1、第五章中藥制劑衛(wèi)生學檢查技術(shù)，第一節(jié)微生物限度檢查法第二節(jié)無菌檢查法第三節(jié)熱源檢查法第四節(jié)細菌內(nèi)毒素檢查法，感化老師編寫，第一。各種非常規(guī)滅菌劑必須實施微生物限度檢查法。無菌制劑要依法接受無菌檢查。3.靜脈注射用注射劑無菌、熱源、細菌內(nèi)毒素檢查，第五章中藥制劑的衛(wèi)生學檢查，中國藥典規(guī)定：1，基本知識，(1)基本概念微生物限度檢查法界檢查非規(guī)定滅菌劑及原料，輔料的微生物污染程度的檢查方法。非規(guī)定滅菌劑主要指口服劑，一般外溶劑。(2)檢查項目1鹽菌量(細菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母數(shù))2控制菌檢查(包括大腸埃希菌、大腸桿菌群、沙門氏菌、銅、假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白念珠菌等)，3嚴格防止二次污染。中

2、國的藥品生產(chǎn)清潔水平是什么？標準要求是什么？教室交互、(2)試件抽樣、保存和檢驗量按批號隨機抽樣，樣品量是檢驗量的3倍。每個樣例布局必須至少包含兩個最小鋪裝層單位。驗收量是指每次驗收所需的供給(G、ml或cm2)。固體和半固體制劑的檢查量為10g是。液體制劑10毫升；膜劑為100cm2 (4個以上)。貴重藥品、微量包裝藥品的檢查量可以適當減少。要求檢驗沙門氏菌供給品，檢查量為20g或20ml，第一節(jié)微生物限度檢查法，第一節(jié)微生物限度檢查法，(3)用準備試驗液所需的適當方法準備第一液體。將試驗品10毫升pH7.0無菌氯化鈉-蛋白質(zhì)緩沖液100毫升，混合到1336010。水溶性液體劑可用作混合供應

3、品原液的試液。第一節(jié)微生物限度檢查法，第二固體供應品：試用品10g pH7.0無菌氯化鈉-蛋白質(zhì)緩沖液定量用100ml混合勻漿機或其他適當方法1:10，如有必要，加入適量無菌聚山梨醇80，適當加熱45以下的水箱，使試用品均勻分布。第一節(jié)微生物限度檢查法，3以特殊方法準備的非溶性供應品膜劑，按試驗品腸溶劑或結(jié)腸溶劑、原型氣霧劑、噴霧、試用品貼紙、制劑、制劑、制劑、制劑、制劑、制劑、制劑、藥典規(guī)定運行。第一節(jié)微生物限度檢查法，4 .抑菌活性供應品：采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉降集菌法、薄膜過濾法、中和法等，消除抑菌活性。注：如果需要在試液制劑中提高溫度，請將溫度均勻加熱到45以下，時間不得超過30分鐘

4、。(4)檢驗條件培養(yǎng)溫度：細菌和控制菌培養(yǎng)溫度為3035，真菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為2328。語音對比：無菌技術(shù)的可靠性確認陽性對比：測試物質(zhì)是否妨礙控制細菌生長，培養(yǎng)條件是否合適，3、細菌、真菌、酵母數(shù)量，1節(jié)微生物限度檢查法，(1)培養(yǎng)基的適用性檢查，(2)檢查方法的驗證，(3)檢查方法，(4)檢驗方法：通過檢驗用培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的比較，以培養(yǎng)菌的生長狀態(tài)或特征評估檢驗用培養(yǎng)基是否滿足檢驗要求。，第一節(jié)微生物限度檢查法，(1)培養(yǎng)基的適用性檢查，1。菌種(5種)為5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌為0代)大腸埃希菌(Escherchia coli)金黃色葡萄球菌(Staphylococcu

5、s aureus)枯草芽孢桿菌(Bacillus)黑木耳(Aspergillus Niger)，第一節(jié)微生物限度檢查法，(1)培養(yǎng)基的適用性檢查，第一節(jié)微生物限度檢查法，(2)。菌液在營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)池培養(yǎng)基中1824小時培養(yǎng)接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物培養(yǎng)2448小時，從改良馬丁培養(yǎng)基到改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。上述培養(yǎng)基以0.9%無菌氯化鈉溶液制成，每毫升代表50100 CFU(“Colony Forming Units”的縮寫，菌落形成單位，所含菌落數(shù))的菌顯液。第一節(jié)微生物限度檢查法，2 .菌液在改良接種黑木耳的新鮮培養(yǎng)物的馬丁瓊脂斜面培

6、養(yǎng)基上培養(yǎng)57天，加入含有35毫升0.05%聚山梨醇80的0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗孢子。然后將孢子懸浮液吸入無菌試管，用0.9%無菌氯化鈉溶液制作每毫升50100cfu的孢子懸浮液。保存菌液準備的菌液最好當天使用。在室溫下放置時，應在2小時內(nèi)使用。保存在28里，24小時內(nèi)可以使用。黑曲霉孢子懸浮液可以保存為28，在經(jīng)過驗證的儲存期間使用。第一節(jié)微生物限度檢查法，3 .適用性檢查為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌各50100cfu注入無菌平皿，立即倒入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每實驗菌2個平盤，混合，凝固，3035培養(yǎng)48小時，計數(shù)并行。將白念珠菌、黑木耳分別注射到50100cfu

7、，注入無菌平板后，立即倒入玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基，將每個實驗菌的2個平板同時攪拌、凝固，并加入2328，培養(yǎng)和計數(shù)72小時。取白色念珠菌50100cfu，分別注入無菌平皿，立即倒入酵母浸泡粉末葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，平行準備兩個信譽，攪拌，凝固，2328，培養(yǎng)72小時，計數(shù)。用相應的對照培養(yǎng)基代替皮檢培養(yǎng)基進行上述實驗。第一節(jié)微生物限度檢查法，4 .結(jié)果判斷同時滿足以下兩個茄子條件，判定培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。也就是說，菌落形態(tài)大小必須與對照培養(yǎng)基的菌落一致。第一節(jié)微生物限度檢查法，(2)計數(shù)法的驗證，1。菌種和菌液的制備等培養(yǎng)基的適用性檢查。2 .驗證方法驗證實驗至少進行3次獨立并行實驗，并分別計算

8、各實驗菌各實驗的回收率。可與供應試驗品的細菌、真菌及酵母菌數(shù)同時進行。第一節(jié)微生物限度檢查法，2 .驗證方法，(1)實驗組：1ml最低稀釋等級試驗液50100cfu實驗菌(2)菌液組：測定添加的實驗菌數(shù)(3)供應品比較組：規(guī)定的定量供應試驗液(4)；如果實驗組的細菌回收率都不在70%以下，計算方法是可靠的。在一次實驗中，如果實驗組的細菌回收率低于70%，就必須消除供應品的抑菌活性，重新進行方法驗證。第一節(jié)微生物限度檢查法，(3)檢查方法：平皿法和薄膜過濾法，1。平皿法適用于沒有明顯抑制作用的制劑。注：平盤法計數(shù)時要進行語音對比，均隨菌生長而渡邊杏。第一節(jié)微生物限度檢查法，細菌數(shù)報告規(guī)則：細菌，

9、酵母平均菌低于300cfu，真菌平均菌低于100cfu的稀釋級，應選定為細菌數(shù)報告(兩位有效數(shù)字)的依據(jù)。平均最高的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，報告1g、1ml或10cm2供應品中包含的細菌數(shù)。每個稀釋級板僅在未生長菌或最低稀釋級板中生長菌，但如果平均菌小于1，則用1乘以最低稀釋倍數(shù)報告菌數(shù)。第一節(jié)微生物限度檢查法，2 .薄膜過濾法一般應用于可溶性細菌制劑。過濾器：孔直徑應小于0.45米，直徑通常為50mm必須是。每個濾膜每次清洗量為100毫升。每個濾膜的總過濾量應渡邊杏超過，為防止濾膜上的微生物受損，應渡邊杏超過1000毫升。操作程序：第一節(jié)微生物限度檢查法，規(guī)定：每個過濾器的真菌數(shù)量不得超過100

10、cfu。菌數(shù)報告原則：用等于1g或1ml供應品的菌數(shù)報告菌數(shù)。如果濾膜中沒有滋生細菌，則報告細菌數(shù)為1個(每個過濾器過濾1g或1ml以供應試用品)或1乘以最小稀釋倍數(shù)。語音控制：以相同的方法操作試驗稀釋劑1毫升。陰性對照中渡邊杏菌生長。第一節(jié)微生物限度檢查法，(4)注意事項，1所有設備必須嚴格滅菌。在無菌條件下完成工作。4.滅菌的試管和玻璃瓶每次打開和關閉都需要火焰滅菌。5.不要用手摸標本和滅菌的器材內(nèi)部，用嘴吸或吹渡邊杏。4.控制菌檢查，第一節(jié)微生物限度檢查法包括大腸埃希菌、大腸桿菌群、銅、假單胞菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、梭菌和白色念珠菌檢查。其中大腸埃希菌、大腸桿菌群是口服藥物的控制菌

11、之一。銅、假單胞菌、金黃色葡萄球菌是外用藥品和眼窩的控制菌。第一節(jié)微生物限度檢查法，(1)控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查，1。菌種(6種)大腸埃希菌CMCC(B) 44102金黃色葡萄球菌CMCC(B) 26003 B型副傷寒沙門氏菌CMCC(B) 50094，第一節(jié)微生物限度檢查法，2。菌液將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、B型副傷寒沙門氏菌、銅、假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物接種到營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上。接種生梭菌的新鮮培養(yǎng)物在黃乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)2448小時。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物在馬丁肉湯培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)2448小時。用0.9%無菌氯化鈉溶液制作含1ml的細菌數(shù)為500

12、1000cfu的菌懸浮液。3 .適用性檢查項目：有關促進增長能力抑制能力指示能力的具體方法，請參閱中國藥典2010年版附錄。第一節(jié)微生物限度檢查法，(2)控制菌檢查方法的驗證，成品培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基都要檢查。驗證方法：按照規(guī)定的量，將試液和10100cfu實驗菌放入增菌培養(yǎng)基中，根據(jù)相應的控制菌檢查法進行檢查。采用薄膜過濾法時，應以規(guī)定的量將試驗液、過濾、洗滌、實驗菌添加到最后的清洗液中，過濾后，注入蒸菌培養(yǎng)基或取出濾膜，連接到蒸菌培養(yǎng)基上。結(jié)果判斷：上述實驗中檢測出實驗菌后，根據(jù)牙齒供應液制備法和控制菌檢驗法對試驗品進行控制菌檢查。第一節(jié)微生物限度檢查法，(3)檢查方法，

13、1。大腸埃希菌(Escherichia coli)、試驗品檢驗、第一節(jié)微生物限度檢查法、結(jié)果確認、試驗線接種驗證IMViC實驗反應為或。，第一節(jié)微生物限度檢查法，2 .大腸桿菌群(Coliform)，第一節(jié)微生物限度檢查法，結(jié)果判斷和報告：根據(jù)大腸桿菌群的檢測官數(shù)，根據(jù)下表報告1g或1ml供應品中的大腸桿菌群數(shù)。表示大腸桿菌群的檢測。表明未檢測到大腸桿菌群。第一節(jié)微生物限度檢查法，3 .沙門氏菌，第一節(jié)微生物限度檢查法，溴化十六烷基三甲基瓊脂培養(yǎng)基，判定未檢測到牙齒菌，4。銅綠膿桿菌(銅綠假單胞菌)，銅綠假單胞菌5。金黃色葡萄球菌，第一節(jié)微生物限度檢查法，6?？耸暇?，含有慶大霉素的哥倫比亞瓊脂

14、培養(yǎng)基，第一節(jié)微生物限度檢查法，7。供應白色念珠菌試驗品的細菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母菌數(shù)均不符合牙齒品種的規(guī)定，應在同一樣品組中隨機抽樣，單獨再試驗兩次，作為3次結(jié)果的平均值全部報告。供應試用品的細菌數(shù)、真菌、酵母菌數(shù)、控制菌三種茄子檢查結(jié)果均符合牙齒品種項目的規(guī)定，判定供應品符合規(guī)定。如果其中一個不符合牙齒品種項目的歸屬，則提供試用品不符合規(guī)定。5.微生物限度檢查標準，第一節(jié)微生物限度檢查法，口服給藥劑在檢測大腸埃希菌時渡邊杏。局部給藥劑在檢測控制菌金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌時渡邊杏。鼻及呼吸機吸入給藥劑不能檢測大腸埃希菌，陰道，尿道給藥劑也不能檢測梭菌和白色念珠菌。含有動物組織(包括器官提取物)和

15、動物類原藥材料粉(蜂蜜、王漿、動物角、膠質(zhì)除外)的口服給藥劑每10g或10ml檢測沙門氏菌，渡邊杏。真菌，長螨蟲變成不合格論。第一，基本知識，(1)基本概念無菌檢查法是藥典中要求無菌的藥品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種是否無菌的檢查方法。(b)接受檢查的各種注射劑、吸入噴霧劑、眼溶劑、可吸收止血劑、手術(shù)、燙傷、嚴重創(chuàng)傷的局部用藥等，第二節(jié)無菌檢查法，第二節(jié)無菌檢查的人和環(huán)境，第二節(jié)無菌檢查法，無菌檢查的人：微生物專業(yè)知識，日常檢查還需要監(jiān)測實驗環(huán)境。3，培養(yǎng)基的制備和檢查，2節(jié)無菌檢查法，1培養(yǎng)基的種類和準備無菌檢查用培養(yǎng)基主要包括黃乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(好氧細菌，鹽酸菌培養(yǎng)用)，改良馬丁培養(yǎng)基(真菌培養(yǎng)用)，選擇性培養(yǎng)基，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)器，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，0.5準備好的培養(yǎng)基應保存在225，避光的環(huán)境中。培養(yǎng)基存放在未密封的容器中，通常在3周內(nèi)使用。在密封容器里保管，一般在一年內(nèi)使用。2培養(yǎng)基的適用性檢查應符合商業(yè)銷售的