1、高效液相色譜法,實(shí)驗(yàn)安排,本周 HPLC原理、上機(jī)創(chuàng)建方法 下周 凱氏定氮（實(shí)驗(yàn)六 酚磺乙胺注射液的含量測定） 下下周 HPLC法用于阿司匹林腸溶片中游離水楊酸檢查和阿司匹林含量測定,HPLC在藥分中的應(yīng)用,鑒別 雜質(zhì)檢查 含量測定、溶出度、釋放度,色譜法原理,利用各組分理、化性質(zhì)的差異，各組分程度不同的分配到互不相溶的兩相中。當(dāng)兩相相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，各組分在兩相中反復(fù)多次重新分配，實(shí)現(xiàn)差速遷移，結(jié)果使組分得到分離。,HPLC原理,固定相 流動(dòng)相 檢測器 樣品,HPLC原理,固定相（正相、反相、離子對、手性） 流動(dòng)相（酸堿抑制、離子對） 檢測器（UV、MS、ELSD） 樣品 （前處理）,注意,固定相

2、保存的體系 流動(dòng)相條件、流速（壓力） 檢測器儀器選擇、條件選擇（如檢測波長等） 樣品進(jìn)樣方法（注意滿環(huán)進(jìn)樣）,組成： 貯液瓶 高壓泵 進(jìn)樣器 色譜柱 檢測器,Agilent HPLC概況,HPLC實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備,安裝實(shí)驗(yàn)所需色譜柱； 配制流動(dòng)相（HPLC級）； 流動(dòng)相過濾、超聲脫氣； 配制樣品，過0.45m微孔濾膜；,六通閥進(jìn)樣,Load,Inject,組成： 貯液瓶 高壓泵 進(jìn)樣器 色譜柱 檢測器,Agilent HPLC概況,開機(jī),打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Windows 系統(tǒng)； 打開液相色譜儀電源，待自檢完成后，雙擊“HPLC聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1220LC連接，進(jìn)入工作站；,開機(jī)后的界面,建立

3、分析方法,進(jìn)樣方式 泵設(shè)置 柱溫箱設(shè)置 波長設(shè)置 采集時(shí)間,“方法”菜單中選擇“編輯完整方法” 項(xiàng),選中除“數(shù)據(jù)分析 ”外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊“確定”。,在“方法注釋”中加入方法的信息（如：測試方法），也可不輸入，點(diǎn)擊 “確定” 。,選擇進(jìn)樣源/位置：選擇“手動(dòng)”，點(diǎn)擊“確定”。,泵設(shè)置,柱溫箱設(shè)置,波長設(shè)置,點(diǎn)擊“方法”菜單，選中“方法另存為”，進(jìn)入以下畫面：,圖譜采集,平衡色譜柱 進(jìn)樣，采集數(shù)據(jù),平衡色譜柱，打開泵和柱溫箱，平衡10分鐘后再開燈,儀器準(zhǔn)備就緒，且基線平整后，可開始進(jìn)樣。,在“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項(xiàng),系統(tǒng)等待進(jìn)樣,數(shù)據(jù)采集中,到達(dá)設(shè)定的停止時(shí)間后，數(shù)據(jù)采集自動(dòng)停止； 若要再次進(jìn)樣，則點(diǎn)擊“單次進(jìn)樣”，系統(tǒng)等待進(jìn)樣后，扳動(dòng)六通閥進(jìn)樣，開始采集數(shù)據(jù)； 重復(fù)以上操作，直到待測樣品分析完畢。,圖譜處理及報(bào)告打印,點(diǎn)擊桌面上“HPLC（脫機(jī)）”圖標(biāo),調(diào)用圖譜,譜圖優(yōu)化,積分,手動(dòng)積分按鈕：,設(shè)定報(bào)告,選擇報(bào)告類型：如“簡短報(bào)告”,預(yù)覽和打印報(bào)告,設(shè)置打印機(jī),生成PDF文件,沖洗系統(tǒng)、關(guān)機(jī),完成檢測后，首先關(guān)閉檢測器，用水沖洗10分鐘，再用甲醇沖