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文檔簡介

1、第七個實驗是淀粉酶活性的測定。首先，實驗的目的是掌握測定淀粉酶活性的原理和基本方法。第二，實驗原理是酶是一種高度特異的催化劑。它的催化能力由酶的活性來表示。酶活性，又稱酶活性，是指酶在最適溫度和最適酸堿度下催化某一化學反應的初始速度。本實驗在37和pH6.8條件下，用一定量的-淀粉酶溶液在一定的初始反應時間內(nèi)將淀粉轉(zhuǎn)化為還原糖，然后通過與DNS試劑反應得到還原糖的量，從而計算出酶反應的初始速度，即酶的活性。1 U=1毫克還原糖/最小酶，3。實驗材料和設(shè)備。原料淀粉酶溶液(粗酶溶液、鹽析溶液、脫鹽溶液)2。儀器分光光度計恒溫水浴沸騰水浴3。設(shè)備校準試管：25 mL17移液管：1 mL3(取稀釋的

2、酶溶液)燃燒杯：250 mL1滴管：2個洗耳球：2個洗瓶，試管架，移液管架，玻璃棒：每支移液管1支：專用2，3，5-二硝基水楊酸試劑(DNS試劑)3支，磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，pH6.8)，含0.3%氯化鈉4支，氫氧化鈉溶液(2.5mol/L)，5支。操作步驟，1。淀粉酶的制備(1)將硫酸銨沉淀純化蛋白質(zhì)實驗中得到的粗酶提取液解凍，取上清液0加入蒸餾水稀釋至25毫升，搖勻備用。(2)將硫酸銨沉淀蛋白純化實驗中得到的鹽漬蛋白解凍，取上清液0.05毫升，加入蒸餾水稀釋至25毫升，搖勻備用。(3)將葡聚糖凝膠層析脫鹽得到的蛋白質(zhì)溶液解凍，取0.05毫升，稀釋。收集1支試管的學生，稀釋0.05毫升至15毫升，收集2支試管的學生，稀釋0.05毫升至10毫升，將試管按順序排列，加入約20毫升淀粉溶液，標記，并將其轉(zhuǎn)移至37號水浴罐。因為淀粉含有少量的還原糖，有些溶液含有色素和雜質(zhì)，所以有必要檢查酶是否不水解淀粉。37、室溫、6。結(jié)果2。根據(jù)圖表中的實驗結(jié)果和“3，5-二硝基水楊酸比色法測定糖含量”實驗中的標準曲線，計算淀粉酶活性。需要詳細的程序。7.思考問題1。測定酶活性時應注意哪些反應條件？為什么？2.本實驗中兩次加入氫氧化鈉溶液的意義是什么？8.分析1。三種酶活性的順

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