1、抗原提呈細(xì)胞與抗原的加工及提呈,哈爾濱醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室 分子生物學(xué)館411室 鞠環(huán)宇,學(xué)習(xí)目標(biāo),掌握：抗原提呈細(xì)胞的概念、種類及特點(diǎn) 熟悉：抗原提呈細(xì)胞對抗原的攝取和加工處理途徑,能夠加工抗原并以抗原肽-MHC分子復(fù)合物的形式將抗原肽提呈給T細(xì)胞的一類細(xì)胞，在機(jī)體的免疫識別、免疫應(yīng)答與免疫調(diào)節(jié)中起重要的作用。,抗原提呈細(xì)胞 (antigen presenting cell, APC),一、抗原提呈細(xì)胞的分類,1.通過MHC類分子提呈外源性抗原的APC 專職APC (professional APC) 組成性表達(dá)MHC-類分子和協(xié)同刺激分子和黏附分子，抗原提呈能力強(qiáng)，包括巨噬細(xì)胞(M

2、)、樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)和B細(xì)胞。 非專職性APC (non-professional APC) 誘導(dǎo)性表達(dá)MHC類分子，抗原提呈能力弱，包括內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等。 2.通過MHC類分子提呈內(nèi)源性抗原的APC 廣義的APC 能夠降解加工細(xì)胞內(nèi)抗原并以抗原肽-MHC類分子復(fù)合物的形式提呈給CD8+T細(xì)胞,DC由美國學(xué)者 Steinman于1973年 首次在小鼠淋巴結(jié)中 發(fā)現(xiàn)，因其在成熟時 伸出許多樹突狀或偽足狀突起而得名，是迄今所知的能刺激初始T細(xì)胞活化的主要專職APC。,一、 樹突狀細(xì)胞,（一）DC的來源、分布與表面標(biāo)志 （二）樹突狀細(xì)胞的分化、發(fā)育與

3、遷移 （三）樹突狀細(xì)胞的功能,主要內(nèi)容,1. 來源,2 . DC的分布與分類,髓系前體階段DC:功能為產(chǎn)生各種髓系DC Immature DC: 廣泛分布于機(jī)體內(nèi)，如上皮下及 多數(shù)組織器官心臟、腎臟，但大腦除外.高表達(dá)各種受體,功能為攝取加工處理抗原 遷移期DC:隨遷移逐漸成熟 Mature DC: 淋巴組織,抗原提呈能力增強(qiáng),DC的分類, 按照譜系來源分類,*髓樣樹突狀細(xì)胞（myeloid dendritic cell，MDC） *淋巴樣樹突狀細(xì)胞（lymphoid-derived dendritic cell， LDC）,按照組織分布分類,1）淋巴樣組織中的DC 并指狀DC (interd

4、igitating cell，IDC)： 外周淋巴組織 胸腺依賴區(qū) 濾泡樣DC (follicular DC，F(xiàn)DC)：淋巴濾泡生發(fā)中心 胸腺DC (thymic DC，TDC ) ：胸腺髓質(zhì) 2）非淋巴樣組織中的DC 郎罕細(xì)胞（Langerhans cell）: 表皮和上皮 間質(zhì)性DC （interstitial DC）: 心肺腎肝胃間質(zhì) 3）體液中的DC 隱蔽DC （veiled cell）：輸入淋巴液 血液DC （peripheral blood DC）：外周血,3. DC的表面標(biāo)志,DC尚未發(fā)現(xiàn)特征性的表面標(biāo)志。對DC的鑒定除了在細(xì)胞形態(tài)上加以區(qū)別外，常用細(xì)胞表面標(biāo)志組合等進(jìn)行鑒別。

5、常見的DC表面標(biāo)志有MHC-I、MHC-、CD11a、CD11c、ICAM-1、CD58 、CD40、CD44、CD83、CD80、CD86、整合素（1、2）、DC-SIGN、FcR、C3bR及各種趨化因子受體等。,（二）樹突狀細(xì)胞的分化、發(fā)育與遷移,骨髓DC前體,血流,非淋巴組織,分化,非成熟DC,定居,上皮組織、胃腸道、生殖道和 泌尿管道、氣道以及實(shí)質(zhì)臟器的間質(zhì),具有很強(qiáng)的攝取、處理和加工 抗原的能力，但提呈抗原能力弱,細(xì)胞因子和抗原刺激下,DC細(xì)胞成熟并遷移進(jìn)入局部淋巴結(jié),攝取、處理和加工抗原的能力變?nèi)?，但提呈抗原能力逐漸增強(qiáng),外周未成熟DC從皮膚、各種臟器及血液等處捕獲抗原后移行到淋

6、巴結(jié)或脾臟等次級淋巴器官的過程，伴隨著DC的成熟，表面標(biāo)志發(fā)生一系列的變化。其過程受到諸多因素的影響，包括抗原的種類、各種細(xì)胞因子、與其它細(xì)胞間的相互作用等，形成復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制。,影響DC成熟的因素,1、抗原的刺激：抗原的刺激是DC成熟的早期事件， 簡言之，凡能被DC捕獲并內(nèi)化的抗原均能激活DC 并導(dǎo)致其成熟。,2、細(xì)胞因子：影響DC成熟的細(xì)胞因子種類較多，包括 GM-CSF、IL-4、TNF-、TGF-、IL-10等 。 目前得到公認(rèn)的是GM-CSF為DC成熟所必需的細(xì)胞 因子，但單獨(dú)使用GM-CSF并不能誘導(dǎo)DC完全成熟， 只有聯(lián)合運(yùn)用IL-4、TNF-或IFN-等細(xì)胞因子，才 能得到具有

7、典型形態(tài)、表型及功能的DC。,DC的成熟,組織中未成熟DC - 強(qiáng)吞噬和吞飲作用 - 處理抗原能力強(qiáng) - 低水平的MHC - 缺乏共刺激分子 - 提呈抗原能力弱 淋巴組織中成熟DC - 不再有吞噬能力 - 表達(dá)共刺激分子(B7-1, B7-2) - 高表達(dá)MHC和黏附分子 - 抗原提呈能力強(qiáng),未成熟DC 成熟DC,主要功能 抗原捕獲、加工處理 提呈抗原 Fc受體和甘露糖受體的表達(dá) + 存在部位 非淋巴組織器官 外周淋巴組織 胞漿內(nèi)MHC數(shù)量 多 少 表面MHC-類分子的數(shù)量 106 7106 表面MHC-類分子的半衰期 10hr 100hr 共刺激分子（B7等）的表達(dá) 或低表達(dá) + 黏附分子(

8、LFA-3,ICAM-1等)的表達(dá) 或低表達(dá) + 活化初始T細(xì)胞的能力 無 強(qiáng),未成熟DC與成熟DC的比較,（三）DC的生物學(xué)功能,1. 識別、攝取和加工抗原，參與固有免疫 2. 抗原提呈與免疫激活作用 3. 免疫調(diào)節(jié)作用 4. 免疫耐受的誘導(dǎo)與維持,1、識別、攝取和加工抗原，參與固有免疫,DC表達(dá)多種模式識別受體以及Fc受體，可識別多種微生物或抗原抗體復(fù)合物，通過胞飲作用、吞噬作用和受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用等攝取抗原物質(zhì)。 pDC活化后可快速產(chǎn)生I型干擾素，參與抗病毒固有免疫應(yīng)答。,2、抗原提呈與免疫激活作用,1.提供初始T細(xì)胞活化的啟動信號 2.成熟DC高表達(dá)共刺激分子為T細(xì)胞活化提供第二信號

9、3.產(chǎn)生的細(xì)胞因子進(jìn)一步誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞增殖和分化，從而啟動完整免疫應(yīng)答 4.DC能通過誘導(dǎo)Ig的類別轉(zhuǎn)換和釋放某些可溶性因子等促進(jìn)B細(xì)胞增殖與分化,DC可分泌多種細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)免疫功能。 人DC：IL-1、IL-1、IL-8、INF-、 TNF-和GM-CSF等； 小鼠DC：可分泌IL-6和IL-12等。 DC還可分泌多種趨化因子，介導(dǎo)其他免疫細(xì)胞的趨化作用。,3、免 疫 調(diào) 節(jié),4、免疫耐受的誘導(dǎo)與維持 未成熟DC可誘導(dǎo)外周免疫耐受 不表達(dá)共刺激分子,不能激活T細(xì)胞,誘導(dǎo)T細(xì)胞失能,引起自身耐受; 誘生調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,分泌IL-10,TGF-,抑制T細(xì)胞應(yīng)答,促進(jìn)外周耐受形成; 胸腺DC參與

10、胸腺內(nèi)T細(xì)胞的陰性選擇,清除自身反應(yīng)性T細(xì)胞，參與T細(xì)胞的中樞耐受.,骨 髓,血 液,組 織,多能干細(xì)胞,髓樣干細(xì)胞,單核母細(xì)胞,前單核細(xì)胞,單核細(xì)胞,單核細(xì)胞,巨噬細(xì)胞 結(jié)締組織：組織細(xì)胞 肺：肺泡巨噬細(xì)胞 肝：枯否細(xì)胞 脾與淋巴結(jié)：游走與固定巨噬細(xì)胞 漿膜腔：胸、腹腔巨噬細(xì)胞 神經(jīng)組織：小膠質(zhì)細(xì)胞 骨：破骨細(xì)胞 關(guān)節(jié)：滑膜A型細(xì)胞,二、單核吞噬細(xì)胞,表面標(biāo)志,1. MHC類分子 2.FcR和CR1/3/4 3.趨化因子受體 4.其他受體 粘附分子（LFA-1,ICAM-1) 共刺激分子(B7,CD40) LPS受體(CD14)、 CKR等,單核-巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能 1.吞 噬 作 用,巨

11、噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌,2. 處理及提呈抗原,3.免疫調(diào)節(jié) ：通過提呈抗原、產(chǎn)生和分泌各種細(xì)胞因子，產(chǎn)生補(bǔ)體系統(tǒng)分子及凝血因子、組織修復(fù)因子等；生成胞內(nèi)酶類；產(chǎn)生某些神經(jīng)肽及激素等發(fā)揮作用。 正調(diào)：產(chǎn)生IL-1/12，TNF- 負(fù)調(diào)：前列腺素、TGF- 4.抗腫瘤作用：直接殺傷、ADCC、激發(fā)抗瘤免疫 5.其他：致炎癥、調(diào)節(jié)生血、止血、參與組織修復(fù)和再生等,三、B 細(xì) 胞,B細(xì)胞能持續(xù)表達(dá)MHC-II類分子，有效提呈抗原給CD4+Th細(xì)胞，也表達(dá)B7-1分子，對活化的Th細(xì)胞有協(xié)調(diào)刺激作用。 機(jī)制：BCR結(jié)合抗原決定簇，發(fā)生受體介導(dǎo)內(nèi)吞作用，被吞入的抗原分子水解成抗原性多肽，與MHC-II類分子形成復(fù)

12、合物，表達(dá)在B細(xì)胞表面，并提呈給CD4 + Th細(xì)胞，誘導(dǎo)Th細(xì)胞活化，而活化的Th細(xì)胞可選擇性誘導(dǎo)特異性B細(xì)胞活化。,第二節(jié) 抗原的加工和提呈 （antigen processing and presentation）,將抗原加工處理、降解為抗原肽片段并與胞內(nèi)MHC分子結(jié)合的過程稱為抗原加工或處理.抗原肽片段與MHC分子結(jié)合形成復(fù)合物被T細(xì)胞的TCR識別的過程,稱為抗原提呈。,一、APC提呈抗原的分類,* 外源性抗原(exogenous antigen)： 來源于細(xì)胞外的抗原，例如：被吞噬的細(xì)胞、細(xì)菌或蛋白質(zhì)抗原等。通過溶酶體途徑由MHC類分子提呈給CD4+T細(xì)胞。 * 內(nèi)源性抗原(endo

13、genous antigen)： 細(xì)胞內(nèi)合成的抗原，例如：病毒感染的細(xì)胞內(nèi)合成的蛋白、腫瘤細(xì)胞內(nèi)合成的腫瘤抗原和某些細(xì)胞內(nèi)的自身抗原等。通過胞質(zhì)溶膠途徑由MHC類分子提呈給CD8+T細(xì)胞。,外源性抗原,內(nèi)源性抗原,-MHC分子抗原提呈途徑 -MHC分子抗原提呈途徑 -脂類抗原的CD1分子提呈途徑 -非經(jīng)典的抗原提呈途徑,二、APC加工和提呈抗原的途徑,外源性抗原被APC攝取、加工、處理為抗原肽，與MHC-II類分子形成抗原肽-MHC-II類分子復(fù)合物，表達(dá)于APC表面，供CD4+T細(xì)胞識別的過程。,溶酶體（MHC-II類分子)途徑,Y,胞飲,吞噬,膜 Ig受體介導(dǎo)的內(nèi)吞,（一）外源性抗原的攝取

14、、加工和處理,補(bǔ)體受體介導(dǎo)的吞噬,Fc R介導(dǎo)的吞噬,調(diào)理作用,形成內(nèi)體,與溶酶體融合成吞噬溶酶體 胞質(zhì)中存在一種稱為MHC類小室，與吞噬溶酶體融合，降解抗原多肽，大小適合MHC分子結(jié)合。,阻止新合成的未折疊的自身蛋白結(jié)合未成熟MHC-II類分子,Ii鏈通過非共價鍵結(jié)合未成熟MHC-II類分子，使之穩(wěn)定，形成(Ii)3九聚體,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣聯(lián)蛋白促進(jìn)異二聚體折疊和組裝,(二)抗原肽-MHC II類分子復(fù)合物的形成和轉(zhuǎn)運(yùn),參與II類分子的組裝和折疊； 封閉II類分子的肽結(jié)合槽 阻止II類分子與胞漿中內(nèi)源性抗原結(jié)合 引導(dǎo)組裝后的MHC-II類分子轉(zhuǎn)運(yùn)至MIIC,Ii 的作用,(Ii)3九聚體從高爾基體

15、進(jìn)入吞噬溶酶體,融合成MIIC，在此負(fù)載多肽片段.,Class II associated invariant chain peptide (CLIP) II類分子相關(guān)的恒定鏈肽段,(inv)3 complexes directed towards endosomes by invariant chain,Cathepsin L degrades Invariant chain CLIP blocks groove in MHC molecule,MHC Class II containing vesicles fuse with antigen containing vesicles,CLI

16、P解離,?,多肽片段如何穩(wěn)定結(jié)合于糟狀結(jié)合位點(diǎn)？,HLA-DM 催化 CLIP的解離,MHC II-多肽復(fù)合物的表面表達(dá),外源性抗原的提呈過程,溶 酶 體 途 徑,外源性抗原 新合成的MHC-II類分子 （內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中） 吞噬小體 li占據(jù)抗原結(jié)合槽 溶酶體 酸性蛋白酶 MIIC 吞噬溶酶體 li CLIP 蛋白酶作用 HLA-DM 降解成1318aa小肽 + CLIP脫落,暴露抗原結(jié)合槽 抗原肽-MHC II類分子復(fù)合物 轉(zhuǎn)運(yùn)至APC表面,供CD4+T細(xì)胞識別,吞噬、吞飲,胞質(zhì)溶膠（MHC類分子）途徑,內(nèi)源性抗原被胞質(zhì)溶膠中蛋白酶體降解為小分子抗原肽后，與 MHC-I類分子結(jié)合，形成抗原肽/ M

17、HC-I類分子復(fù)合物，供CD8+T細(xì)胞識別的過程。 如病毒抗原、腫瘤抗原、組織抗原等主要經(jīng)此途徑提呈。,(一)抗原的加工處理,（）泛素化：,內(nèi)源性抗原泛素,去折疊，成螺旋線形,脫去泛素,進(jìn)入蛋白酶體降解,（）蛋白酶體的降解,蛋白酶體裂解蛋白成小分子多肽，釋放到胞漿。,ENDOPLASMIC RETICULUM,CYTOSOL,(二)抗原肽-MHCI 復(fù)合物的形成和轉(zhuǎn)運(yùn) 胞漿中產(chǎn)生的抗原肽與ER內(nèi)新合成的 MHC-I類分子隔離開來,（）抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體Transporters associated with antigen processing (TAP1 & 2),轉(zhuǎn)運(yùn)體能轉(zhuǎn)運(yùn)8aa，具有疏水C端的多肽片段,鈣聯(lián)蛋白 結(jié)合I類分子 的 chain，直到 2m 鏈結(jié)合為止,b2m鏈結(jié)合并穩(wěn)定MHC-I類分子,Tapasin, 鈣網(wǎng)蛋白, TAP 1 & 2 與 MHC-I類分子形成復(fù)合物,胞漿多肽片段負(fù)載到MHC-I類分子上形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),（）MHC- I類分子的成熟及負(fù)載抗原,MHC I-抗原肽復(fù)合物的命運(yùn),胞質(zhì)溶膠途徑,內(nèi)源性抗原 鏈、2m鏈合成