實(shí)驗(yàn)一 含質(zhì)粒的大腸桿菌的接種、培養(yǎng)與菌種保藏.ppt_第1頁
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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)一 含質(zhì)粒的大腸桿菌的接種、培養(yǎng)與菌種保藏,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟； 了解常見滅菌、清毒基本原理及方法，掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法； 了解菌種保藏的基本原理，掌握菌種保藏方法和無菌操作技術(shù)。,二、實(shí)驗(yàn)原理 培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子和水。LB培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。 微生物接種技術(shù)是進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)和相關(guān)研究的基本操作技能，分為斜面接種、液體接種、固體

2、接種和穿刺接種等。,三、實(shí)驗(yàn)材料 大腸桿菌DH5 含pET32質(zhì)粒的大腸桿菌DH5 含pET32-CaM5質(zhì)粒的大腸桿菌DH5 四、試劑 酵母浸膏 、蛋白胨、NaCl,五、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 配制LB液體培養(yǎng)基 稱取胰蛋白胨0. 5 g，酵母提取物0.25 g，NaCl 0. 5 g于100 ml的燒杯中，加入50ml蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，然后分裝到3個(gè)三角瓶中，每瓶15ml，用雙層錫紙包扎好。 2. 培養(yǎng)基的滅菌與消毒 高溫高壓滅菌配好的培養(yǎng)基(121 ，20min)，備用。 3.接種和培養(yǎng) 滅菌完成后，當(dāng)培養(yǎng)基溫度降至55-60時(shí)，每瓶加入15l氨芐青霉素母液(終濃度為100 g/ml )，搖勻后，分別接種三種菌種，貼上標(biāo)簽；置于搖床中37 振蕩培養(yǎng)過夜。,六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察 第二天取出培養(yǎng)物，觀察不同菌種生長情況，并記錄。 七、菌種的保藏（示范） 短期保藏、長期保藏 八、實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求： 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖片需要標(biāo)注自己的樣品的位置，并對結(jié)果進(jìn)行分析； 2、每個(gè)實(shí)驗(yàn)后的思考題必須認(rèn)真完成。 考

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