1、安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià),第一節(jié) 概述,一、基本概念,安全 指一種化學(xué)物在規(guī)定的使用方式和用量條件下，對(duì)人畜不產(chǎn)生任何損害，即不引起急性、慢性中毒，也不至于對(duì)接觸者及后代產(chǎn)生潛在的危害。,安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià),安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià) (toxicological safety evaluation) 指對(duì)人畜所使用化學(xué)物質(zhì)的安全性作出評(píng)價(jià)的研究過(guò)程。 即通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人畜的觀察，闡明某種物質(zhì)的毒性及其潛在的危害，對(duì)該物質(zhì)能否投入市場(chǎng)作出取舍的決定，或提出人畜安全的接觸條件。,二、毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)程序的內(nèi)容,試驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作,文獻(xiàn)調(diào)研 了解受試物的基本資料 產(chǎn)品概述 化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、定量分析方法、成分和雜質(zhì)

2、、原料和中間體 使用情況 劑量、途徑、效益、健康影響 受試樣品 選用人畜實(shí)際接觸和應(yīng)用的固定產(chǎn)品，不用純品，以反映實(shí)際接觸的情況 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 多用大鼠,安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序的階段劃分,第一階段 急性毒性試驗(yàn) 第二階段 蓄積毒性和致突變?cè)囼?yàn) 第三階段 亞慢性毒性試驗(yàn)和代謝試驗(yàn) 第四階段 慢性毒性和致癌試驗(yàn),毒性分類,一般毒性/基礎(chǔ)毒性: 急性毒性（1次或1天之內(nèi)） 蓄積毒性 亞急性（2周-1個(gè)月）、亞慢性（10%動(dòng)物壽命）和慢性毒性（長(zhǎng)期） 特殊毒性: 遺傳毒性/致突變毒性(基因突變、染色體畸變、染色體分離異常) 生殖發(fā)育毒性/致畸毒性 致癌毒性 免疫毒性 神經(jīng)毒性 神經(jīng)行為毒性 致敏毒性,三、安

3、全性評(píng)價(jià)中應(yīng)注意的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)性 試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化 良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP) 標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP) 熟悉毒理學(xué)試驗(yàn)方法的特點(diǎn) 評(píng)價(jià)結(jié)論的高度綜合性,毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù) 社會(huì)效益 經(jīng)濟(jì)效益 對(duì)環(huán)境質(zhì)量和自然資源的影響,第二節(jié) 化學(xué)物安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序,一、食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序,第一階段 急性毒性試驗(yàn),目的 了解受試物毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官 為選擇進(jìn)一步毒性試驗(yàn)的劑量和毒性判定指標(biāo)提供依據(jù),測(cè)定經(jīng)口LD50 7 d 喂養(yǎng)試驗(yàn) 動(dòng)物皮膚、粘膜試驗(yàn) 吸入、刺激閾濃度試驗(yàn) 聯(lián)合急性毒性試驗(yàn),試驗(yàn)項(xiàng)目,如劑量達(dá)每千克體重10 g 仍不引起動(dòng)物死亡，則不必繼續(xù)測(cè)定 以LD50或7 d 喂養(yǎng)

4、試驗(yàn)的最小有作用劑量（MEL）與人的可能攝入量比較： 10倍 應(yīng)放棄，不允許用于食品 10倍 進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗(yàn) 10倍左右 應(yīng)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，或用另一方法驗(yàn)證,結(jié)果判定,第二階段 蓄積毒性和致突變?cè)囼?yàn),蓄積毒性試驗(yàn),目的 了解受試化學(xué)物是否具有蓄積毒性 項(xiàng)目 蓄積系數(shù)法 20 d 試驗(yàn)法 凡急性毒性實(shí)驗(yàn)LD50每千克體重10 g 的，可不進(jìn)行蓄積毒性試驗(yàn) 結(jié)果判定 k3 強(qiáng)蓄積 k3 弱蓄積 1/20 LD50有死亡，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系為強(qiáng)蓄積，放棄 1/20 LD50無(wú)死亡為弱蓄積,目的 對(duì)受試物的遺傳毒性和是否具有潛在的致癌性進(jìn)行篩選 項(xiàng)目 細(xì)菌誘變?cè)囼?yàn) Ames試驗(yàn)為首選，其它有枯草

5、桿菌試驗(yàn)、大腸桿菌試驗(yàn) 小鼠骨髓微核試驗(yàn)或骨髓細(xì)胞染色體畸變分析 顯性致死試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)和睪丸生殖細(xì)胞染色體畸變分析任選一項(xiàng),致突變?cè)囼?yàn),DNA修復(fù)合成試驗(yàn) 果蠅伴性隱性致死試驗(yàn) 體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 小鼠淋巴瘤試驗(yàn) 程序外DNA合成試驗(yàn),備選遺傳毒性試驗(yàn),3項(xiàng)為陽(yáng)性 無(wú)論蓄積毒性如何，表示可能致癌性 一般應(yīng)放棄 2項(xiàng)為陽(yáng)性 強(qiáng)蓄積性 應(yīng)放棄 弱蓄積性 專家評(píng)議，權(quán)衡利弊,結(jié)果判定,1項(xiàng)為陽(yáng)性 選擇2項(xiàng)備選致突變?cè)囼?yàn) 2項(xiàng)為陽(yáng)性 無(wú)論蓄積性如何 應(yīng)放棄 1項(xiàng)為陽(yáng)性 強(qiáng)蓄積性 應(yīng)放棄 弱蓄積性 進(jìn)入第三階段 3項(xiàng)均為陰性 無(wú)論蓄積性如何進(jìn)入第三階段,短期喂養(yǎng)試驗(yàn)（30d喂養(yǎng)試驗(yàn)）,目的 進(jìn)一

6、步了解毒性作用 初步估計(jì)無(wú)作用劑量(NOEL) 結(jié)果判定 未發(fā)現(xiàn)明顯毒性作用，綜合其他試驗(yàn)作 出初步評(píng)價(jià) 有明顯毒性作用，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系， 應(yīng)作進(jìn)一步的毒性試驗(yàn),第三階段 亞慢性毒性試驗(yàn)和代謝試驗(yàn),目的 觀察較長(zhǎng)時(shí)間以不同劑量水平喂養(yǎng)后的毒性作用性質(zhì)和靶器官 初步確定無(wú)作用劑量(NOEL) 了解受試物對(duì)動(dòng)物繁殖及對(duì)子代的致畸作用 為慢性毒性和致癌試驗(yàn)的劑量選擇提供依據(jù) 為評(píng)價(jià)受試物能否用于食品提供依據(jù),亞慢性毒性試驗(yàn)項(xiàng)目 90 d 亞慢性毒性試驗(yàn) 喂養(yǎng)致畸試驗(yàn) 同批動(dòng)物 喂養(yǎng)繁殖試驗(yàn) 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 代謝試驗(yàn)（毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)）,結(jié)果判定 以上述試驗(yàn)中任何一項(xiàng)最敏感指標(biāo)的NOEL與為人的可能攝

7、入量比較： NOEL100倍 表示毒性較強(qiáng) 應(yīng)放棄 100倍 NOEL 300倍 進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn) NOEL300倍 進(jìn)行安全性評(píng)價(jià),傳統(tǒng)致畸試驗(yàn),目的 了解受試物對(duì)胎仔是否具有致畸作用 結(jié)果判定 根據(jù)最敏感指標(biāo)的NOEL評(píng)價(jià),代謝試驗(yàn),目的 了解受試物在體內(nèi)的吸收、分布和排泄的速度及蓄積性 了解有無(wú)毒性代謝產(chǎn)物形成 尋找可能的靶器官 為選擇慢性毒性試驗(yàn)的動(dòng)物種系提供依據(jù),第四階段 慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn),目的 了解長(zhǎng)期接觸受試物后的毒性作用性質(zhì)、靶器官和中毒機(jī)制，尤其是進(jìn)行性或不可逆的毒性作用。 了解是否有致癌作用。 確定最大無(wú)作用劑量，為制定每日容許攝入量(ADI: Acceptable

8、Daily Intake), 最終評(píng)價(jià)受試物能否用于食品提供依據(jù)。,實(shí)際工作中，將兩年慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)結(jié)合在一個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)中進(jìn)行 用兩種性別的大鼠和小鼠,根據(jù)慢性毒性試驗(yàn)的NOEL與人的可能攝入量比較是： NOEL50倍 毒性較強(qiáng) 應(yīng)放棄 50倍 NOEL 100倍 專家評(píng)儀 NOEL100倍 考慮允許用于食品，制定ADI 任何一個(gè)劑量有致癌作用，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，由專家共同評(píng)議。,結(jié)果判定,二、獸藥安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序,新獸藥一般毒性試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范,急性毒性試驗(yàn),經(jīng)口或注射給藥的急性毒性試驗(yàn) 結(jié)果評(píng)定 以大鼠一次經(jīng)口LD50 (mg/kg)為標(biāo)準(zhǔn)： LD50 1 極毒 150 劇毒 50

9、500 中等毒 505000 低毒 5000 實(shí)際無(wú)毒,結(jié)果評(píng)定 以兔涂皮LD50 (mg/kg)為標(biāo)準(zhǔn)： LD50 5 極毒 544 劇毒 44350 中等毒 3502180 低毒 2180 實(shí)際無(wú)毒,經(jīng)皮給藥的急性毒性試驗(yàn),亞慢性毒性試驗(yàn),動(dòng)物 大鼠（100200g）或小鼠（1520g) 試驗(yàn)周期 根據(jù)臨床或生產(chǎn)實(shí)際用藥時(shí)間確定 用藥時(shí)間（d） 試驗(yàn)周期（d） 13 14 14 28 30 90 30 180,數(shù)據(jù)匯總成表，用方差分析或X2統(tǒng)計(jì)處理， P0.05并具有劑量-反應(yīng)關(guān)系，毒性較強(qiáng) 病理變化攝成照片，與對(duì)照組比較 根據(jù)中毒癥狀及停藥后組織和功能損害的發(fā)展及恢復(fù)情況，寫(xiě)出評(píng)價(jià)報(bào)告,

10、結(jié)果處理,新獸藥特殊毒性試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范,Ames試驗(yàn) 必做 體外 哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞（CHO、CHL) 致突變 染色體畸變?cè)囼?yàn) 選做 特 微核試驗(yàn) 必做 殊 體內(nèi) 精子畸形試驗(yàn) 任選 毒 小鼠睪丸精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 一項(xiàng) 性 顯性致死試驗(yàn) 上2項(xiàng)陽(yáng)性時(shí)必做 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 一般獸藥必做 致畸 喂養(yǎng)繁殖試驗(yàn) 飼料藥物添加劑 喂養(yǎng)致畸試驗(yàn) 必須增做,我國(guó)代表性的安全性評(píng)價(jià)程序,食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序 農(nóng)藥毒性試驗(yàn)方法暫行規(guī)定 化妝品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法 中華人民共和國(guó)藥品管理法 化學(xué)危險(xiǎn)品安全管理?xiàng)l例,安全性毒性學(xué)評(píng)價(jià)原則,我國(guó)創(chuàng)新的物質(zhì) 14階段試驗(yàn) 已知物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)基本相同的衍生物或類似物，根據(jù)13階段結(jié)果判斷是否進(jìn)行第4階段試驗(yàn) 已知化學(xué)物質(zhì)，WHO已公布ADI，且產(chǎn)品質(zhì)量規(guī)格與國(guó)外產(chǎn)品一致，先進(jìn)行12階段試驗(yàn)，結(jié)果與國(guó)外一致，不作進(jìn)一步試驗(yàn)；結(jié)果不一致，則進(jìn)行第3階段試驗(yàn),安全性評(píng)價(jià)中應(yīng)注意的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)性 試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化 良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP) 標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP) 熟悉毒理學(xué)試驗(yàn)方法的特點(diǎn) 評(píng)價(jià)結(jié)論的高度綜合性,本章