1、實驗2 分離以尿素為氮源的微生物,土壤中的某些細(xì)菌 尿素 NH3 中性 堿性 酚紅顏色： 黃色 紅色,任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？,利用以尿素為唯一氮源 的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。,（1）將土壤中的固氮菌分離出來,（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來,舉一反三,（3）篩選出抗青霉素的微生物,（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物,選擇培養(yǎng)基,配制培養(yǎng)基,尿素培養(yǎng)基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 瓊脂糖 0.5g 酚紅 0.25g 水 25mL 尿素溶液 10mL,選擇培養(yǎng)基,瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物,該培養(yǎng)基如何滅菌？,尿素溶液用G6玻璃漏斗過

2、濾，其他用高壓蒸汽滅菌。,2、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基 對土壤中的細(xì)菌確實具有選擇作用，你 該如何設(shè)計實驗。,思考：,配制培養(yǎng)基,尿素培養(yǎng)基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 瓊脂糖 0.5g 酚紅 0.25g 尿素 10ml,選擇培養(yǎng)基,實驗組,3、請你提供一種方法，判斷分解 尿素的細(xì)菌確實能將尿素分解成氨。,思考：,方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基 中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若 指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。,二、實驗?zāi)康?,使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶),通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化

3、學(xué)反應(yīng)),統(tǒng)計被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量,三、實驗步驟 （1）制備細(xì)菌懸液 制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液,1個99ml無菌水 2個4.5ml無菌水,得10-2, 10-3, 10-4的菌懸液,1g土壤,（2）倒平板,需要倒3個LB平板，9個尿素平板,每個稀釋度 3個LB對照平板 3個尿素平板(平行重復(fù)組),接種,取0.1ml菌懸液,涂布分離,高濃度低濃度，換槍頭,低濃度高濃度，可不用換槍頭,涂布分離,37倒置培養(yǎng),按濃度捆成一摞,恒溫37培養(yǎng),三、實驗中涉及到的一些問題：,（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）,（二）此實驗

4、用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？,（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對尿素分解能力的高低？,（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法？,腐殖質(zhì)豐富的土壤，或哺乳動物排泄物的地方取樣。,水、無機鹽、碳源、尿素、酚紅、瓊脂糖,培養(yǎng)基紅色的深淺,涂布分離法，用血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù),利用血細(xì)胞計數(shù)板的缺點:,不能區(qū)分死菌與活菌,不適于對運動的細(xì)菌計數(shù),需要相對高的細(xì)菌濃度,個體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察,三、實驗中涉及到的一些問題：,（五）用不同濃度涂布分離法計數(shù)時，發(fā)現(xiàn)菌落過密，該如何進(jìn)一步操作？,重復(fù)性原則,對照原則,做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度 （以培養(yǎng)皿中20個左右菌

5、落為宜）,（六）實驗設(shè)計要遵循的原則：,1、土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們試圖探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如表所示，實驗步驟如圖所示。請分析回答：,（1）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選 ，這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。 （2）“目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的 和 ，實驗需要振蕩培養(yǎng)，原因是,目的菌,選擇,尿素,為目的菌提供氧氣,葡萄糖,（3）圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時，常采用 的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。 （4）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實驗時，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落。A同學(xué)的實驗結(jié)