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文檔簡介

1、紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨基作用,目的 1.驗證氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用 2.掌握紙上層析法分離和鑒定氨基酸的基本原 理和方法。,原理 在轉(zhuǎn)氨酶的作用下，某一氨基酸去掉-氨基生成相應(yīng)的-酮酸，而另一種-酮酸得到此氨基生成相應(yīng)的氨基酸的過程，稱為氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用。,層析理論 層析法（色譜法）：是利用混合物各組分物理、化學(xué)性質(zhì)（如溶解度、吸附能力、電荷和分子量等）的差別，使各組分在支持物上集中分布在不同的區(qū)域，借以將各組分分離。,固定相濾紙結(jié)合的水 流動相乙醇 由于混合物中的有效成分和雜質(zhì)受固定相的阻力和受流動相的推力影響不同，各組分移動速度不同，有效成分和雜質(zhì)在這兩個相中連續(xù)多次地進行分配、吸附和交換作用，最

2、終結(jié)果是使混合物得到分離。,步驟 1.制備肝勻漿 2.轉(zhuǎn)氨基反應(yīng) 取干凈試管2支，分別標明測定管與對照管，按下表操作。,3.準備：取直徑15cm圓形濾紙1張，用圓規(guī)在濾紙正中作一半徑為1cm的小圓圈，用鉛筆通過圓心作兩點互相垂直的線，并在兩線外端等距離點4個原點，標明測、對、谷、丙。在濾紙圓心處打一小孔（如鉛筆芯粗細），另取同類濾紙小片1.5cm3cm，下三分之二剪成須狀。將其卷成圓筒如燈芯狀，插入小孔（略突出于濾紙面）,步驟 4.點樣 分別用采血管吸取測定管上清液、對照管上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各1滴，依次點在濾紙上標明測、對、谷、丙的點樣處。注意點樣斑點不可太大。直徑應(yīng)小于0.5cm。必要時可再點一次，每點一滴，用吹風(fēng)機吹干后方可再點第二滴，并且點樣量應(yīng)力求均勻相等。,5.層析 將濾紙放在培養(yǎng)皿上，燈芯下端浸入層析液中進行層析。約40分鐘后，去除燈芯，立即用鉛筆劃出溶劑前沿，用吹風(fēng)機吹干。,6.顯色 將濾紙平放在培養(yǎng)皿上，用噴瓶向濾紙均勻噴灑0.1%茚三酮溶液，再用吹風(fēng)機吹干，可見紫紅色的同心弧形斑點。,7.計算 按下表記錄有關(guān)數(shù)據(jù)，計算Rf值。,將“對”、“測”各色斑的

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