1、液相色譜基礎(chǔ),本章內(nèi)容： 液相色譜發(fā)展史 液相色譜的基本概念 影響峰形擴展的因素,歷史回顧,高效液相色譜,(HPLC),進(jìn)樣口,檢測器,色譜圖,色譜柱,溶劑,泵,混合器,HPLC 結(jié)構(gòu)框圖,HPLC 結(jié)構(gòu)框圖,色譜參數(shù),Detector Response,Time,A,B,W,W,A,B,Inject,t0,tR(A),tR(B),t = 保留時間,t = 死時間,R,W = 峰底寬度,0,定性和定量,影響R值的因素,分離選擇性,改用不同的流動相,改變流動相的組成,改變流動相pH值,改變柱溫,應(yīng)用特殊的化學(xué)效應(yīng),改變固定相,(),改變分離選擇性的方法,柱效,Detector Response,

2、Inject,Time,高柱效,低柱效,A,A = 渦流擴散多徑擴散,仔細(xì)填充柱子,使用均一的載體,線 速 度,H,E,T,P,擴散,初始,帶寬,最終,帶寬,擴散,C,.,u,C = 傳質(zhì)阻力,在低流速下可以降低傳質(zhì)阻力,使用小顆粒載體可以降低傳質(zhì)阻力,H,E,T,P,線速度,滯流的 流動相,流動相,固定相,柱外效應(yīng),樣品體積,I.,連接管路的體積,色譜柱進(jìn)口設(shè)計,色譜柱出口設(shè)計,檢測池體積 ( 10 L ),II.,III.,IV.,V.,降低輸出回路響應(yīng)時間,VI.,如何提高分離度,通過下述方法增加保留時間:,選擇合適的分離參數(shù) 增加色譜柱長度 增加固定相濃度,通過下述方法降低譜帶寬度:,

3、使用均一的載體 仔細(xì)填充柱子 選擇粒度小的載體 優(yōu)化流速 減小進(jìn)樣量 降低系統(tǒng)死體積 降低輸出回路響應(yīng)時間,HPLC 儀器簡介,本章內(nèi)容： 流動相及貯液罐 高壓輸液泵及梯度洗脫裝置 進(jìn)樣裝置 色譜柱 檢測器 色譜數(shù)據(jù)處理裝置,優(yōu)化流路減小死體積 流路自上而下,堆積配置,每個部分有獨立的電源 1100各部件均由CAN線連接 檢測器與化學(xué)工作站之間用 LAN線連接 (或用HP-IB連接) 脫氣機與泵之間用遙控線連接 (錯誤信號輸出) BCD板用于外設(shè)和讀取樣品瓶數(shù)量,連線,Agilent 1100 泵和在線脫氣機,Agilent 1100系列泵,G1310A, G1311A, G1312A, G1

4、354A 和Agilent 1100 系列在線真空脫氣裝 置(G1322A),Agilent 1100系列真空脫氣機,在線真空脫氣機工作原理,HP 1100 Series On-line Degasser: Influence on Detector Baseline,no degassing,helium degassing,HP on-line degassing,Absorbency,1,2,3,4,5,6,7,8,9,Time (min),Solvent: methanol; UV signal: 210 nm,溶劑傳輸系統(tǒng),往復(fù)活塞泵(單向閥),Gold Seal,Sapphire,

5、Insert,Ruby Ball,Spring,Insert,泵頭 - 單元/四元泵,Lock Screw,Agilent 1100系列四元泵G1354A; 真空脫氣機為標(biāo)準(zhǔn)配置!,建議 . 使用2，4，8mm內(nèi)徑的柱子 流量范圍從 0.2 到 10 ml/min 應(yīng)用于研究和常規(guī)分析,特征/優(yōu)點 四通路/低壓混合能靈活地進(jìn)行恒梯度或梯度洗脫。 無需消耗昂貴的He而能進(jìn)行高性能真空脫氣。 自動沖程調(diào)節(jié)，混合非常均勻，降低基線噪音。 對于高鹽流動相，可選擇Seal Wash清洗密封墊。,Agilent 1100系列四元泵G1354A 包括真空脫氣機,溶劑柜,真空脫氣機 G1322A,四元泵 G1

6、311A,四元泵工作原理,Authoring Division Name File Name Security Notice (if required),Vacuum Chamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,Purge Valve,Waste,to injection device,from solvent bottles,MCGV 比例閥 AIV 主動閥 OBV 單向閥,Authoring Division Name File Name Security Notice (if required),Vacuum Chamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,Waste

7、,from solvent bottles,手動進(jìn)樣器六通閥,六通閥之扎針,泵,色譜柱,定 量 環(huán),廢液,排空,INJECT,六通閥之裝樣,泵,色譜柱,定 量 環(huán),廢液,排空,INJECT,LOAD,泵,色譜柱,定 量 環(huán),廢液,排空,六通閥之進(jìn)樣,INJECT,LOAD,泵,色譜柱,定 量 環(huán),廢液,排空,六通閥之小刻度進(jìn)樣一,INJECT,LOAD,手動閥,手動進(jìn)樣器,前視圖,后視圖,樣品定量管,固定相結(jié)構(gòu),本章內(nèi)容： 固定相載體結(jié)構(gòu) 正相色譜固定相 鍵合相色譜固定相,正相 HPLC,極性固定相,有機流動相,傳統(tǒng),目前,硅膠,氧化鋁,氰基,二醇基,氨基,吸附色譜,鍵合相,適用于:,同分異構(gòu)

8、體的分離.,在有機/水流動相中不溶化合物的分離.,適用于中等極性化合物分離.,硅膠柱和氧化鋁柱的缺點,容易脫尾,樣品被催化分解,不易梯度洗脫,含水量要控制,Particles of Column,Packings,50m,Large Porous,Particles,30m,Pellicular,Beads,3-10m,Microparticulates,2m Active Surface,Agilent 1100 柱溫箱,柱溫箱的特征及優(yōu)點,推薦 . 溫度控制范圍： 低于室溫1080 保留時間的再現(xiàn)性需要穩(wěn)定 的溫度 如果需要在高于或低于室溫 進(jìn)行分離操作時，需要使用 柱溫箱,特征/優(yōu)點 大

9、空間，可以容納三根30cm長色譜柱 更換柱子非常方便 降溫非常方便 安裝柱識別可以記錄進(jìn)樣次數(shù) 使用切換閥可以進(jìn)行柱切換(可選) 兩個單獨的加熱區(qū)可以分別控制溫度 可以進(jìn)行程序升溫 內(nèi)部死體積小(左側(cè)3L，右側(cè)6L),Agilent 1100 二極管陣列檢測器,推薦 . 研究及方法開發(fā) 多波長檢測 峰純度檢查 峰確認(rèn)（定性）,性能/優(yōu)點. 靈敏度高 (1x10-5AU)。 兩個燈，波長檢測范圍寬（190950 nm）。 1024個二極管 和 1 nm 狹縫 。 可變狹縫。 根據(jù)不同需要選擇流動池。 可以進(jìn)行自動峰檢索 。 利用紫外譜圖進(jìn)行峰確認(rèn),Front Elements - DAD,DAD

10、光路,鎢燈,耦合透鏡,氘燈,光源透鏡 (消色差透鏡),氧化鈥濾光片,支撐透鏡,Flow cell,光譜透鏡,光柵,陣列,狹縫,檢測器使用統(tǒng)計,定性分析-探索三維立體影像,DAD測試功能及診斷,DAD自檢 暗電流測試 燈強度測試 鈥玻璃測試 流通池測試,濾光片測試 波長校正 模擬信號輸出測試,色譜數(shù)據(jù)處理裝置,1.計算機 2.色譜工作站,溶劑準(zhǔn)備：過濾,使用小于 0.5m過濾膜.,有機物 - Teflon,水 - Nylon 66,防止固體顆粒損傷儀器或柱頭,日常維護(hù),溶劑準(zhǔn)備,溶劑脫氣,目的 排除溶解在流動相中的氧氣和氮氣 脫氣方法 He脫氣 真空脫氣 回流加熱脫氣 超聲脫氣,溶劑信息,避免使用下列對不銹鋼有腐蝕性的溶劑： 鹵化物堿金屬溶液和相應(yīng)的酸溶液。 高濃度的無機酸例如：硝酸和硫酸。 能夠形成鹵素自由基或酸的氯化試劑及其混合物。 含有過氧化物的色譜級醚必須用氧化鋁干燥劑。 在有機溶劑中的有機酸溶液。 含有強絡(luò)合劑的溶液。 四氯化碳和異丙醇或THF混合液。,初始化和平衡,預(yù)柱和保護(hù)柱,色譜柱保護(hù),過濾所有的溶劑和樣品 使用保護(hù)柱 儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中緩沖液 柱子在不使用時，兩端密封保存