1、專題3，5，植物組織培養(yǎng)技術，DNA和蛋白質(zhì)技術，1，植物組織培養(yǎng)技術1。菊花的組織培養(yǎng)，多功能性，(1)理論基礎：植物細胞的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)基本過程，外植體、愈傷組織、芽根移植，(3)實驗程序，接種、移植，MS培養(yǎng)基外植體消毒準備_ _ _ _ _ _ _ _ _栽培，(3)(，)，2，DNA和蛋白質(zhì)技術1。DNA的粗提取和鑒定，(1)實驗原理，其他0.14 mol/L，不，藍色，1)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度2)在DNA_醇溶液中的溶解。3)DNA和二苯胺在沸水浴中_ _ _ _ _ _ _ _。雜質(zhì)，(2)實驗階段：選擇，雞血細胞液體粉碎細胞制備

2、，含DNA的濾液去除濾液中_ _DNA析出和鑒定。2 .血紅蛋白提取和分離，相對分子量， (1)結(jié)色譜法：也稱為分配色譜法，相對分子質(zhì)量小的是移動速度慢，而相對分子質(zhì)量大的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (3)傳記電泳：_ _ _ _ _ _ _ _，凝膠內(nèi)，酸和堿，基本不變電場，大小，(4)實驗操作1)樣品處理及粗紅細胞的清潔血紅蛋白釋放分離血紅蛋白溶液透析，2)凝膠頻譜柱操作，凝膠頻譜柱充電，凝膠頻譜多酶鏈反應擴增DNA片段，(1)PCR原理，DNA模板，4茄子脫氧核苷酸，在特定緩沖溶液中_ _

3、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _、耐熱DNA聚合酶、體外、復性、PCR擴增包括變性、復性(退火)和擴張三個茄子鏈接。牙齒三個階段的溫度為(，)、A、A95、55、72 C55和95。在Taq酶的最佳溫度(72)下，引物3段作為合成的起點，以單個核苷酸原料沿模板向53方向延伸，合成DNA新鏈。試驗點，植物組織培養(yǎng)，1 .影響植物組織培養(yǎng)的因素(1)內(nèi)部因素：材料選擇。(2)外部因素：營養(yǎng)成分的類型和比例；植物激素使用情況和使用順序；PH、溫度、照明等。2 .成功的關鍵，(1)用于植物組織培養(yǎng)的植物材料體積小，抵抗力

4、差，例，培養(yǎng)條件要求高。(2)培養(yǎng)物被微生物污染，實驗可能失敗。原因是微生物增殖快，生長快，養(yǎng)分消耗大，產(chǎn)生代謝廢物有毒培養(yǎng)物。(3)無菌技術主要包括操作空間、實驗工具、實驗材料、操作員消毒或滅菌。3 .在組織培養(yǎng)過程中，植物激素重要作用(1)使用順序不同，結(jié)果不同，(2)使用率不同(生長素多于細胞分裂元素)，結(jié)果也不同。有利于根的分化，抑制芽的形成。低：有利于芽分化，抑制根的形成。溫和：促進愈傷組織的形成。4 .實驗工作中需要注意的幾個茄子問題，(1)材料的選擇：在菊花的組織培養(yǎng)實驗中，應選擇未開花植物莖上部新萌發(fā)的側(cè)枝。在月季花花藥的培養(yǎng)實驗中，花粉發(fā)育過程中，應選擇和培養(yǎng)單核馬齒莧花粉。

5、，(2)外植體消毒：使用的消毒劑是體積分數(shù)為70%的酒精和質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液，使用的清洗液是無菌水。(3)培養(yǎng)過程：初期菊花的組織培養(yǎng)需要光，月季花、培養(yǎng)不需要光，后期需要光。單倍體育種和花藥組織培養(yǎng)的差異，花藥組織培養(yǎng)形成高度不育的單倍體植株。單倍體育種應組織花藥培養(yǎng)的單倍體植物誘導成染色體數(shù)目正常的純合植物，使其具有正常的繁殖能力，然后選擇具有優(yōu)良特性的個體。前1植物微繁殖技術是植物組織培養(yǎng)的范疇。請回答以下問題：(1)牙齒技術是品種_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _的，(3)在微繁殖過程中

6、單獨使用適合濃度的生長素，需要抑制試管苗_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _32(4)在不同濃度的蔗糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)一株植物的試管苗一段時間后，一株新鮮重量和光合作用強度的變化如下。圖分析表明，隨著培養(yǎng)基蔗糖濃度的增加，光合作用強度的變化趨勢為_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，(5)根據(jù)上圖，在誘導試管苗根的過程中，要提高光合作用能力，請培養(yǎng)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(填充“減少”或“增加”)，問題解決思維植物組織培養(yǎng)技術是利用植物細胞全能的

7、原理進行的，是植物細胞工程的基礎。操作過程中要注意無菌操作，避免雜菌污染。因為培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基營養(yǎng)素很豐富。適合濃度的生長所能誘導試管苗的根，促進愈傷組織芽的形成，必須與細胞分裂元素成正比。要促進愈傷組織的產(chǎn)生和生長，必須使用2，4D。試驗點對應練習1將沒有根的非洲菊花幼苗轉(zhuǎn)移到?jīng)]有植物激素的培養(yǎng)基上。在適當?shù)臏囟群驼彰鞯葪l件下，培養(yǎng)一段時間后應該出現(xiàn)的現(xiàn)象是(，)，B，分析。培養(yǎng)基中沒有激素，但幼苗葉片本身可以制造生長素，促進根系。細胞分裂元素的生成部位在根端，因此細胞分裂素不能生產(chǎn)，所以植物在一定時間后可以在沒有芽的情況下生長少量的根。大衛(wèi)亞設，“美國電視劇”，“身體”，“試驗點”，

8、“DNA的粗糙提取和感情”，1。實驗原理(1)DNA在濃度不同的NaCl溶液中的溶解度不同，變化曲線如下圖所示。(2)DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的其他物質(zhì)可以溶于酒精溶液，提取雜質(zhì)較少的DNA。(。(3)DNA二苯胺，藍色(用于DNA識別)。2 .實驗過程，速記表，3。實驗關鍵，(1)不能采訪哺乳動物的血細胞(成熟紅細胞不細，細胞核)。(2)獲得DNA時，要在雞血細胞液體中加入足夠的蒸餾水，使細胞膜和核膜破裂，釋放核物質(zhì)。(3)實驗中攪拌6次，除了最后一次攪拌外，前5次攪拌都要朝一個方向。而且，在溶解DNA，DNA提取和提取DNA的過程中，每個步驟都要輕輕攪拌，玻璃棒不要直接插入燒杯底部，

9、防止DNA分子斷裂。威廉莎士比亞，DNA，DNA，DNA，DNA，DNA)，(4)添加兩次蒸餾水，第一次添加蒸餾水，是為了破裂血細胞吸收膨脹(注：植物，細胞用洗滌劑溶解細胞膜)。第二蒸餾水析出DNA以稀釋NaCl溶液。(5)3濃度的NaCl溶液，2 mol/L NaCl溶液分離DNA和蛋白質(zhì)以溶解DNA。一種是0.14 mol/L NaCl溶液?？梢晕龀鯠NA。0.015 mol/L NaCl溶液是為了溶解DNA。(6)DNA容易吸附在玻璃容器上，因此最好在實驗中使用塑料烘烤，杯子，試管，容器來減少DNA損失。4 .除濾液中雜質(zhì)的其他方案；(1)方案1:用蓮肉粉(蛋白酶)水解蛋白質(zhì)，但對DNA

10、沒有影響。(2)情景2: 60加熱到75，大部分蛋白質(zhì)無法忍受，60 75的高溫和變性，DNA無法變性。前2以下的DNA粗提取和感情表達是正確的。(，)，在析出A. DNA時，要慢慢添加蒸餾水。析出粘稠物質(zhì)時不再加水。在探索洗滌劑對植物細胞DNA提取的影響的實驗中，參數(shù)在洗滌劑和鹽c .提取的DNA溶解后添加二苯胺試劑，可以染成藍色D。將含有DNA的過濾器放入60 75的恒溫水浴中，保持溫度，過濾后去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)，在DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中解除最低溶解，用蒸餾水稀釋，直到DNA析出量不再增加，在探索洗滌劑對植物細胞DNA提取的影響的實驗中，參數(shù)是洗滌劑。提取的DNA溶解后，

11、添加二苯胺試劑(DNA)后，應進行加熱和分離對照組。答案D，試驗點對應練習2在DNA組提取過程中，兩次在燒杯中添加蒸餾水，分別(，)，B，A稀釋血液，沖洗樣品B以形成血細胞破裂，降低NaCl濃度，DNA析出C引起血細胞破裂，增加DNA溶解量D引起血細胞破裂，減少雜質(zhì)二是降低NaCl濃度，釋放DNA。試驗點，蛋白質(zhì)提取和分離(以血紅蛋白提取和分離為例)，1。樣品處理(1)紅細胞的洗滌(2)釋放血紅蛋白：由于蒸餾水和甲苯(細胞膜溶解)的作用，紅細胞破裂，血紅蛋白釋放。2.粗分離(1)血紅蛋白溶液分離：希望混合好的混合溶液后，用濾紙過濾試管中的液體去除脂溶性沉淀層，在分液漏斗中暫時停止，分離下層紅色

12、透明液體。(2)透析：將1毫升的血紅蛋白溶液放入投藥袋，將透析信封放入300毫升，物質(zhì)濃度為20毫升/L的磷酸緩沖液，透析12 h，從樣品中去除分子量小雜質(zhì)。3 .精制：血紅蛋白精制可用凝膠色譜柱純化。凝膠，頻譜分離蛋白的原理如下表：4。純度鑒定：最常用的是SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(可以測量蛋白質(zhì)的相對分子量)。DNA與血紅蛋白提取及分離過程比較，前3 (2011年南京市相同)下，對DNA和血紅蛋白、提取及分離實驗的敘述中錯誤的是(，)。a可以用蒸餾水膨脹細胞的方法從豬紅細胞中提取DNA和蛋白質(zhì)B，用濃度不同的NaCl溶液反復溶解和析出DNA的雜質(zhì)C透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是，不能利用蛋白質(zhì)通過

13、半透膜特性D進一步分離和純化血紅蛋白明膠色譜法、離心法、電泳法等。問題解決事故豬紅細胞沒有核，只能用于蛋白質(zhì)提取和分離實驗。DNA在濃度不同的NaCl溶液中溶解不同，低濃度和高濃度都可以溶解DNA，但在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，可以沉淀DNA以去除雜質(zhì)。用透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，不能通過半透膜從樣品中去除分子量小雜質(zhì)。，答a，試驗點對應練習3在整個血紅蛋白提取過程中，持續(xù)用磷酸緩沖液處理的目的是(，)，d，a .血紅蛋白O2抗氧化b .血紅蛋白堿性物質(zhì)需要酸和c .磷酸緩沖液。加速血紅蛋白提取過程，使d .血紅蛋白在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，試驗點，PCR反應

14、的過程和結(jié)果，1過程(1)變性：溫度上升到90以上，雙鏈DNA就會解到單鏈。(2)復性：當系統(tǒng)溫度下降到約50時，兩個引物都通過堿基互補配對與兩個單鏈DNA結(jié)合。(3)延長：系統(tǒng)溫度上升到約72，溶液中4茄子脫酸核苷酸(A，T，G，C)在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補配對原則合成新的DNA鏈。2 .結(jié)果，(1)PCR通常經(jīng)歷30多次循環(huán)。每個循環(huán)包括變性、復性、擴張。(2)兩個引物之間固定長度的DNA序列呈指數(shù)增長。3 .細胞內(nèi)DNA復制和PCR技術的比較，前4 (2011年模擬)聚合酶鏈反應(PCR)是體外快速擴增DNA片段的技術。PCR過程通常要經(jīng)歷30多次循環(huán)，例如模板DNA變性、解

15、離折疊(組合引物和DNA模型鏈)引物鏈擴展(形成新的脫氧核苷酸鏈)。在以下PCR過渡的敘述中，不準確的是(，)，在A變性過程中，DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵破壞，還利用降解酶在B復性過程中引物和DNA模型鏈的結(jié)合，根據(jù)堿基互補配對原則，在C擴張過程中與DNA聚合酶，ATP，4茄子核糖核苷酸DPCR牙齒細胞內(nèi)DNA克隆進行比較。所需酶的最佳溫度比較高，問題解決思維變性的目的是破壞DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵，讓DNA解開鏈，體內(nèi)可以通過海選酶的作用進行，體外則是高溫。引物是脫氧核苷酸的一小塊，報復時可以與DNA模型鏈結(jié)合。延長過程需要DNA聚合酶，ATP，4茄子脫氧核糖核苷酸。PCR是體外DNA復制，需要高溫才能釋放DNA