1、主題3分解纖維素的微生物的分離，纖維素和纖維素酶，1。纖維素是最豐富的多糖，是一種由葡萄糖首尾相連組成的高分子化合物。基礎(chǔ)知識(shí)：植物的根、莖、葉和其他器官含有大量纖維素。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)品。纖維素是世界上最豐富的多糖。植物每年生產(chǎn)70億噸以上的纖維素，其中40%-60%可以被微生物利用，這些微生物可以在土壤中產(chǎn)生纖維素酶，并且不會(huì)大量積累。在食草動(dòng)物的消化道中，也有分解纖維素的微生物。原理是纖維素酶是用來(lái)分解纖維素的，但是人類(lèi)沒(méi)有分解纖維素的能力。人類(lèi)可以利用分解纖維素的微生物將秸稈等廢棄物轉(zhuǎn)化為酒精，并用纖維素酶處理服裝面料。2.纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至

2、少包括三個(gè)組分，即C1酶(核酸外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶。前兩種酶將纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。取兩個(gè)20毫升的試管，實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)，加入一個(gè)濾紙條，分別加入11毫升和10毫升pH4.8和0.1毫升/升的醋酸鈉緩沖液，加入1毫升纖維素酶到第二個(gè)試管中，將兩個(gè)試管固定在錐形瓶中，在搖床上以140轉(zhuǎn)/分的速度振蕩1小時(shí)。結(jié)果：第二個(gè)試管的濾紙條試管的功能是什么？剛果紅染色顯示剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，但不與水解纖維二糖和葡萄糖反應(yīng)。(2)纖維素分解細(xì)菌的篩選當(dāng)剛果紅加入到含有纖維素的培養(yǎng)基中時(shí)，剛果紅可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。

3、纖維素酶分解纖維素時(shí)，不會(huì)形成剛果紅-纖維素復(fù)合物，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，因此可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。2。實(shí)用設(shè)計(jì)、梯度稀釋?zhuān)崾咀宰兞繛榕囵B(yǎng)基類(lèi)型，即普通培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基。它可以與牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相比，或纖維素可以變成葡萄糖。側(cè)欄中的公式是液體介質(zhì)還是固體介質(zhì)？為什么？是一種液體培養(yǎng)基，因?yàn)榕浞街袥](méi)有凝結(jié)劑(瓊脂)。這種培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇性作用嗎？如果是，是如何選擇的？在這個(gè)配方中，纖維素是主要的碳源，只有能分解纖維素的微生物才能大量繁殖。你能設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)解釋選擇性培養(yǎng)基的功能嗎？這表明配方中的酵母抽提物還能提供少量的碳源，因此其他微生物

4、能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)和繁殖。然而，由于酵母抽提物的含量很少，只有以纖維素為碳源的微生物才能繁殖。在選擇性培養(yǎng)的條件下，那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物可以快速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物則被抑制繁殖，因此它們可以起到“濃縮”的作用。為什么選擇培養(yǎng)可以“濃縮”所需的微生物？思考：這個(gè)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程和題目2中的實(shí)驗(yàn)過(guò)程有什么相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？本實(shí)驗(yàn)的過(guò)程與實(shí)驗(yàn)對(duì)象2的過(guò)程之間的區(qū)別如下。第二個(gè)任務(wù)是將土壤樣品制成的細(xì)菌懸液直接涂在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，并直接分離菌落。在本課題中，通過(guò)選擇性培養(yǎng)使纖維素分解細(xì)菌增殖，然后將細(xì)菌溶液涂布在選擇性培養(yǎng)基上。其他步驟基本相同。4.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

5、，1 .培養(yǎng)基的制備是否合格，以及選擇的培養(yǎng)基是否篩選出菌落控制培養(yǎng)基，這意味著如果在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，培養(yǎng)基的制備是合格的。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，這可能表明已經(jīng)獲得了分解纖維素的微生物。2.分離結(jié)果是否一致因?yàn)橥寥乐屑?xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌，所以細(xì)菌是最容易分離的。然而，由于土壤樣品的環(huán)境不同，不同的學(xué)生可能會(huì)得到不同的真菌和放線菌分離結(jié)果。為了確定所分離的纖維素分解菌，有必要進(jìn)行_ _ _ _ _ _實(shí)驗(yàn)，而纖維素酶的發(fā)酵方法包括_ _ _ _ _ _發(fā)酵和_ _ _ _ _ _發(fā)酵。纖維素酶的測(cè)定方法是定量測(cè)定_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

6、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶，液體，固體，葡萄糖，5。本課題的延伸、纖維素分解微生物的分離、纖維素酶、種類(lèi)、功能、催化活性、剛果紅染色、篩選原理、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、土壤取樣、選擇性培養(yǎng)、包被培養(yǎng)、純化培養(yǎng)、預(yù)染色、后染色、富含纖維素的土壤、細(xì)菌被包被在僅含尿素作為氮源的選擇性培養(yǎng)基上，以及僅含纖維素粉作為碳源的選擇性培養(yǎng)基上，固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、篩選菌株和選擇性培養(yǎng)。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，這將增強(qiáng)培養(yǎng)基的堿性并提高酸堿度。將酚紅指示劑加入培養(yǎng)基中。如果酸堿度上升，指示劑會(huì)變紅，剛果紅會(huì)與纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素