1、大腸桿菌生長曲線的測定,授課教師: 孫運(yùn)軍 研 究 生: 何浩 張晨 黃同龍 左明星,1,學(xué)習(xí)交流PPT,目的要求 1、通過光密度值的測量了解大腸桿菌的生 長規(guī)律，繪制生長曲線。 2、了解光電比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的原理。,2,學(xué)習(xí)交流PPT,基本原理 將一定量的細(xì)菌接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的培養(yǎng)條件下，該群體就會有規(guī)律的增長。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)胞數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。該曲線包括四個階段：延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期。,3,學(xué)習(xí)交流PPT,4,學(xué)習(xí)交流PPT,5,學(xué)習(xí)交流PPT,本實(shí)驗(yàn)采用分光光度計(jì)進(jìn)行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細(xì)菌懸浮液

2、的光密度值，繪制生長曲線。,6,學(xué)習(xí)交流PPT,光吸收的基本定律：朗伯比耳定律 A=kbc (k為摩爾吸光系數(shù)，b為液層厚度，c為溶液濃度) 朗伯比耳定律的意義是：當(dāng)一束平行單色光通過均勻、非散射的溶液時，其吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。,FeSO4溶液在650nm的光吸收曲線,7,學(xué)習(xí)交流PPT,大腸桿菌懸浮液的光吸收規(guī)律： 實(shí)驗(yàn)表明，OD600在0.1 0.65之內(nèi)的大腸桿菌懸浮液基本符合朗 伯比耳定律，即吸光度與菌液濃度成正比。,大腸桿菌梯度稀釋液的光吸收曲線,8,學(xué)習(xí)交流PPT,器 材 1、菌 種：大腸桿菌。 2、培養(yǎng)基：LB液體培養(yǎng)基。 3、儀器與耗材：722型分光光度計(jì)、

3、恒溫?fù)u 床、無菌試管、無菌吸管。,9,學(xué)習(xí)交流PPT,操作步驟 1、配制LB液體培養(yǎng)基100 ml，分裝1支試管(5 ml/支)，剩余培養(yǎng) 基裝入250 ml的三角瓶，121滅菌20min。 2、取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。 3、用5 ml無菌吸管取2.5 ml大腸桿菌培養(yǎng)液(培養(yǎng)12h)轉(zhuǎn)入裝有 LB液體培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，混勻后分別取5ml混合液放 入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。 4、將已接種的試管置搖床37振蕩培養(yǎng)(200 rpm)，在相應(yīng)時間 取出試管放于冰箱中，最后一同測定OD600值。 5、進(jìn)行光密

4、度測定時，以未接種的LB液體培養(yǎng)基為空白對照， 從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB 液體培養(yǎng)基稀釋后測定，使OD600值在0.1 0.65之內(nèi)。,10,學(xué)習(xí)交流PPT,不同培養(yǎng)時間的菌液,11,學(xué)習(xí)交流PPT,注意事項(xiàng)： 選用規(guī)格一致的試管； 每支試管的裝液量應(yīng)相同(5 ml/支)； 混勻的菌懸液加入到比色皿后應(yīng)迅速讀取OD值； 保護(hù)比色皿透光面不受磨損，不要用手指直接接觸； 分光光度計(jì)在未測樣品時應(yīng)及時打開蓋。,12,學(xué)習(xí)交流PPT,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1、將測定的OD600值填入下表：,2、繪制大腸桿菌的生長曲線：,OD600值,培養(yǎng)時間/h,13,學(xué)習(xí)交流PPT,LB液體培養(yǎng)基配方：100ml 酵母提取物(Yeast extract): 0.5g蛋白胨(Tryptone)：1