1、藥物色譜分析-5高效液相色譜法分類及儀器裝置,齊永秀 藥物分析教研室,一、高效液相色譜法的定義及分類 二、高效液相色譜法的特點 三、高效液相色譜儀的基本裝置,主要內(nèi)容,一、高效液相色譜法的定義,高效液相色譜（HPLC）：在經(jīng)典液相色譜法基礎(chǔ)上,采用 GC理論和實驗技術(shù),以高壓輸液系統(tǒng)、高效固定相、高靈 敏檢測系統(tǒng)形成一種分離和分析方法。 HPLC特點： “三高”、“一快”、“一廣” 高選擇性可將性質(zhì)相似的組分分開；高效能柱效可 達30000塊/米，多次利用組分性質(zhì)差異進行分離；高靈 敏度10-910-12g，適于痕量分析；分析速度快幾幾 十分鐘完成分離分析,一次可測多種樣品；應(yīng)用范圍廣 80%

2、有機物質(zhì)能得到分析。,二、高效液相色譜法與經(jīng)典色譜法的比較,主要區(qū)別：固定相、輸液設(shè)備和檢測手段差別,經(jīng)典LC僅做為一種分離手段,HPLC可用于分離和分析,1、分析對象差別 GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品， 高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物 的樣品不能檢測（占有機物的20%） HPLC：溶解后能制成溶液的樣品，不受樣品揮發(fā) 性和熱穩(wěn)定性的限制，且分子量大、難氣化、熱穩(wěn) 定性差及高分子和離子型樣品也可檢測（占有機物 的80%）,二、高效液相色譜法與氣相色譜法比較,2、流動相差別 GC：流動相為惰性氣體，種類少，組分與流動相 無親合作用力，組分只與固定相作用而實現(xiàn)分離 HP

3、LC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作 用力，為提高柱的選擇性、改善分離增加了有力因 素，且流動相種類較多，選擇余地大。選用不同比 例的兩種或兩種以上液體作為流動相，可以使難分 離的組分得到很好的分離,3、操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫高壓操作（液體粘度大，峰展寬?。?三、HPLC主要類型和分離方法,四類基本類型色譜法 分配色譜法（組分在兩相溶解性能的差異） 吸附色譜法（組分在兩相吸附作用力的差異） 離子交換色譜法（離子交換能力的差異） 空間排阻色譜法（組分分子線團尺寸差異）,三、高效液相色譜儀的基本裝置,三、高效液相色譜儀的基本裝置,1.高壓輸液系統(tǒng) (一)儲液罐(對洗脫液

4、化學(xué)惰性,預(yù)先脫氣) 常用脫氣方式:真空脫氣機脫氣法 超聲波脫氣法：500ml溶液約2030min 吹氦脫氣法,三、高效液相色譜儀的基本裝置,1.高壓輸液系統(tǒng) (二)高壓輸液泵 要求：流量穩(wěn)定、輸出壓力高、流量范圍寬、耐酸 堿和緩沖液腐蝕、泵體易清洗 類型：往復(fù)柱塞泵、注射泵、氣動放大泵、液壓隔 膜泵,三、高效液相色譜儀的基本裝置,1.高壓輸液系統(tǒng) (三)梯度洗脫裝置 低壓梯度洗脫裝置： 高壓梯度洗脫裝置：,三、高效液相色譜儀的基本裝置,2.進樣系統(tǒng) 自動進樣器進樣 六通閥進樣,三、高效液相色譜儀的基本裝置,3.色譜柱 要求:分離度高、柱容量大、分析速度快 結(jié)構(gòu)：增加色譜柱的柱長可以提高柱效，

5、目前的 裝填設(shè)備和技術(shù)，只能保證柱長在100250mm之間 獲得好的效果。,三、高效液相色譜儀的基本裝置,4.檢測器 要求:靈敏度高、響應(yīng)對流動相流量和溫度不敏感、不引起柱外譜帶展寬、線性范圍寬、適用范圍廣 類型：紫外吸收檢測器（UVD），蒸發(fā)光散射檢測器 （ELSD），折光指數(shù)檢測器（RID），電導(dǎo)檢測器 （ECD），熒光檢測器（FLD）和質(zhì)譜檢測器（MSD）,三、高效液相色譜儀的基本裝置,4.檢測器-光電二極管陣列紫外檢測器 同時得到多個波長的色譜圖 對每個色譜峰的指定位置實時記錄吸收光譜圖 在色譜運行期間逐點進行光譜掃描,得到時間- 波長-吸光度三維圖形 可以選擇整個波長范圍內(nèi)的寬譜帶檢測,一次進樣,所有組分均能檢測,三、高效液相色譜儀的基本裝置,4.檢測器-光電二極管陣列紫外檢測器主要應(yīng)用特色 色譜峰的純度檢查