1、革蘭氏陽性球菌 鑒 定,革蘭氏陽性球菌的種類,1、葡萄球菌屬 2、鏈球菌屬 3、微球菌屬 4、腸球菌屬 5、氣球菌屬 6、孿生球菌屬 7、創(chuàng)傷球菌屬 8、乏養(yǎng)球菌屬,一、革蘭氏陽性球菌的基本特征： 在血平板上生長(zhǎng)，但在中國(guó)籃、麥康凱平板上不生長(zhǎng)，提示為革蘭氏陽性球菌。 二、革蘭氏陽性球菌的基本鑒定試驗(yàn)： 1.觸酶試驗(yàn)是鑒定革蘭氏陽性球菌的重要試驗(yàn)，任何G+球菌必須先做觸酶試驗(yàn)，是鑒別葡萄球菌與鏈球菌的初步依據(jù) 2.凝固酶試驗(yàn)是鑒定葡萄球菌的重要試驗(yàn),三、作為推測(cè)性鑒定的重要試驗(yàn),1、菌落特征 溶血：血平板上菌落周圍的溶血有助于一些 細(xì)菌的初步鑒定 溶血: 菌落周圍有一草綠色的環(huán)，疑似肺 炎鏈球

2、菌和草綠色鏈球菌。 溶血：在菌落周圍有一完全溶血環(huán)，疑似金葡菌和溶血性鏈球菌。如化膿性鏈球菌周圍產(chǎn)生寬闊清晰的溶血環(huán)，無乳鏈球菌產(chǎn)生一個(gè)狹窄的溶血環(huán)。,2、鏡下形態(tài),（1）G+球菌、葡萄狀、單個(gè)或成雙排列的 疑似葡萄球菌 （2） G+球菌、球桿狀、鏈狀（長(zhǎng)短不一） 排列的疑似鏈球菌 （3） G+球菌、矛頭狀、成雙或短鏈狀排列 的疑似肺炎鏈球菌 （4） G+球菌、成簇、四聯(lián)狀排列的疑似微 球菌屬等,觸酶試驗(yàn)陽性的G+球菌：葡萄球菌屬、微球菌屬、口腔球菌屬、動(dòng)球菌屬、克氏考克菌屬、差異球菌屬等 觸酶試驗(yàn)陰性的G+球菌：鏈球菌屬、腸球?qū)佟⒎︷B(yǎng)菌屬、氣球菌屬、狡詐球菌屬、費(fèi)克籃姆菌屬、孿生球菌屬、戈魯

3、畢卡菌屬、創(chuàng)傷球菌屬、乳球菌屬、明串珠菌屬、足球菌屬等,3、觸酶試驗(yàn),3、觸酶試驗(yàn),（1）原理：具有觸酶（過氧化氫酶）的細(xì)菌，能催化過氧化氫，放出新生態(tài)氧，繼而形成分子氧，出現(xiàn)氣泡。 （2）方法：用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)基上的菌落置于潔凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液一滴，觀察結(jié)果。 （3）結(jié)果判斷：在5秒內(nèi)釋放大量的氣泡為陽性。,4、血漿凝固酶試驗(yàn),（1）原理：金葡菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中纖維蛋白原變成纖維蛋白附著于細(xì)菌表面上，發(fā)生凝集，用玻片法測(cè)出。另一種是菌體生成后釋放于培養(yǎng)基中的游離凝固酶，能使凝固酶原變成凝血酶類物質(zhì)，從而使血漿凝固，可用試管法測(cè)

4、出。 （2）方法： a.玻片法：取血漿和生理鹽水各一滴分別滴到清潔玻片上，挑去待檢菌落分別與血漿及鹽水混合，如血漿中出現(xiàn)明顯凝集顆粒而鹽水中無自凝現(xiàn)象者為陽性。 b.試管法：取試管兩支，分別加入0.5ml（經(jīng)生理鹽水1：4稀釋）的血漿，挑取菌落數(shù)個(gè)加入測(cè)定管充分研磨混勻，用一只陽性菌株加入對(duì)照管，37水浴3-4小時(shí)。血漿凝固者為陽性。,血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法,血漿凝固酶試驗(yàn)-試管法,(3)意義,凝固酶試驗(yàn)陽性的葡萄球菌：金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌、施氏葡萄球菌聚集亞種、豬葡萄球菌（1189%陽性） 凝固酶試驗(yàn)陰性的葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、頭狀葡萄球菌

5、、沃氏葡萄球菌等10余種。,5、CAMP試驗(yàn),原理：B群鏈球菌在血平板上能產(chǎn)生CAMP因子，可促使金葡菌 溶血素的活性，故在血平板上兩種細(xì)菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。其他鏈球菌一般不產(chǎn)生CAMP因子，無此現(xiàn)象。 方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，再于該直線的垂直平分線處用被檢菌接種一條垂直短線，兩線相距3-5mm左右，3524小時(shí)觀察結(jié)果。 結(jié)果觀察：在被檢菌接種線與金葡接種線之間有一個(gè)箭頭形或半月形透明溶血區(qū)為陽性，可推斷為B群鏈球菌。無溶血區(qū)為陰性。 意義：作為B群鏈球菌的鑒定指標(biāo)之一,6、桿菌肽敏感試驗(yàn),原理：A群鏈球菌對(duì)桿菌肽非常敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽

6、通常耐藥，故此試驗(yàn)可鑒別A群鏈球菌。 方法：將被檢鏈球菌，密涂于血平板上，將桿菌肽紙片貼于血平板表面，3524小時(shí)觀察結(jié)果 結(jié)果判斷：在桿菌肽周圍出現(xiàn)明顯抑菌環(huán) 10mm為陽性，則被推斷為A群鏈球菌 10mm為陰性，為其他群的鏈球菌。,7、奧普妥辛實(shí)驗(yàn)（OP試驗(yàn)）,原理：Optochin（乙基氫化去甲奎寧）干擾肺炎鏈球菌葉酸的合成，可抑制其生長(zhǎng)，其他鏈球菌如草綠色鏈球菌對(duì)其不敏感。 方法：將待檢的a溶血的鏈球菌均勻的涂布于血平板上，貼放Optochin紙片（含藥5mg)35孵育18-24小時(shí)，觀察抑菌圈的大小。 結(jié)果判斷：抑菌圈14mm為肺炎鏈球菌，無或見很窄的抑菌圈為草綠色鏈球菌。 意義；鑒

7、別肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌。,主要的G+球菌 鑒別要點(diǎn),金黃色葡萄球菌鑒別要點(diǎn),1、鏡下形態(tài)： G+球菌，單個(gè)，成簇或葡萄狀排列 2、菌落特征：在血平板上菌落圓形凸起，邊緣清楚，表面光滑，金黃色或白色，周圍有溶血環(huán) 3、主要生化反應(yīng)：觸酶、DNA酶和血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，發(fā)酵甘露醇。,葡萄球菌的鏡下形態(tài),金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài),檢查方法,臨床意義,1.化膿性感染： （1）皮膚及軟組織感染 （2）內(nèi)臟器官感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、骨髓炎 （3）全身性感染 ：敗血癥、心內(nèi)膜炎等,致病性與免疫性,（1）食物中毒 進(jìn)食含腸毒素食物后16h潛伏期，出現(xiàn)惡心、嘔吐、上腹痛、腹瀉等癥狀。嘔吐最為突出。大多數(shù)病人于

8、12d內(nèi)可自行恢復(fù)，預(yù)后良好。,2.毒素性疾?。?（2）假膜性腸炎： 實(shí)質(zhì)為菌群失調(diào)性腸炎，多為耐藥金葡菌感染產(chǎn)生腸毒素所致。 （3）毒素休克綜合征 多見于月經(jīng)期女性，表現(xiàn)為急性高熱，低血壓，猩紅熱樣皮疹伴脫屑，嚴(yán)重出現(xiàn)休克。,（4）燙傷樣皮膚綜合征,紅斑 起皺 大皰 脫落,腐生葡萄球菌：引起尿路感染、前列腺炎、外傷和敗血癥 溶血性葡萄球菌：引起心內(nèi)膜炎、敗血癥、腹膜炎、尿道感染、外傷感染等。,鏈球菌的鑒別要點(diǎn),1、形態(tài)：G+球菌，單個(gè)、成雙或呈鏈狀排列。 2、菌落特征：血平板上，菌落較小，灰白色，圓形凸起，周圍有不同溶血現(xiàn)象。 3、溶血現(xiàn)象：溶血溶血 溶血 4、草綠色鏈球菌的鑒定：人體上呼吸

9、道的正常菌群，通常不致病。如果在血液和無菌體液中檢出草綠色鏈球菌，有臨床意義,4、推測(cè)性鑒定： 根據(jù)溶血及關(guān)鍵性試驗(yàn)，對(duì)鏈球菌進(jìn)行推測(cè)性鑒定分群 .A群鏈球菌：溶血，桿菌肽敏感 .B群鏈球菌：溶血，CAMP試驗(yàn)陽性 .C群鏈球菌：溶血，CAMP試驗(yàn)陰性、桿菌肽耐藥、6.5%NaCl耐鹽試驗(yàn)陰性 .D群鏈球菌： 溶血， 6.5%NaCl耐鹽試驗(yàn)、膽汁七葉苷陽性，45生長(zhǎng),鏈球菌的鏡下形態(tài),所致疾病,（1）化膿性感染：引起皮膚、皮下組織感染 丹毒、膿胞瘡、癰、淋巴管炎，敗血癥等,網(wǎng)狀淋巴結(jié)炎丹毒,管狀淋巴管炎,2.猩紅熱 (scarlet fever) 由產(chǎn)生致熱外毒素的化膿性鏈球菌所致。細(xì)菌經(jīng)咽

10、喉粘膜侵入機(jī)體，增殖并產(chǎn)生毒素引起高熱、全身紅疹等癥狀，病后獲得較強(qiáng)的免疫力。,猩紅熱皮疹,3.超敏反應(yīng)性疾?。?A.急性腎小球腎炎: 多見于兒童和青少年，大多數(shù)由A群M12型鏈球菌引起。臨床表現(xiàn)為蛋白尿、浮腫和高血壓。 B.風(fēng)濕熱:主要在咽炎后有可能發(fā)生，由A族鏈球菌的多種型別引起。臨床表現(xiàn)以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。,其他鏈球菌引起的疾病,B群鏈球菌人類呼吸道、陰道、直腸正常菌群 -新生兒：敗血癥、腦膜炎 -嬰幼兒：敗血癥、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎 -成年人：腎盂腎炎、肺炎、子宮內(nèi)膜炎 甲型溶血性鏈球菌口腔、鼻咽腔正常菌群 -亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎 -齲齒 D族鏈球菌呼吸道、泌尿生殖道的正常菌群 可引起

11、泌尿道感染、敗血癥和心內(nèi)膜炎。,肺炎鏈球菌的菌落及菌體形態(tài),肺炎鏈球菌的鑒別,1、形態(tài)：G+球菌，矛頭狀，成雙或短鏈狀排列 2、菌落特征：在血平板上，菌落細(xì)小，中央凹陷，周圍有草綠色溶血環(huán) 3、主要生化反應(yīng)：分解菊糖，膽鹽溶菌試驗(yàn)陽性，OP試驗(yàn)陽性 4、肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌菌落相似，應(yīng)加以鑒別：OP試驗(yàn)；膽汁溶菌試驗(yàn),4、意義：正常存在人的口腔及鼻咽部，抵抗力降低時(shí)，引起大葉性肺炎、支氣管肺炎?；撔阅X膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膿腫、菌血癥和心內(nèi)膜炎等。,腸球菌的鑒別,1、形態(tài)：G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。 2、菌落特征：血平板上，較小、灰白色，濕潤(rùn)，凸起、有或無溶血環(huán)的菌落。 3、生化反應(yīng),腸球菌種間鑒別,臨床意義,糞