1、補(bǔ)體檢測和應(yīng)用。學(xué)習(xí)交換PPT，第1節(jié)總結(jié)了1。補(bǔ)體成分含量和理化性質(zhì)2。補(bǔ)體激活途徑，第2部分。補(bǔ)體總活性測定，第3節(jié)。個體補(bǔ)體成分測定1。免疫溶血方法2。免疫化學(xué)方法2。學(xué)習(xí)交換PPT，第4節(jié)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)1。測試原則2。測試方法3。方法評估。第5節(jié)補(bǔ)體受體的測定第6節(jié)補(bǔ)體測定的應(yīng)用，思考問題的總結(jié)，3。第1節(jié)總結(jié)了補(bǔ)體：具有類酶活性和耐熱性的糖蛋白與刺激抗原異物無關(guān)。在某些疾病中，正常人血清中的含量和活性相對穩(wěn)定。4.學(xué)習(xí)交流PPT，分類，1。補(bǔ)體成分的含量和理化特性，根據(jù)補(bǔ)體系統(tǒng)的生物學(xué)功能，可分為三個部分：補(bǔ)體內(nèi)在成分、補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白和補(bǔ)體受體。5。學(xué)習(xí)交換PPT和補(bǔ)充物理和化學(xué)屬性。

2、多糖蛋白由多種細(xì)胞產(chǎn)生，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和腸粘膜上皮細(xì)胞。大多數(shù)電泳遷移屬和球蛋白含量約占血清總球蛋白的10%。其中，C3含量最高、D因子含量最低的內(nèi)在組分的分子量差異較大，其中C1q最大，D因子最小。對于熱不穩(wěn)定性，它將在56C和30分鐘內(nèi)失活，其活性只能在010下維持34d。許多物理和化學(xué)因素，如輻射、機(jī)械振蕩、酒精、膽汁和一些添加劑，都會破壞補(bǔ)體。6.學(xué)會交流PPT，7。學(xué)會用傳統(tǒng)方式交流。補(bǔ)體激活方式，8。學(xué)會用PPT、9交流。學(xué)會交流PPT，比較三種路徑和直徑，10。學(xué)習(xí)交流PPT，并在第二部分確定總補(bǔ)體活性。總補(bǔ)體活性的測定方法是通過紅細(xì)胞的溶解來指示，并通過50%的溶血來判斷，

3、這被稱為CH50。補(bǔ)體激活途徑不同，不同的激活劑可以激活不同的補(bǔ)體途徑?；诮?jīng)典途徑的CP-CH50(臨床常規(guī)項(xiàng)目)尚未建立用于C3旁路檢測的AP-CH50(不包括在常規(guī)試驗(yàn)中)的MBL途徑活性的測定。11.學(xué)習(xí)和交流PPT。(CH50測定的原理。綿羊紅細(xì)胞，SRBC)及其相應(yīng)的抗體(溶血素)被用作指示劑和激活劑，可以誘導(dǎo)補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑。補(bǔ)體能溶解溶血素特異性結(jié)合的綿羊紅細(xì)胞。當(dāng)溶血素和綿羊紅細(xì)胞的濃度不變時，溶血的程度與補(bǔ)體的含量和活性有關(guān)。不同稀釋后，將待檢測的新鮮血清加入到反應(yīng)體系中以測量溶血程度。補(bǔ)體的總?cè)苎钚钥赏ㄟ^以50%溶血時的最低血清量作為判斷終點(diǎn)來測定。12.學(xué)會交換PP

4、T和溶血度與補(bǔ)體含量的關(guān)系。在適當(dāng)穩(wěn)定的反應(yīng)體系中，溶血反應(yīng)和補(bǔ)體之間的劑量依賴關(guān)系呈“S”型曲線。當(dāng)溶血輕微或接近完全溶血時，補(bǔ)體量的變化對溶血程度影響不大，但當(dāng)溶血率達(dá)到30.70%時，補(bǔ)體含量變化不大，溶血程度也變化很大。13.學(xué)會交換PPT，(CH50的測定方法，1。調(diào)節(jié)紅細(xì)胞的濃度。從綿羊頸靜脈收集綿羊紅細(xì)胞(SRBC)，用愛爾賽血液保存液制備或抗凝脫纖維的綿羊血液，4保存?zhèn)溆谩Ｊ褂们?，?zhǔn)備2%5% SRBC懸浮液。為了使紅細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化，可以吸收少量的紅細(xì)胞懸液，可以加入2030倍的稀釋液，在542nm波長下測量吸收值來調(diào)節(jié)紅細(xì)胞濃度。14，學(xué)會交換PPT，2。溶血素滴定，溶血素可

5、以通過用SRBC免疫兔子獲得。一般來說，在純化試驗(yàn)前不需要加熱5630分鐘或603分鐘來滅活補(bǔ)體溶血素。有商業(yè)銷售，我們自己制備的溶血素可以根據(jù)標(biāo)示的效價進(jìn)行稀釋。需要滴定來確定濃度溶血素的效價是穩(wěn)定的，通常在使用3個月后重新滴定。15.學(xué)會交換PPT。3.稀釋緩沖液4。50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管： 0.5毫升2% SRBC 2.0毫升右旋糖酐(100%溶血)2.0毫升1.8%氯化鈉0.5毫升2%SRBC(50%溶血)5。50%溶血計(jì)算總補(bǔ)體值CH50(U/ml)=1/血清劑量學(xué)習(xí)和交換PPT，(3)方法評價和臨床意義，該方法簡單快速，但靈敏度低，補(bǔ)體活性與反應(yīng)體積成反比，總補(bǔ)體活性的參考范圍為50，1

6、00 u/ml，這也與反應(yīng)中使用的緩沖液、SRBC數(shù)和反應(yīng)溫度有關(guān)。CH50的增加可見于急性炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等。CH50的降低見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、急性腎小球腎炎等。17.學(xué)習(xí)交換PPT，在第三節(jié)中確定單個補(bǔ)體成分。常用作單一補(bǔ)體成分的檢測指標(biāo)：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制劑等。方法：免疫溶血法(檢測單補(bǔ)體成分活性，補(bǔ)體缺乏血清(R試劑)；免疫化學(xué)法(檢測單補(bǔ)體成分含量，銀抗體反應(yīng))；自動免疫散射比濁法，18。學(xué)習(xí)交換PPT，1。免疫溶血法(Definition :)是根據(jù)補(bǔ)體參與抗體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解的級聯(lián)效應(yīng)特征而建立的單補(bǔ)體成分檢測方法。指示系

7、統(tǒng)：使用SRBC-抗-SRBC作為激活劑，指示系統(tǒng)參考系統(tǒng)：使用人工設(shè)計(jì)的缺乏某些補(bǔ)體成分的血清作為參考。如果發(fā)生溶血，則表明待檢測的標(biāo)本含有參考血清中缺乏的補(bǔ)體成分。溶血的程度與補(bǔ)體成分的量成正比，終點(diǎn)仍然是50溶血。19.學(xué)會更換PPT，并將血清稱為“R(清除)”試劑，意思是清除一些補(bǔ)體成分。血清免疫溶血法可篩選出人C2缺乏癥、豚鼠C4缺乏癥、小鼠C5缺乏癥和兔C6缺乏癥，常用于檢測補(bǔ)體成分如C2、C3、C4、C5和C6。其中，對C3和C4成分的檢測更為常見。20.學(xué)會交換PPT。2.免疫化學(xué)。免疫化學(xué)分類。1.單向免疫擴(kuò)散。2.火箭免疫電泳。3.透射比濁法。4.散射比濁法。前兩種方法手工

8、操作繁瑣，耗時，影響因素多，結(jié)果重復(fù)性差。后兩種方法已趨于被淘汰：通過儀器自動確定C3、C4、B因子和其他單個補(bǔ)體成分；21.學(xué)習(xí)交換比濁法，根據(jù)補(bǔ)體的抗原性和與相應(yīng)抗體反應(yīng)的前帶現(xiàn)象，建立定量檢測補(bǔ)體單一組分的方法。濁度法是不夠的。為了確保主動免疫比濁法反映被測補(bǔ)體成分的絕對量，可以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的過程管理和質(zhì)量控制。22.學(xué)會交換PPT。第四部分是補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)以免疫溶血為指標(biāo)系統(tǒng)，檢測另一反應(yīng)系統(tǒng)中的抗原或抗體。23，學(xué)習(xí)交流PPT，1。實(shí)驗(yàn)原理、作用原理：利用補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用測定各種物理狀態(tài)下的抗原-抗體，五個組分，三個系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)：已知的待測抗原(或抗體)和抗體(或

9、抗原),補(bǔ)體系統(tǒng)指示系統(tǒng)：SRBC和相應(yīng)的溶血素。在實(shí)驗(yàn)中，它們經(jīng)常被預(yù)先組合成致敏的綿羊紅細(xì)胞。，24，學(xué)會交流PPT，反應(yīng)分為兩步：第一步：與補(bǔ)體反應(yīng)，第二步：指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體的反應(yīng)(競爭補(bǔ)體原理)，并且溶血對于補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是陽性的，而溶血對于試驗(yàn)是陰性的，25，學(xué)會交流PPT，(1)試劑制備，和(2)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)方法。1.測試中使用的抗原或抗體：的純度和特異性越高，抗原與抗體的比例就越合適。確定抗原或抗體的相應(yīng)使用單位，并使用方形矩陣或棋盤方法滴定抗原和抗體。26.學(xué)會交換PPT。當(dāng)血清樣品出現(xiàn)抗補(bǔ)體現(xiàn)象時，可進(jìn)行以下處理：加熱滅活，增加12.20，冷凍解凍，離心沉淀，用3毫升/升鹽

10、酸處理，加入少量補(bǔ)體，然后滅活，用白粘土處理，通入CO2，用小鼠肝粉處理，用含10個新鮮蛋清的生理鹽水稀釋血清，3。從待測標(biāo)本中采集血液，及時分離血清用于檢測或儲存?zhèn)溆?。測試前，血清56應(yīng)加熱30分鐘(或603分鐘)以滅活補(bǔ)體。27、學(xué)會交流PPT、(2)正式試驗(yàn)、分類：小量法、微量法，在少量常用的實(shí)驗(yàn)過程中：稀釋并處理標(biāo)本和已知抗原或抗體， 用不同含量的補(bǔ)液溫度和指示劑體系共同孵育的結(jié)果分別判斷：對照管：陰性對照管：溶血陽性對照管：非溶血抗體或抗原對照管：完全溶血血清對照管：完全溶血綿羊紅細(xì)胞對照管3360無自發(fā)溶血，28，學(xué)會交換PPT，補(bǔ)體對照管：陽性血清：陰性溶血：注意溶血：如果上述2

11、個單位：被完全溶解，1個單位：被完全溶解或略呈紅色的血細(xì)胞0.5個單位：沒有溶血，29個單位學(xué)會交換PPT，3個單位方法評價，優(yōu)良點(diǎn)靈敏度高，測得的抗體水平可達(dá)0.05克/毫升，交叉反應(yīng)的概率小，且可檢測的抗原或抗體范圍廣。不需要特殊設(shè)備，結(jié)果易于觀察，測試條件要求不高，影響因素多。各種制劑需要繁瑣的稀釋和滴定?，F(xiàn)代自動化抗原抗體檢測方法不斷涌現(xiàn)，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)逐漸被拋棄。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)作為一種經(jīng)典的免疫方法類型，其設(shè)計(jì)和原理對新免疫方法的建立仍有啟發(fā)和指導(dǎo)作用。30.學(xué)會交換PPT。第五節(jié)補(bǔ)體受體的測定，補(bǔ)體受體：它存在于多種細(xì)胞中，清除免疫復(fù)合物，凈化體內(nèi)環(huán)境，檢測補(bǔ)體受體，有助于判斷機(jī)體的抗

12、感染能力和計(jì)數(shù)相應(yīng)的細(xì)胞數(shù)量。31.目前，已知的補(bǔ)體受體可分為以下五類：cr1(cd35)cr2(cd21)Cr3(cd11b/cd18)cr4(gp 150/95，CD11c/18) C3aR/C5aR，32，學(xué)習(xí)與交流的PPT，補(bǔ)體受體的特性，33，學(xué)習(xí)與交流的PPT，補(bǔ)體測定在第6節(jié)中的應(yīng)用，補(bǔ)體相關(guān)試驗(yàn)：診斷梅毒螺旋體感染的華氏反應(yīng)(消除)；人類白細(xì)胞抗原分型的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性試驗(yàn)；抗原抗體檢測的脂質(zhì)體免疫分析法；免疫粘附血凝試驗(yàn)中抗體形成細(xì)胞定量檢測的溶血空白點(diǎn)技術(shù)：免疫復(fù)合物測定的膠結(jié)試驗(yàn)和C1q結(jié)合試驗(yàn)；34.學(xué)會交換PPT。試驗(yàn)AP-CH50和AP-H50試驗(yàn)：反映總補(bǔ)體活性

13、溶血試驗(yàn)免疫熒光技術(shù)，檢測補(bǔ)體單組分及其裂解產(chǎn)物(C1q、C3SP、C3、C4、B因子等)。)和補(bǔ)體受體，35，學(xué)習(xí)交流PPT，(圖)血管神經(jīng)性水腫，與補(bǔ)體含量和活性有關(guān)的疾病，1免疫相關(guān)疾病在超敏反應(yīng)(型超敏反應(yīng))期間，產(chǎn)生過敏毒素如C3a和C5a。2 .與補(bǔ)體相關(guān)的遺傳性疾病：由C2和C3缺陷引起的嚴(yán)重感染；系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者細(xì)胞表面CR1缺損和C1C清除障礙中涉及因子和因子H缺乏的腎小球腎炎，伴有與C1抑制因子缺損相關(guān)的遺傳性血管神經(jīng)性水腫；DAF缺乏引起的陣發(fā)性血紅蛋白尿癥；由C1q缺陷引起的嚴(yán)重頑固性皮膚損傷，以及由C1q、C1r、C4和C2缺陷引起的免疫復(fù)合物血管炎(包括腎炎)。血

14、管神經(jīng)性水腫，36歲，學(xué)習(xí)交流PPT，3種補(bǔ)體含量顯著降低的疾病：消耗增加：補(bǔ)體激活增加和由免疫復(fù)合物形成引起的消耗，如SLE，補(bǔ)體大量損失：主要見于大面積燒傷、失血和腎病患者，以及補(bǔ)體合成不足：常見于肝病或營養(yǎng)不良患者。4.高補(bǔ)體：在感染和某些惡性腫瘤患者恢復(fù)期偶爾出現(xiàn)，正常妊娠期間也可觀察到補(bǔ)體值的增加。37，學(xué)會交流PPT，1。眾所周知，激活補(bǔ)體有三種方法。這三種方式有什么不同？2.補(bǔ)體在抗感染免疫中的作用是什么？3.補(bǔ)語有30多個成分，它們有不同的功能，但又是相互聯(lián)系的。在互補(bǔ)的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中，哪些組件起著關(guān)鍵作用？4.補(bǔ)體在免疫系統(tǒng)中的主要作用是什么？5.用補(bǔ)體檢測抗原和抗體有多少種方法？有什么你認(rèn)為可以成立但還沒有人提到的嗎？思考問題，38，學(xué)習(xí)交流，6。補(bǔ)體在參與人類疾病的病理損害中起什么作用？7.在什么情況下身體的免疫損傷或炎癥經(jīng)常發(fā)生？傷害的機(jī)制是什么？8.嘗試比較各種補(bǔ)體檢測方法的優(yōu)缺點(diǎn)以及如何選擇臨床應(yīng)用。9.補(bǔ)體缺乏的主要臨床特征是什么？10.補(bǔ)體的主要物理和化學(xué)特征是什么？39、學(xué)會溝通PPT，總結(jié)一下，補(bǔ)體是參與先天免疫的一種重要的可溶性球蛋白分子，它有助于產(chǎn)生特異性抗體后發(fā)揮作用，從而能有效地清