1、間充質(zhì)干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究及應(yīng)用,1,.,干細(xì)胞?（Stem Cell） 是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞. 醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞”！,2,.,近年來干細(xì)胞論文數(shù)量高速增長(zhǎng)，名列醫(yī)學(xué)領(lǐng)域前茅。,PUBMED數(shù)據(jù)庫(kù)干細(xì)胞文章數(shù)量,干細(xì)胞研究也成為衡量一個(gè)國(guó)家生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)發(fā)展水平的重要指標(biāo)，世界大部分發(fā)達(dá)國(guó)家將其列為國(guó)家重大科技發(fā)展方向。將干細(xì)胞技術(shù)評(píng)為世界十大科學(xué)成就之一，是未來十年最有可能獲得諾貝爾獎(jiǎng)的研究方向。,3,.,干細(xì)胞的魅力！,一旦身體需要，這些細(xì)胞可按照發(fā)育途徑通過分裂而產(chǎn)生分化成熟的體細(xì)胞。也許在某一天，人們突然發(fā)現(xiàn)，人體器官可以在實(shí)驗(yàn)室按

2、需要，按流程生產(chǎn)，血細(xì)胞、腦細(xì)胞、骨骼、心肌細(xì)胞、肝臟、神經(jīng)等的更換都不是問題，即使患上白血病、帕金森、癌癥這些不治之癥也能絕處逢生。,4,.,干細(xì)胞的應(yīng)用領(lǐng)域,研究發(fā)現(xiàn)，目前干細(xì)胞移植治療可以應(yīng)用的領(lǐng)域包括眾多目前無法通過有效手段治愈的疾病。 血液系統(tǒng)疾病，如白血病、貧血、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和黑色素瘤等。 神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、亨廷頓氏病等。 心臟疾?。喊ㄐ募」Ｋ篮吐孕墓δ苷系K等導(dǎo)致的病理?yè)p傷性疾病等。 腸道疾病：炎癥性腸?。║C、CD）、放射性腸炎、肝移植相關(guān)性腸病等。,5,.,干細(xì)胞國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展,09年美國(guó)率先解禁干細(xì)胞研究。 自20世紀(jì)80年代初美國(guó)科學(xué)

3、家首次提出將臍帶血用于干細(xì)胞移植，那么曾經(jīng)被視作廢物丟棄的“臍帶血”隨即變廢為寶，震驚世界。 2013年12月1日，美國(guó)哥倫比亞大學(xué)醫(yī)學(xué)研究中心的科學(xué)家首次成功地將人體干細(xì)胞轉(zhuǎn)化成了功能性的肺細(xì)胞和呼吸道細(xì)胞。 2014年4月，愛爾蘭首個(gè)可用于人體的干細(xì)胞制造中心獲得愛爾蘭藥品管理局的許可成立。 我國(guó)是干細(xì)胞研究大國(guó)，世界上貢獻(xiàn)最大的國(guó)家是美國(guó)、德國(guó)、日本、英國(guó)，我國(guó)排居世界第五名，但是在臨床應(yīng)用上我國(guó)排居第一名。 十三五計(jì)劃“干細(xì)胞與轉(zhuǎn)化研究” 重點(diǎn)專項(xiàng)啟動(dòng)。,6,.,干細(xì)胞分類,根據(jù)發(fā)育階段分為 胚胎干細(xì)胞（ESC） 成體干細(xì)胞（SSC） 根據(jù)發(fā)育潛能分為三類： 全能干細(xì)胞：受精卵 多能干

4、細(xì)胞：胚泡、MSC、胎兒組織 單能干細(xì)胞：存在已分化組織的未分化細(xì)胞,7,.,什么是間充質(zhì)干細(xì)胞？,間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是指中胚層來源的具有多向分化潛能的一類多能型干細(xì)胞的統(tǒng)稱。它是干細(xì)胞家族的重要成員。,8,.,MSC來源？,脂肪、骨髓、臍帶、牙髓、胎盤、羊水、真皮、肌肉、胎肝,06年我國(guó)首次從新生兒廢棄的臍帶中得到一種多能干細(xì)胞稱為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（UC-MSC）,9,.,MSC優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)？,MSC是干細(xì)胞臨床研究中極為受重視的一類！ 來源豐富。 制備簡(jiǎn)單:易獲取、易分離、可建系、可大規(guī)模擴(kuò)增、凍存后生物學(xué)效能損失少。 多能性：定向分化、修復(fù)能力

5、。 低免疫源性（治療載體）、高安全性。,10,.,MSC的生物學(xué)特性,1.形態(tài)特征及生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)，呈梭形或紡錘形，旋渦狀，有種屬差異，易受培養(yǎng)方法和條件影響。 2.具有強(qiáng)大的增殖能力和分化潛能，可以定向分化為肌細(xì)胞，肝細(xì)胞，成骨細(xì)胞，成軟骨細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞。 3.表面標(biāo)志及鑒定： 表達(dá)表面分子CD90、CD71、CD44， 缺乏造血干細(xì)胞標(biāo)志： CD34、CD45、CD11b。 4.低免疫原性、免疫調(diào)節(jié)功能。 5.易于分離培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增，仍保留干細(xì)胞特性。,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,11,.,MSC制備及質(zhì)控指標(biāo),12,.,MSC的制備,13,.,貼壁分離法（全骨髓法或一步法） 密度

6、梯度離心法 差速貼壁 免疫磁珠法,MSC分離培養(yǎng)方法,14,.,MSC的定向誘導(dǎo)分化,15,.,MSC的定向誘導(dǎo)分化,16,.,MSC的定向誘導(dǎo)分化,17,.,MSC的定向誘導(dǎo)分化,18,.,MSC的定向誘導(dǎo)分化,19,.,MSC與相關(guān)因子,TGF：成骨 IGFI：成軟骨 BMP：成骨成脂肪 FGF：促增殖 其他因子：,20,.,MSC鑒定標(biāo)準(zhǔn),2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)明確提出間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，按照國(guó)際習(xí)慣，一篇關(guān)于間充質(zhì)干細(xì)胞的文章，必須提供滿足這三條鑒定標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)，以證明文章所研究的細(xì)胞是真正的間充質(zhì)干細(xì)胞。 貼壁生長(zhǎng)， 細(xì)胞表面表達(dá)CD105、CD73和CD90（95%，F(xiàn)SC檢

7、測(cè)）； 不表達(dá)CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79或CD19、HLA-DR（2%，F(xiàn)SC檢測(cè)）； 五陽（CD29，44，73，90，105）四陰（CD34，45，31，HLA-DR） 能分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞。,21,.,MSC鑒定,生長(zhǎng)曲線：比腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)慢 成瘤特性：軟瓊脂培養(yǎng)是否形成集落 細(xì)胞周期檢測(cè)：主要在G1期，G2期少 病原體檢測(cè) 轉(zhuǎn)錄組檢測(cè),22,.,MSC研究思路,23,.,MSC臨床應(yīng)用現(xiàn)狀及前景,GVHD（移植物抗宿主?。?神經(jīng)損傷 骨組織病 免疫性疾病 肝硬化 角膜損傷 燒燙傷、 心血管疾病 糖尿病 卵巢早衰 抗衰老等的再生性生物治療中。 此外

8、，MSCs易于外源基因轉(zhuǎn)染、表達(dá)及明顯組織特異性，是一種新型的基因治療靶細(xì)胞。,24,.,已經(jīng)批準(zhǔn)的MSC藥物,25,.,干細(xì)胞風(fēng)險(xiǎn)？,干細(xì)胞的免疫排斥反應(yīng)、非定向分化和致癌性一直是干細(xì)胞大規(guī)模應(yīng)用的一大阻礙。 胚胎干細(xì)胞的來源途徑是以破壞胚胎為代價(jià)，這受到了倫理學(xué)家、宗教界的質(zhì)疑與反對(duì)。 成體干細(xì)胞應(yīng)用則涉及患者的知情同意、治療前后的解釋和異體細(xì)胞使用權(quán)等問題。 事實(shí)上目前許多醫(yī)院或者企業(yè)的干細(xì)胞來源是流產(chǎn)的嬰兒或者剩余胚胎。通過私下與婦產(chǎn)科達(dá)成某項(xiàng)協(xié)議而獲得胚胎干細(xì)胞。這種獲得方式即使作為科研也必須通過倫理審查，而如果流產(chǎn)胎兒是成為企業(yè)營(yíng)利的“原材料”，幾乎不可能會(huì)通過倫理審查。 目前為止

9、除了造血干細(xì)胞治療血液疾病，許多其他領(lǐng)域還尚未徹底證明其治療效果及安全性，干細(xì)胞研究與臨床應(yīng)用之間還有較大差距。,26,.,干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)化？,2003年，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院組織工程研究中心與中國(guó)藥品生物制品檢定所制訂出我國(guó)第一個(gè)干細(xì)胞藥物制劑的制備、檢定標(biāo)準(zhǔn)-間充質(zhì)干細(xì)胞制造及檢定規(guī)程 。 2009年3月2日干細(xì)胞治療技術(shù)被列入第3 類醫(yī)療技術(shù)，由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)技術(shù)審定和臨床應(yīng)用管理。 事實(shí)上我國(guó)許多醫(yī)院都在開展干細(xì)胞治療技術(shù)，卻未經(jīng)臨床試驗(yàn)，更沒有經(jīng)過見過部門的認(rèn)證，風(fēng)險(xiǎn)極大。 有資質(zhì)：三甲醫(yī)院 禁盈利：不得收取費(fèi)用，不得發(fā)布廣告。 有保障：受試者知情權(quán) 干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)鏈 我國(guó)干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)鏈分為上游（干細(xì)胞存儲(chǔ)）、中游（干細(xì)胞增殖及干細(xì)胞新藥研發(fā)）、下游（干細(xì)胞治療）。目前干細(xì)胞業(yè)務(wù)主要