1、。名稱解釋細胞培養(yǎng)(動物細胞培養(yǎng)):動物細胞培養(yǎng)是指通過機械或消化方法將從活體動物中取出的組織分散成單細胞懸液，然后將其置于與活體環(huán)境相似的體外環(huán)境中進行孵育和培養(yǎng)，使其能夠存活、生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。組織培養(yǎng)：從活生物體中取出活組織(多個組織塊)并在體外培養(yǎng)它們的方法。有時它指的是所有體外培養(yǎng)。器官培養(yǎng)：這是一種體外培養(yǎng)器官(通常是胚胎器官)、部分器官或器官原基的方法。合成培養(yǎng)基：根據(jù)細胞存活所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬恒定配方的合成培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基：由基本培養(yǎng)基和輔助因子(生長因子、激素、結(jié)合蛋白等)組成。)而不是血清。完全培養(yǎng)基：在合成培養(yǎng)基中加入血清后的培養(yǎng)基。接觸

2、抑制：體外培養(yǎng)的細胞在附著的基質(zhì)上連接成碎片并相互接觸后失去運動的現(xiàn)象。無限細胞系：細胞系傳代50代后，細胞生長再次停滯，在培養(yǎng)條件下，由于遺傳物質(zhì)的變化，只有部分細胞可以無限傳代。這個傳代的細胞是一個細胞系。去分化(去分化):細胞在體外不可逆地失去其原始特征。注意：去分化并不意味著完全喪失分化能力！在適當調(diào)節(jié)的信號刺激下，它仍能表現(xiàn)出分化特征。然而，隨著培養(yǎng)時間的延長，分化能力將逐漸喪失。適應(yīng)：體外培養(yǎng)時，各種分化的細胞逐漸失去其形態(tài)和功能特征，表現(xiàn)出一定的趨同性。原因：培養(yǎng)條件的改變抑制了分化細胞分裂指數(shù)：指細胞群中每1000個細胞的分裂相數(shù)細胞群體倍增時間：指培養(yǎng)細胞數(shù)量倍增的時間。原代

3、培養(yǎng)：取出體外后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。第一代培養(yǎng)細胞和10代以內(nèi)的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，制備細胞懸液，裝入兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中進行連續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。1)細胞體外培養(yǎng)中，生長方式主要有貼壁生長和懸浮生長，分別稱為貼壁細胞和懸浮細胞。2)一般來說，由貼壁細胞生長的體外培養(yǎng)細胞可分為四種類型：成纖維細胞型、上皮細胞型、游走細胞型和多系細胞型，其中前兩種是最常見的。3)體外培養(yǎng)細胞的主要生長特征：貼壁生長；接觸抑制；密度依賴性培養(yǎng)細胞分化狀態(tài)的變化；去分化(去分化)；不適應(yīng)性1.細胞培養(yǎng)的基本要求和工作方法是什么要求：1)培養(yǎng)前準備2)手術(shù)室消毒3)洗

4、手和換藥4)火焰消毒培養(yǎng)前準備的基本要求：培養(yǎng)基的選擇和無菌準備動物細胞培養(yǎng)液的類型、制備和無菌處理方法：1)標準操作程序；2)專門人員負責(zé)試劑設(shè)備；3)文化產(chǎn)品的定點儲存2.平衡鹽溶液(BBS): (1)成分：無機鹽和葡萄糖，少量酚紅。(2)功能：維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)酸堿度(3)常用：漢克斯溶液、PBS等。消化液(1)可以分散組織或細胞團。2)常用：胰蛋白酶消化液、膠原酶消化液、乙二胺四乙酸二鈉溶液、蝸牛酶等。2.消化液中胰蛋白酶、膠原酶和乙二胺四乙酸二鈉的作用原理是什么？胰蛋白酶消化液的主要功能是水解細胞間的蛋白質(zhì)并將細胞相互分離。乙二胺四乙酸二鈉溶液是一種化學(xué)螯合劑，它的溶液也叫Ver

5、sen溶液，可以在一定程度上解離細胞。乙二胺四乙酸二鈉溶液的主要功能是通過結(jié)合(螯合)細胞間物質(zhì)中的二價陽離子來破壞細胞間的細胞連接。達到分散細胞的目的。膠原酶溶液：膠原酶是一種從細胞中提取的酶，對膠原組織有很強的消化作用3.1)天然培養(yǎng)基：定義：主要指從動物體液中或通過組織分離提取的培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。優(yōu)點：營養(yǎng)豐富，滲透壓和酸堿度與體內(nèi)環(huán)境相近，培養(yǎng)效果好。缺點：成分復(fù)雜，批次差異大，易被支原體污染。2)合成培養(yǎng)基：具有恒定配方的培養(yǎng)基，根據(jù)細胞存活所需物質(zhì)的類型和數(shù)量人工合成。成分：氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其他輔助物質(zhì)。優(yōu)勢：標準化生產(chǎn)，固定組件和內(nèi)容

6、。成本低。缺點：缺乏某些成分不能促進細胞增殖和生長。3)完整的培養(yǎng)基；定義：在合成培養(yǎng)基中加入血清后的培養(yǎng)基。細胞生長培養(yǎng)基：是一種常見的培養(yǎng)基，其血清含量高達10-20%。維持培養(yǎng)基：可防止細胞死亡或緩慢生長，血清含量低，為2-5%。4)無血清培養(yǎng)基：定義：由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和輔助因子(生長因子、激素、結(jié)合蛋白等)組成。)而不是血清。用途：用于研究細胞生長因子、制備單克隆抗體、研究細胞分泌產(chǎn)物等。優(yōu)點：保證實驗結(jié)果的準確性、重復(fù)性和穩(wěn)定性，減少細胞污染，簡化純化和鑒定程序。3.完整介質(zhì)中每個組件的功能是什么？合成培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基)的組成只能維持細胞存活血清：常用的牛血清，含有多種促進細胞增殖的生

7、長因子和其他有益于細胞存活的物質(zhì)。一定量的抗生素：防止污染4.體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)培養(yǎng)的細胞有什么不同？5.討論培養(yǎng)細胞的第一代存活時間可分為幾個階段及其特點。培養(yǎng)細胞的“第一代存活時間”是指從接種到傳代培養(yǎng)的時間，不同于細胞的產(chǎn)生或倍增時間。它可分為潛伏期、指數(shù)生長期和停滯期(平臺期)1.潛伏期的特點：1)細胞適應(yīng)新環(huán)境的恢復(fù)期(包括懸浮期、貼壁期和潛伏期)；2)可能有運動活動，基本無增殖和罕見分裂期。2.指數(shù)生長期的特征：1)在細胞增殖最旺盛的時期，細胞數(shù)量呈指數(shù)增長，這是實驗研究和生產(chǎn)的主要階段。2)用細胞分裂指數(shù)和細胞群體倍增時間表示。3.停滯期特征：特征：細胞數(shù)量不再增加，仍有代謝活

8、動6.動物細胞培養(yǎng)有一系列優(yōu)點：可以簡化細胞的生長環(huán)境。在細胞存活的基礎(chǔ)上，獨立研究細胞生命活動，逐項研究細胞生存條件和細胞功能。實驗因素容易控制。為了研究一些實驗因素對細胞的生物學(xué)影響，我們只需要在培養(yǎng)基中添加或刪除這一成分。實驗結(jié)果易于觀察。利用細胞培養(yǎng)技術(shù)研究細胞生命活動的規(guī)律，可以通過各種實驗技術(shù)和方法方便地觀察、檢測和記錄。有多種細胞可供研究。能同時提供大量均勻性好的細胞，降低實驗成本。能夠大規(guī)模生產(chǎn)生物制品。包括生物產(chǎn)品或基因工程產(chǎn)品，如酶、單克隆抗體和各種疫苗。2.動物細胞培養(yǎng)的缺點：體外培養(yǎng)的動物細胞對營養(yǎng)要求較高。動物細胞生長緩慢，對環(huán)境條件有嚴格要求。體外培養(yǎng)的細胞與體內(nèi)生

9、長的細胞有或多或少的差異。(形式和功能不同)7.動物細胞培養(yǎng)實驗室的組成部分是什么？理想的培養(yǎng)實驗室可分為：制備室、緩沖室(與培養(yǎng)室相連的消毒室，作為將培養(yǎng)室與外部非消毒室隔開的緩沖區(qū))、培養(yǎng)室(一個或幾個房間)、普通實驗室和辦公室。8.討論細胞培養(yǎng)物的生長特性。培養(yǎng)細胞的壽命：指細胞在培養(yǎng)中繼續(xù)增殖和生長的時間。包括三個階段：初級培養(yǎng)階段、繼代培養(yǎng)階段和衰退階段。1.初級培養(yǎng)階段(也稱為初級培養(yǎng)，即從身體中取出組織進行接種培養(yǎng)至第一次傳代培養(yǎng)階段，通常持續(xù)1至4周)特征：二倍體，細胞分裂少，異質(zhì)性，獨立生存差。用途：藥物測試、疫苗制備等。2.傳代培養(yǎng)期(定義：將原代細胞接種到兩個或多個容器中

10、繼續(xù)培養(yǎng)，標志著進入傳代培養(yǎng)期)特點：細胞分裂和增殖旺盛，去分化，持續(xù)時間最長，10-50代。3.衰退期(定義：繼代培養(yǎng)一定世代后，細胞生命活動明顯減弱，細胞增殖緩慢或不緩慢，直至衰亡。)細胞特征：細胞形態(tài)輪廓增強，顏色變暗，細胞質(zhì)中出現(xiàn)暗顆粒結(jié)構(gòu)和空泡結(jié)構(gòu)，細胞質(zhì)突起收縮，最終凋亡減少。9.討論玻璃產(chǎn)品的清潔步驟10.淺談動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1.在生物學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用(1)在細胞生物學(xué)中的應(yīng)用研究微觀過程，如細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生長和發(fā)育、細胞營養(yǎng)、代謝和病理變化。(2)染色體分析和雜交育種在遺傳學(xué)中的應(yīng)用。(3)胚胎學(xué)應(yīng)用通過體外培養(yǎng)卵母細胞，進行體外受精、胚胎分裂和移植。(4)在病毒

11、學(xué)培養(yǎng)細胞中的應(yīng)用為病毒增殖提供了場所。(5)藥物、食品添加劑等毒性的藥理學(xué)研究應(yīng)用。(在動物細胞培養(yǎng)基中加入許多致畸和致癌物質(zhì)后，培養(yǎng)細胞的染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量會發(fā)生變化。)2.臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用(1)通過羊膜穿刺術(shù)獲得胎兒細胞，用于遺傳病和先天性畸形的產(chǎn)前診斷，培養(yǎng)后進行染色體分析，以診斷胎兒是否患有遺傳病或先天性畸形。(2)用于癌癥的早期診斷和預(yù)防。通過培養(yǎng)淋巴細胞，比較和分析它們的染色體，可以發(fā)現(xiàn)易患癌癥的病人，以便早期預(yù)防和治療。(3)對于臨床治療，據(jù)報道，在大量培養(yǎng)后，將正常骨髓細胞植入造血障礙患者體內(nèi)。(4)當用于檢測藥效的藥物具有組織特異性時，可以選擇相應(yīng)的細胞，例如，可以選擇肝細胞

12、作為用于治療肝病的藥物，并且可以選擇癌細胞作為抗癌藥物。3.在動物育種中的應(yīng)用培育新品種可以大大縮短育種進程，更經(jīng)濟有效。胚胎干細胞和多莉克隆羊的研究成果它為動物遺傳學(xué)和育種開辟了新的途徑。4.在生物產(chǎn)品生產(chǎn)中的應(yīng)用動物細胞生產(chǎn)的生物制品包括疫苗、干擾素、激素、酶、生長因子、病毒殺蟲劑、單克隆抗體等。11.血清類型：人血清、牛血清、馬血清等。成分：基本營養(yǎng)素、激素、生長因子、結(jié)合蛋白、粘附和膨脹因子等。標準：是透明的，淺黃色，無沉淀物，細菌，支原體和病毒污染。用法：逐漸解凍，熱滅活，10%濃度，冷凍保存。牛血清分為胎牛血清和小牛血清。他們的差異胎牛血清是從胎牛血清中分離出來的，能促進多種細胞系

13、的生長。它主要用于保存細胞系和體外培養(yǎng)特殊的精細細胞系，但價格昂貴。小牛血清是從新生小牛而不是母乳喂養(yǎng)的小牛中分離出來的血清。12.細胞傳代方法粘附細胞的消化通道(1)吸出或倒出瓶中的舊培養(yǎng)液。(2)加入適量消化液進行消化。(3)顯微鏡檢查后，發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)收縮，細胞間隙增大，應(yīng)立即停止消化。(4)吹瓶壁細胞制備細胞懸液。(5)計數(shù)并接種到新的培養(yǎng)瓶中。懸浮細胞主要通過離心進行傳代培養(yǎng)將細胞連同培養(yǎng)液一起轉(zhuǎn)移到離心管中，以800-1000rpm離心5分鐘，取出上清液，向離心管中加入新的培養(yǎng)液，用吸管吹成細胞懸液，然后進行傳代接種。13、培養(yǎng)細胞的觀察和檢測技術(shù)1)觀察培養(yǎng)基顏色和透明度的變化。正常

14、培養(yǎng)基的酸堿度在7.2至7.4之間，呈粉紅色，澄清透明。培養(yǎng)中細胞代謝產(chǎn)生的酸性產(chǎn)物會降低培養(yǎng)液的酸堿度，使顏色變淺變黃。每2 3天或3 4天更換一次液體。2)倒置顯微鏡下觀察細胞生長。在原代細胞培養(yǎng)中，首先可以看到細胞從組織塊的中間邊緣“生長出來”。成纖維細胞是最容易生長的細胞。80%的細胞在瓶底生長，應(yīng)該及時傳遞。3.單元格形狀的變化生長良好的細胞：高透明度，強折射和不清晰的輪廓。細胞生長狀態(tài)不良的細胞：細胞輪廓增強，細胞折射減弱，邊緣不規(guī)則，細胞質(zhì)中出現(xiàn)液泡、脂滴和顆粒狀物質(zhì)，細胞間隙增大，細胞表面及周圍出現(xiàn)絲絮。采取的措施：液體置換、污水排放和廢物。4.微生物污染混濁的培養(yǎng)基和漂浮的菌

15、絲。支原體污染：生長緩慢，細胞質(zhì)顆粒增多，培養(yǎng)基不斷混合。細胞交叉污染?；瘜W(xué)污染。14.去分化和不相容性的區(qū)別“去分化”是不可逆的(染色體改變)。“適應(yīng)”可以再次被誘導(dǎo)(培養(yǎng)條件的改變)應(yīng)注意去分化：去分化并不意味著完全回到胚胎期的原始細胞狀態(tài)。例如，高分化神經(jīng)細胞和心肌細胞的增生活性不能恢復(fù)，但已經(jīng)具備的生物電活性特征不會完全喪失。能再次顯示分化特征。例如，當在空氣-液體界面上培養(yǎng)時，表皮細胞可以分化成包含大量角蛋白絲的角蛋白細胞和內(nèi)皮細胞，但是這種能力將隨著培養(yǎng)時間的延長而逐漸喪失。15、谷氨酰胺在培養(yǎng)基中的主要作用？配制液體時應(yīng)注意哪些問題？功能：在細胞代謝中起重要作用，是細胞合成核酸和

16、蛋白質(zhì)的必需氨基酸(如果缺乏，細胞會因生長不良而死亡)配制液體時：谷氨酰胺在溶液中是不穩(wěn)定的，因此應(yīng)儲存在-20的冰箱中，并在使用前加入培養(yǎng)液中。當含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4冰箱中保存2周以上時，應(yīng)再次添加原谷氨酰胺。第二章1.細胞冷凍的原理是什么細胞冷凍保存的原理：緩慢冷凍和快速融化2)加入冷凍保護劑(常用：甘油或二甲基亞砜(DMSO)主要原因如下：1)冷凍速度過快，細胞內(nèi)的水結(jié)冰形成冰晶，導(dǎo)致細胞膜和細胞器的破壞和細胞死亡。冷卻速度越快，冰晶的危害就越大。2)細胞懸浮在溶液中，隨著溫度的降低，細胞外的水首先凍結(jié)，從而增加未凍結(jié)溶液中電解質(zhì)的濃度。如果細胞長時間暴露在如此高的溶質(zhì)溶液中，細胞膜上的脂質(zhì)將被破壞，細胞將會滲漏。防凍劑的作用機理：1)防凍劑容易與溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點，減少冰晶的形成；2)未冷凍溶液中電解質(zhì)的濃度