1、1實驗室設(shè)置和儀器設(shè)備2實驗基本操作3培養(yǎng)基成分和準備4培養(yǎng)條件選擇，植物細胞工程實驗室和基本操作，1，1實驗室設(shè)置和儀器設(shè)備，實驗室是組織培養(yǎng)研究的主要場所，必須滿足清潔、培養(yǎng)基準備、儲存、無菌操作、培養(yǎng)、鑒定等多種工作。2，1基本實驗室，1.1洗衣間根據(jù)工作量大小確定大小，一般面積調(diào)整為30-50m2。實驗室一側(cè)設(shè)置專用水槽，用于清洗玻璃器皿。中央實驗臺為了清潔小型玻璃器皿，需要配置2個水槽。工作量大的話，可以買一臺洗衣機。為了洗滌高清潔度的玻璃器皿，準備1-2個洗滌劑桶。此外，還應(yīng)配置落水架、干燥架、櫥柜、超聲波清洗機等。地板要耐潮濕，排水好。3，4，面積60平方米左右，配備的主要儀器設(shè)

2、備有冰箱、天平、微波爐、pH米、培養(yǎng)基分選機、藥柜、機械場、吸入泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移動液管、燃燒，冰箱的體積天平要徐璐另減。配備1.2培養(yǎng)基配方室，5，6，實驗臺，高壓滅菌鍋，排氣滅火設(shè)備，細菌過濾設(shè)備，干熱消毒柜，電爐等。滅菌鍋的選擇應(yīng)根據(jù)不同的要求選擇不同種類的滅菌鍋。普通實驗室可以選擇小型醫(yī)用便攜式高壓滅菌鍋，大型實驗室可以選擇控制立式自動壓力和溫度的滅菌鍋。生產(chǎn)性實驗室可以選擇大型臥式豐口惠鍋。如果沒有條件，上述工作室可以合并成一個準備室。設(shè)備的安裝和排列要合理，房間要寬敞、明亮、通風(fēng)好，地板要容易清潔和防滑。1.3消毒室，7，8，無菌工作室主要用于實驗材料接種工作，

3、因此也稱為接種室。通常由內(nèi)外兩個車廂組成，外部是緩沖室，起到準備工作和防止污染的作用。緩沖室的門要和接種室的門交錯，兩扇門也不要同時打開，以免無菌室因門和人的出入而進入雜菌。緩沖室應(yīng)該設(shè)置水槽、實驗臺、鞋帽架、櫥柜、紫外線等。無菌工作間的內(nèi)壁要用塑料鋼板或瓷磚裝飾，工作人員進入工作間前要穿消毒過的工作服和拖鞋。室內(nèi)應(yīng)配備超凈工作臺、紫外線燈、解剖鏡、各種接種器等。1.4無菌工作室，9，10，為了控制培養(yǎng)室的溫度、照明時間和強度，培養(yǎng)室的房間要留下通氣窗，而不是窗戶，安裝排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，照明由熒光燈控制。天花板和內(nèi)壁最好用塑料鋼板裝飾。地板是用磨石或瓷磚鋪的，通常要分成兩格。一個是照

4、明培養(yǎng)室，一個是暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室以外要有預(yù)備間或走廊。培養(yǎng)室應(yīng)配備培養(yǎng)基、旋轉(zhuǎn)床、搖床、照明培養(yǎng)基、生化培養(yǎng)基、自動控制器等。日光燈一般為40W，固定在培養(yǎng)基的側(cè)面或架子下面，每層20厘米，照明強度為2000-3000lx。1.5培養(yǎng)室，11，12，13，2輔助實驗室，2.1鑒定室細胞學(xué)鑒定室其功能是對培養(yǎng)材料的細胞學(xué)鑒定和研究。各種光學(xué)儀器要清潔、明亮、干燥，以免被濕氣和灰塵污染。需要配置各種顯微鏡、照片系統(tǒng)等。生化分析室應(yīng)建立相應(yīng)的分析實驗室實驗室，以便以細胞產(chǎn)品培養(yǎng)為主要目的的實驗室隨時對培養(yǎng)物的有效成分進行取樣。離心機、酶聯(lián)免疫檢測器、天平、PCR儀器等。14，15，為試管苗提供適合生

5、長的環(huán)境條件。，2.2，溫室，16，(1)清潔液準備，2實驗基本操作，1。洗滌技術(shù)，17，A，新購買的玻璃儀器表面經(jīng)常附著玻璃堿性物質(zhì)，用0.5洗滌劑清洗后，可用自來水清洗干凈，然后浸泡在12鹽酸中，(2)洗滌方法，18，首先用自來水用無污水沖洗，然后用適當(dāng)?shù)乃⒆诱合礈靹┣逑?，或浸泡?.5清洗劑中的超聲波清洗(有色器皿渡邊杏超聲波)否則再洗，再洗后仍掛水珠的話，要用洗滌劑浸泡幾個小時(或用洗滌劑擦拭后)再洗。B，使用的玻璃儀器清洗，19，聚乙烯，聚丙烯等制成的塑料碗越來越多地用于生化實驗。第一次使用塑料碗時，用8mol/L尿素(用進安鎮(zhèn)鹽酸pH=1調(diào)節(jié))清洗，然后用非熱水、1 mol/L K

6、OH、非熱水清洗，然后用103 mol/L EDTA去除金屬離子污染后，可以用非熱水徹底清洗，C、清潔塑料碗，20e，殺菌過濾器用清水沖洗后，用洗滌劑沖洗，用清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗，干燥后準備。D，金屬用品洗滌，21，(a)，滅菌工作很重要。首先，真菌和無菌的概念必須有菌：有菌：暴露在空氣中的物體至少其表面有菌。植物的表面，超凈工作臺的臺面，未處理的工具，手等。無菌：高壓高溫處理(工具、碗、培養(yǎng)基等)物理或化學(xué)處理火上烤的物體；健康的動植物不與內(nèi)部和外部表面接觸的組織內(nèi)部可能是無菌的(有時有內(nèi)生菌，但不影響培養(yǎng)，也沒有污染)。2.滅菌，22，1，物理方法：干熱，濕熱，濾光器(0.25微米)

7、紫外線燈，超聲波等。2、化學(xué)方法：使用酒精、次氯酸鈉、汞上升、漂白、高錳酸鉀、過氧化氫、福爾馬林等殺菌劑或抗生素。(2)、滅菌法、23、干熱滅菌玻璃器皿、器械濕熱消毒器、蒸餾水培養(yǎng)室、各種滅菌方法和使用范圍，24適用于玻璃器皿和金屬器具的滅菌。操作方法：150，40min或120，120min，孢子菌，160，90120min，(1)干熱滅菌，25，適用于各種碗，培養(yǎng)基，碗，蒸餾水，棉塞(2)濕熱滅菌，26，培養(yǎng)基中的滅菌一般采用高壓高溫處理，但培養(yǎng)基中的部分成分遇到高溫分解(如部分生長調(diào)節(jié)劑GA3、玉米素等)時需要，此外，酶、血清等也要過濾滅菌方法。以一定濃度配制生長調(diào)節(jié)劑或酶，用注射器注入

8、微孔膜，注入濾膜孔徑0.220.45微米。制作培養(yǎng)基時，將培養(yǎng)基的高壓滅菌降低到50多歲左右時，加入適量的激素，然后分配。(3)過濾滅菌，27，主要利用紫外線燈照射，適用于實驗室空氣、控制臺等，滅菌時間為2030min。注：關(guān)燈，5min后進入。初順工作臺要關(guān)燈，然后打開風(fēng)扇。(4)射線滅菌，28，通過火焰燃燒達到滅菌目的，適用于接種機滅菌。(5)適用于火焰燃燒滅菌，29，外植體，實驗儀器，工作表面，皮膚等。幾種常用消毒劑的效果比較，(6)消毒劑，30，長期不用的培養(yǎng)室或接種室要熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。甲醛的使用量通常以每立方米2-6毫升計算，高錳酸鉀的使用量是甲醛的一半。室內(nèi)準備就緒

9、后，將高錳酸鉀放入陶瓷碗或燒杯(最好將報紙放在碗或杯子下清洗)，甲醛也倒入碗或杯子，立即出門關(guān)門。幾秒鐘后，甲醛溶液沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀作為氧化劑，與甲醛的一部分作用時，氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱量可以使剩余的甲醛揮發(fā)為氣體。熏蒸滅菌，31，甲醛熏蒸接種室至少要在使用前進行24小時，熏蒸后密封4小時以上后進入室內(nèi)。甲醛對人的眼睛和鼻子有強烈的刺激作用。因此，使用前可以用氨中和。取與甲醛等量的氨，倒入其他燒杯，迅速放入熏蒸室，甲醛和氨發(fā)生中和反應(yīng)，消除甲醛氣味，減少對人體的刺激作用。使用氨水要在工作2小時前完成。有材料的培養(yǎng)室還可以使用乙二醇加熱熏蒸，32，人為因素(職員本身):工作服、帽子、口罩和擦酒精的

10、手。物品元素，碗和工具，培養(yǎng)皿：熱壓玻璃器皿：干熱(干熱箱子)或干燥接種機構(gòu)：用CCL4布擦拭濕布擦拭75%酒精，培養(yǎng)基：濕熱，培養(yǎng)材料，外部細菌：用水沖洗化學(xué)藥品，處理內(nèi)部細菌，以及注意：為了減少滅菌效果，桌子上的用品放得太多或重疊渡邊杏。3.關(guān)閉紫外線燈，打開風(fēng)扇，經(jīng)過5-10min進入緩沖室，用75%的手和胳膊更換無菌服、帽子、口罩。進入接種室。(注：沒有特殊情況，盡量不要從工作臺上下來)，用34，4，7075的酒精擦臺面，消毒雙手。實驗儀器也要用酒精消毒。點燃酒精燈，將金屬器具燒成火焰，冷卻后使用。注：所有工作應(yīng)位于火焰附近，并通過燃燒進行。金屬器具不能過度燃燒，以防退火。雙液管燃燒渡

11、邊杏，瓶口、塑料材料、橡膠材料培養(yǎng)后，火焰過了太久就會渡邊杏。35，5，采水沖洗(至少30min)的外植體用一定的消毒劑消毒，用無菌水沖洗34次，放在無菌培養(yǎng)皿中，放在酒精等火焰下，用無菌接種機分離、切割或其他處理。36，6，打開培養(yǎng)瓶，瓶口在火焰中旋轉(zhuǎn)，用鑷子將培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)基上，燒鑷子，燒瓶口，蓋住瓶塞。7、用酒精擦工作臺和手。進行下一輪工作。37，注意(1)培養(yǎng)時動作要準確敏捷，但不要太快，不要讓空氣流動，要增加污染機會。(2)用手接觸消毒柜后，會渡邊杏。接觸時，必須用火焰消毒或更換為備件。(3)為了方便，工作臺上的用品要有合理的布置，原則上右手使用的東西要放在右邊，左手用品放在左邊，

12、酒精等放在中央。(4)工作要從頭到尾保持一定的順序，不要太早暴露在空氣中，直到組織或細胞無法處理為止。(。同樣，在不使用培養(yǎng)液之前，不要太早打開瓶子。使用后不再重復(fù)使用的話，立即閉上瓶口，直立起來會增加滅菌的機會。38，(5)在吸收營養(yǎng)液、細胞顯液及其他各種溶液時，應(yīng)分別使用吸管，并渡邊杏擴大污染或混用以防止細胞交叉污染。(六)工作中對操作區(qū)說話或者咳嗽，不能把細菌或支原體吐在工作臺上，以免造成污染。(7)手或相對臟的東西不能通過打開的瓶口，瓶口最容易污染，放水時吸管端接觸瓶口的話，要扔掉吸管。39，接種時在附近的火焰中打開瓶口，傾斜瓶口，防止空氣中的微生物掉進瓶子。正確的錯誤，40，整個接種

13、工作必須在附近的火焰中進行，動作要快，準確的錯誤，41，在接種過程中，盡量達到空中的要求，防止操作引起的污染。把瓶蓋向上放，接種結(jié)束后立即蓋上瓶口，正確的錯誤，44，45，種子，分生組織：培養(yǎng)時一般不貼在培養(yǎng)基表面，而是插在培養(yǎng)基中，這是氧氣不足，正確的錯誤，46，接種莖：46第二，在溫室控制環(huán)境條件下生長的植物；第三，無菌環(huán)境下已經(jīng)培養(yǎng)成離子的植物。第四，選擇外植體的選擇和處理技術(shù)，48，1，要選擇優(yōu)秀的基因型實驗，首先要明確目的。例如，蔬菜、作物等的脫毒快，是為了消除病毒，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，要選擇當(dāng)?shù)卦耘啻_認的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)品種作為脫毒材料，品種必須可靠。大衛(wèi)亞設(shè)(Northern Exposur

14、e，Northern Exposure)花卉，觀賞植物的快速繁殖也應(yīng)該選擇有價值的植物。2.采訪是在生長旺盛、健壯、沒有病蟲害的植物上進行的。母株代謝旺盛期切的外植體再生能力強，實驗容易成功。(a)，外植體選擇，49，3，外植體大小選擇取決于外植體。如果利用莖尖培養(yǎng)，莖尖大小對解毒效果很明顯。另外，未成熟胚胎培養(yǎng)后，胚胎的年齡也很重要。(稍后具體地說)4，選擇外植體的時期外植體的生長動力學(xué)往往與該種的生長規(guī)律(生物鐘)有關(guān)。因此，最好在植物生長的最佳時期取材培養(yǎng)。會得到好的結(jié)果。50，1，通過采訪母州預(yù)處理人工管理，母州蓬勃發(fā)展，大使活躍，在上面采訪培養(yǎng)，容易成功。2.外植體休眠處理部分植物的

15、種子，未成熟的胚胎或芽，休眠。為了打破休眠，可以利用低溫處理或赤霉素等化學(xué)物質(zhì)處理。植物的處理溫度和時間各不相同。(2)，外植體處理，51，3，組織內(nèi)生菌處理(1)添加抗生素，注意使用抗生素，將高濃度培養(yǎng)物的死亡(2)生長季旺盛生長點部位作為開始培養(yǎng)的外植體。(3)繼續(xù)延續(xù)被內(nèi)生真菌污染的培養(yǎng)物的莖端。52，3。培養(yǎng)基的成分和趙霽1，培養(yǎng)基的成分及其作用(1)培養(yǎng)成無機營養(yǎng)物質(zhì)的植物組織、器官、細胞和原生質(zhì)體，必須持續(xù)供應(yīng)某些無機化學(xué)物質(zhì)。除了c，H，O，外，需求量大的元素稱為大量元素，所需的楊怡較少的元素稱為微量營養(yǎng)素。53，培養(yǎng)基中大量元素的使用量一般為每升數(shù)十到數(shù)千毫克。大量元素包括N，P，K，Ca，Mg，S。培養(yǎng)基中添加最多的是N，N，通常作為硝酸鹽或氨鹽，或者兩者結(jié)合的鹽提供。大量元素，54，微量元素的使用量一般不超過每升數(shù)十毫克。需要注意的是，植物所需的微量元素是Fe，Cu，Zn，B，Mo，Mn，Co，Cl其他一些化學(xué)藥品經(jīng)常含有微量元素雜質(zhì)，因此微量元素的用量太大，會渡邊杏，會產(chǎn)生抑制生長等毒性現(xiàn)象。微量元素，55，(2)。維生素、氨基酸、糖類和其他有機添加劑1，維生素類維生素物質(zhì)在酶系統(tǒng)中具有催化功能的有機化合物。黃胺(VB1)與愈合組織的產(chǎn)生和生活力有關(guān)，可能是所有植物組織培養(yǎng)初期所需的維生素，鹽酸吡哆醇(VB6)促進根的生長，煙酸(VB3，又稱