǎn)圖，白細(xì)胞區(qū)域出現(xiàn)大量 灰白色散點(diǎn)，完全融合，不分類。 大致分成兩群，一群為原始細(xì)胞， 一群為幼稚粒細(xì)胞。 IMI散點(diǎn)圖也顯示大量原始細(xì)胞和幼 稚粒細(xì)胞。,AML-M5b,DIFF散點(diǎn)圖淋巴與單核 融為一體，不分類，IMI 散點(diǎn)圖顯示大量原始細(xì)胞 和幼稚粒細(xì)胞。 鏡檢發(fā)現(xiàn)59%的原始細(xì)胞， 0.5%的早幼粒細(xì)胞，單 核細(xì)胞24.5%。,慢粒危象,DIFF散點(diǎn)圖OTHER區(qū)域出現(xiàn)大 量散點(diǎn)，中性粒細(xì)

7、胞上方也有少 量散點(diǎn)，IMI散點(diǎn)圖也出現(xiàn)大量 紅色散點(diǎn)，儀器報(bào)警提示有大量 原始細(xì)胞和幼稚粒細(xì)胞。 NRBC散點(diǎn)圖：紅色散點(diǎn) 鏡檢發(fā)現(xiàn)38.5%的原始細(xì)胞，幼 稚粒細(xì)胞和幼稚的單核細(xì)胞。酯 酶染色陰性或弱陽性，可被氟化 鈉抑制。這是一例慢粒急單變。,MDS,DIFF：淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞 之間界限不清，提示出現(xiàn)原 始細(xì)胞。中性粒細(xì)胞散點(diǎn)向 左下方延伸到嗜堿區(qū)域。 IMI：少量紅點(diǎn) NRBC：幼紅 鏡檢：原始：1%，BASO： 5%，NRBC：2.5/100WBC, 范*，女，67y。2016.11，診 斷為MDS伴原始細(xì)胞增多（10% ） DIFF散點(diǎn)圖淋巴與單核區(qū)域融 合，提示出現(xiàn)原始細(xì)胞 報(bào)

8、警提示異常淋巴細(xì)胞/原始細(xì) 胞，異淋？ 鏡檢：47%原始淋巴細(xì)胞，未見 異淋。血片POX（-）。 2018.4.MDS急淋變,MDS急淋變,急性T淋巴細(xì)胞白血病,DIFF散點(diǎn)圖淋巴與單核完 全融合，IMI散點(diǎn)圖幾乎沒 有紅色散點(diǎn)，儀器提示異 常淋巴/原始淋巴細(xì)胞。 鏡檢發(fā)現(xiàn)有59.5%的異常淋 巴細(xì)胞。 本例被診為ATL。,CLL,淋巴與單核區(qū)域分界不 清，儀器提示淋巴細(xì)胞 增多/原始淋巴。, 鏡檢：L：86.5%，幼淋 2.0%,異型淋巴細(xì)胞,異型淋巴細(xì)胞增高與 多種病毒感染及變態(tài) 反應(yīng)有關(guān)。 常見有：傳染性單核 細(xì)胞增多癥、病毒性 肺炎、病毒性肝炎、 腎綜合征出血熱等病 毒性感染。 特點(diǎn)：

9、胞體增大，胞 質(zhì)增多、嗜堿性增強(qiáng) ，細(xì)胞核母細(xì)胞化， 熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。,散點(diǎn)圖特點(diǎn)：嗜酸性粒細(xì)胞群向中性粒細(xì)胞靠攏，間距小。 原因：瘧原蟲裂殖體破裂，瘧色素從感染的血細(xì)胞中釋放出來，繼而被白細(xì)胞吞噬，吞噬 了瘧色素的白細(xì)胞側(cè)向散射光強(qiáng)度改變，顯示在散點(diǎn)圖靠近中性粒細(xì)胞一側(cè)，但也被儀器 以Eo特有的紅色標(biāo)示出來。 張時(shí)民等.血細(xì)胞分析儀測(cè)定瘧原蟲感染患者特征二例.中華臨床醫(yī)師雜志，2011,5（2）:633-635,瘧原蟲感染的散點(diǎn)圖（一）,從儀器報(bào)警EO增高或無EO分類結(jié)果的1 501份標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)有9份瘧 原蟲標(biāo)本，6份散點(diǎn)圖表現(xiàn)為EO與NEG之間間距縮小(圖1) ，3份報(bào)警白細(xì)胞散 點(diǎn)圖異常,且散點(diǎn)圖顯示EO與NEG之間無間距(圖2)。 其他1