1、細(xì)胞工程,植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),動(dòng)物細(xì)胞融合,單克隆抗體的制備,核移植,植物細(xì)胞工程,動(dòng)物細(xì)胞工程,理論基礎(chǔ),細(xì)胞的全能性,其他動(dòng)物細(xì)胞技術(shù)的基礎(chǔ),一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù),（一）細(xì)胞的全能性 1、概念：生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能。 2、原因：受精卵,有絲分裂,體細(xì)胞,含全套遺傳基因,3、全能性的程度,（1）受精卵的全能性最高,4、形成不同組織、器官原因：,基因選擇性表達(dá),5、條件：,（1）離體狀態(tài) （2）提供營養(yǎng)物質(zhì)、激素,（4）體細(xì)胞：分化程度低的分化程度高的 分裂能力強(qiáng)的分裂能力弱的,（二）植物組織培養(yǎng)技術(shù)(重點(diǎn) 理解 ),1、原理：植物細(xì)胞的全

2、能性 2、過程： 外植體 愈傷組織 根、芽 植物體,再分化,脫分化,避光,需光,植物激素： 細(xì)胞分裂素、生長素,分化培養(yǎng)基,人工種子：胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽經(jīng)人工薄膜包裝而得。,雜種細(xì)胞,愈傷組織,雜種植株,植物細(xì)胞A,植物細(xì)胞B,原生質(zhì)體A,原生質(zhì)體B,正在融合的原生質(zhì)體,去細(xì)胞壁,再生細(xì)胞壁,植物組織培養(yǎng),植物細(xì)胞融合,植物體細(xì)胞雜交過程,4、優(yōu)勢：（與有性雜交方法比較）,克服植物遠(yuǎn)緣雜交不親和性,2、原理： 細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞全能性,（三）植物體細(xì)胞雜交,3、原理：,物理方法離心、振動(dòng)、電激,化學(xué)方法聚乙二醇（PEG）,動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官,胰蛋白酶,10代細(xì)胞,傳代培養(yǎng)

3、,無限傳代,單個(gè)細(xì)胞,二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),1、過程,不易傳下去,增殖逐漸緩慢以致停止,細(xì)胞的核型發(fā)生變化,使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。,常見現(xiàn)象：細(xì)胞貼壁、接觸抑制,（1）無菌、無毒的環(huán)境 （2）營養(yǎng) （3）溫度和PH （4）氣體環(huán)境：,（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）,補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì),36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。,O2作用：進(jìn)行 呼吸，提供能量 CO2作用：維持培養(yǎng)液的PH值,（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）,有氧,95%空氣和5% CO2,二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),2、條件,比較：,培養(yǎng)基特有成分

4、,培養(yǎng)基性質(zhì),原理,比較項(xiàng)目,細(xì)胞的全能性,蔗糖、植物激素,固體培養(yǎng)基,植物組織培養(yǎng),葡萄糖、動(dòng)物血清,液體培養(yǎng)基,細(xì)胞增殖,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),1、原理：,三、動(dòng)物細(xì)胞核移植,2、分類：,動(dòng)物細(xì)胞核的全能性,胚胎細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植,供體細(xì)胞（供核）,細(xì)胞培養(yǎng),體細(xì)胞,卵母細(xì)胞 （減中期：供質(zhì)）,去核,無核卵母細(xì)胞,核移植,重組細(xì)胞,重組胚胎,胚胎移植,代孕母體,新個(gè)體,分娩,激活,3、過程：,完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程,含有促使體細(xì)胞細(xì)胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng),四、動(dòng)物細(xì)胞融合,1、原理：,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,滅活的病毒(與植物細(xì)胞雜交不同點(diǎn)),離心、振動(dòng)、電刺激；,聚乙二醇；,2、誘導(dǎo)融合的方法

5、：,細(xì)胞A,細(xì)胞B,雜交細(xì)胞,滅活的病毒,物理法 化學(xué)法,仙臺病毒等,3、過程：,四、動(dòng)物細(xì)胞融合,五、單克隆抗體制備過程,細(xì)胞融合、篩選,足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群,單克隆抗體,用特定的選擇培養(yǎng)基篩選,克隆化培養(yǎng)、專一抗體檢測,1、過程,1、過程,B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)融合,B-B細(xì)胞,B-瘤細(xì)胞,瘤-瘤細(xì)胞,選擇培養(yǎng),雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,雜交瘤細(xì)胞,體外培養(yǎng),單克隆抗體,八單克隆抗體,五、單克隆抗體制備,2、原理：,3、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：,特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備,骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，一種B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。,4.應(yīng)用：,作為診