中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

新城疫檢疫技術(shù)規(guī)范

GB16550一1996

Technicalcodeofquarantinefornewcastledisease

主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了新城疫群體檢疫、個(gè)體檢疫、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)和檢疫后處理的技術(shù)規(guī)范。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞和其他可感染新城疫的禽類。

引用標(biāo)準(zhǔn)

GB16548-1996畜禽病害肉尸及其產(chǎn)品無(wú)害化處理規(guī)程

3群體檢疫

對(duì)養(yǎng)禽場(chǎng)、獨(dú)立飼養(yǎng)的禽群及外售、外運(yùn)的禽群施行檢疫。

3.1查明疫病背景

通過(guò)詢問(wèn)獸醫(yī)人員或檢查疫病記錄，核查被檢禽場(chǎng)(群、室)在過(guò)去一年內(nèi)是否出現(xiàn)過(guò)新城疫臨診病

例，是否有與新城疫病例接觸史，周圍2km范圍內(nèi)是否發(fā)生過(guò)新城疫。

3.2查清免疫狀況

通過(guò)查驗(yàn)免疫證明或查詢其他資料，核查被檢禽群是否已按規(guī)定注射合格疫苗。如按規(guī)定免疫并正

處于規(guī)定的保護(hù)期內(nèi)，禽只健康狀況良好，被認(rèn)為免疫合格。如免疫不符合規(guī)定要求，要以合格疫苗再次

接種，隔離飼養(yǎng)觀察至群體抗體滴度達(dá)2'以上，全群健康，認(rèn)為免疫合格;觀察期內(nèi)發(fā)現(xiàn)疑似新城疫病

禽，須按3.3條和3.4條要求進(jìn)一步檢查。

3.3群體臨診檢查

首先作靜態(tài)檢查，讓禽群處于靜止?fàn)顟B(tài)，觀察營(yíng)養(yǎng)狀況、精神狀態(tài)、呼吸、糞便、鼻及口腔分泌物有否

異常。然后觀察禽只運(yùn)動(dòng)狀況，有否踱行、共濟(jì)失調(diào)、痙攣等異?，F(xiàn)象。檢查中重點(diǎn)注意以下情況:

a精神沉郁或無(wú)任何癥狀而死亡;

b.體溫升高、食欲減退、精神萎頓、產(chǎn)蛋減少或停止;

c.口腔和鼻腔分泌物增多，嗦囊脹滿;

d.呼吸困難、喉部發(fā)出“咯咯”聲(晚間較明顯);

e.下痢，糞便成綠色;

f.偏頭轉(zhuǎn)頸，作轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)或共濟(jì)失調(diào)。

若發(fā)現(xiàn)疑似病例，按3.4條要求進(jìn)一步檢查，同時(shí)對(duì)全群隔離飼養(yǎng)。

I4病理解剖檢查

對(duì)臨診疑似病例，應(yīng)全部或抽樣解剖，依據(jù)下述病變作出初步判斷:

a.口腔、咽喉部有粘液，咽部粘膜出血;

b.腺胃乳頭腫脹，擠壓后有豆腐渣樣壞死物流出，乳頭有散在的出血點(diǎn);

生NL魚重五星有條紋狀或點(diǎn)狀出血，有時(shí)見(jiàn)不規(guī)則潰瘍，腺胃與肌胃交接處有出血斑、條;

國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局1996一10一03批準(zhǔn)

1997一02一01實(shí)施

GB16550一1996

d.小腸前段有大面積散在出血點(diǎn)，或腸粘膜有纖維性壞死并形成假膜，假膜下出現(xiàn)紅色粗糙潰

瘍;

盲腸和直腸皺褶處有出血，盲腸扁桃體(淋巴濾泡)出血壞死;

氣管粘膜充血、出血、氣管內(nèi)有粘液;

心冠脂肪、心耳外膜及心尖脂肪上有針尖狀小出血點(diǎn)。

4個(gè)體檢變

4.1在無(wú)群體檢疫條件的場(chǎng)合，須進(jìn)行個(gè)體檢疫。個(gè)體檢疫合格的禽只一般供食用，如繼續(xù)飼養(yǎng)應(yīng)隔離

三周，經(jīng)觀察無(wú)異常后，方準(zhǔn)與其他禽只混養(yǎng)。

4.1.1查明是否來(lái)自疫區(qū)。

4.1.2查驗(yàn)免疫證明。

4.1.3臨診檢查和病理解剖檢查

檢查內(nèi)容參照3.3條和3.4條進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)疑似新城疫染疫禽只，立即作無(wú)害化處理。

5實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

5門下列情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

a.產(chǎn)地定期檢疫;

b.監(jiān)測(cè)免疫狀態(tài);

c.疑似病雞的定性，或臨診及解剖檢查初步診斷為新城疫，需進(jìn)一步確診;

d.檢疫中發(fā)現(xiàn)重大疫情(如禽流感)，須作鑒別診斷;

e.行政主管部門、飼養(yǎng)單位、售購(gòu)或爭(zhēng)議雙方要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

5.2實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法

病毒分離鑒定試驗(yàn)，見(jiàn)附錄A(補(bǔ)充件)。

血凝抑制試驗(yàn)，用于免疫監(jiān)測(cè)，見(jiàn)附錄B(補(bǔ)充件)。

a.阮

6.A一

檢疫后的處理

經(jīng)臨床檢查、解剖檢查和實(shí)驗(yàn)室診斷等綜合判定，確診為新城疫的禽群或禽只，按GB16548處

6.2經(jīng)初步診斷為新城疫可疑的禽群(禽只)，按下述方法之一處理:

a.除將可疑禽只按6.1條處理外，全群隔離飼養(yǎng)，并進(jìn)行緊急免疫接種，如在接種后觀察期內(nèi)出

現(xiàn)可疑禽只，亦按6.1條處理。觀察21d后，對(duì)臨床健康，免疫滴度達(dá)到25以上的禽只，經(jīng)體表消毒后按

健康禽只對(duì)待。

b.’經(jīng)初步診斷為新城疫可疑的禽群(禽只)，在全群隔離飼養(yǎng)的同時(shí)，對(duì)可疑禽只采樣作實(shí)驗(yàn)室診

斷，如確為新城疫者，全群即按6.1條處理。

6.3發(fā)生過(guò)新城疫的禽場(chǎng)在半年之內(nèi)，其禽只不準(zhǔn)出售、外運(yùn)。

GB16550一1996

附錄A

病毒分離鑒定試驗(yàn)

(補(bǔ)充件)

A1儀器設(shè)備

注射器:1mL;

注射針頭:5-5合號(hào);

血凝試驗(yàn)板:V型、96孔;

微量移液器:50pL;

恒溫箱，

超凈工作臺(tái)或無(wú)菌室。

a.h仁d.已f.

A2試荊

無(wú)菌生理鹽水;

青霉素;

鏈霉素;

標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清。

氏b.已已

A3樣品采集及處理

A3.1活禽用氣管拭子和泄殖腔拭子(或糞)。

A3.2死禽以腦為主;也可采心、肝、脾、肺、腎、氣囊等組織。

A3.3樣品用生理鹽水研成1:5乳液;拭子浸入2^-3mL生理鹽水中，反復(fù)吸擠壓至無(wú)水滴出，棄之。

溶液中加入青排素(使終濃度為1000單位/mL),鏈霉素(使終濃度為1mg/mL)。泄殖腔拭子(或糞)樣

品，青霉素、鏈霉素量提高5倍。然后調(diào)pH7.。一7.4,37℃作用1h，再1000r/min離心10min，取上清

0.1mL經(jīng)尿囊腔接種9^-10日齡SPF雞胚。

A4培養(yǎng)物的收集及檢測(cè)

A4.1培養(yǎng)4--7d的尿囊液經(jīng)無(wú)菌采集后一20℃保存。

A4.2尿囊液按附錄B(補(bǔ)充件)作血凝試驗(yàn)，并與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清作血凝抑制試驗(yàn)，確定有無(wú)新城疫病毒

繁殖。

A4.3MDT(最小病毒致死量引起雞胚死亡的平均時(shí)間)的測(cè)定:將新鮮尿囊液用生理鹽水連續(xù)10倍

稀釋,10-6-10-。的每個(gè)稀釋度接種5個(gè)9^10日齡SPF雞胚，每胚0.1m1.,37C孵化。余下的病毒保

存于4C.8h后以同樣方法接種第二批雞胚，連續(xù)7d內(nèi)觀察雞胚死亡時(shí)間并記錄，測(cè)定出最小致死量，

即引起被接種雞胚死亡的最大稀釋倍數(shù)。計(jì)算MDT,

A4.4以MDT確定病毒的致病力強(qiáng)弱,40^-70h死亡為強(qiáng)毒,140h以上為弱毒。

GB16550一1996

附錄B

雞新城疫徽t紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)

(補(bǔ)充件)

B1儀器設(shè)備

a.微量血凝板:v型,96孔;

b.微型振蕩器;

c.塑料采血管;

d，移液器:50ML.

B2試劑

B2.1稀釋液

pH7.0-7.2磷酸緩沖鹽水

氯化鈉(GB1266-77)170g

磷酸二氫鉀(GB1274-77)13.6g

氫氧化鈉(GB629-77)3.0g

蒸餾水1000m1

高壓滅菌，4C保存，使用時(shí)作20倍稀釋

B2.2濃縮抗原

B2.3。，5%紅細(xì)胞懸液

采成年雞血，用20倍量磷酸緩沖鹽水洗滌3-4次，每次以2000r/min離心3^-4min，最后一次

5min，用磷酸緩沖鹽水配成0.50o懸液。

B2.4標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清

B3被檢血清

每群雞隨機(jī)采血20^-30份血樣，分離血清。

采血法:先用三棱針刺破翅下靜脈，隨即用塑料管引流血液至6^-8cm長(zhǎng)。將管一端燒融封口，待凝

固析出血清后以1000r/min離心5min,剪斷塑料管，將血清倒入一塊塑料板小孔中。若需較長(zhǎng)時(shí)間保

存，可在離心后將凝血塊一端剪去，滴融化石蠟封口，于。℃保存。

B4操作方法

B4.1微量血凝試驗(yàn)

B4.1.1于微量血凝板(Bl.1)的每孔中滴加稀釋液((B2.1)50kL，共滴四排。

B4.1.2吸取1:5稀釋抗原滴加于第一列孔，每孔50,}L，然后由左至右順序倍比稀釋至第11列孔，

再?gòu)牡?1列孔各吸取50pL棄之。最后一列不加抗原作對(duì)照。

B4.1.3于每孔中加人0.5%紅細(xì)胞懸液(B2.3)50pL.

B4門.4置微型振蕩器(Bl.2)上振蕩1min，或手持血凝板繞圓圈混勻。

B4門，5放室溫下((18-20'C)30-40min，根據(jù)血凝圖象判定結(jié)果。

以出現(xiàn)完全凝集的抗原最大稀釋度為該抗原的血凝滴度。每次四排重復(fù)，以幾何均值表示結(jié)果

B4.1.6計(jì)算出含4個(gè)血凝單位的抗原濃度。按式(BL)進(jìn)行計(jì)算:

GB16550一1996

抗原應(yīng)稀釋倍數(shù)=

血凝滴度

4

................·..·.??(BI)

B4.2微量血凝抑制試驗(yàn)

B4.2.1先取稀釋液(132.1)50pL，加人微量血凝板(Bl.1)的第1孔，再取濃度為4個(gè)血凝單位的抗原

依次加入3^-12孔，每孔50風(fēng)，第2孔加濃度為8個(gè)血凝單位的抗原50pL,

B4.2.2吸被檢血清(133)50pL于第1孔(血清對(duì)照)中，擠壓混勻后吸50pL于第2孔，依次倍比稀釋

至第12孔，最后棄去50pLo

B4.2.3

置室溫(18^200C)下作用20min,

滴加5011.0.5%紅細(xì)胞懸液(B2.3)于各孔中，振蕩混合后，室溫下靜置30-40min，判定結(jié)

每次測(cè)定應(yīng)設(shè)已知滴度的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清(132.4)對(duì)照。

2.425

結(jié)果判定

B4果B4BS

B5.1在對(duì)照出現(xiàn)正確結(jié)果的情況下，以完全抑制紅細(xì)胞凝集的最大稀釋度為該血清的血凝抑制滴

度。

B5.2若有10%以上的雞出現(xiàn)11(log,)以上的高血凝抑制滴度，說(shuō)明雞群已受新城疫強(qiáng)毒感染

B5.3若監(jiān)測(cè)雞群的免疫水平，則血凝抑制滴度在40092)的雞群保護(hù)率為50%左右