1、臨床真菌學檢驗基本技術,河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚科,郭兵申,郭兵申,1,臨床真菌基礎總論,一、真菌的基本介紹 二、真菌分類及存在形式 三、真菌的一般檢查 一般鏡檢 常規(guī)染色 培養(yǎng)及鑒定方式 四、真菌的致病性 五、真菌的防治原則,2,真菌(fungus)屬真核細胞型微生物，有真正的核，單細胞或多細胞異養(yǎng)微生物，不含葉綠素，大都能形成硬的多糖細胞壁，細胞壁結構較細菌簡單，細胞壁含幾丁質和纖維素 。 估計有100-150萬種，分布廣泛，從30000米高空地表海洋都有真菌的生長。 大多數真菌對人類是有益的，只有少數對人類有害。,一、真菌的基本介紹,3,二、真菌分類及存在形式,A、真菌分類從米奇里（P.

2、A.Micheli，1729）開始，至今已有近280年的歷史，這期間經過世界上無數真菌科學工作者的努力，使真菌分類的工作有了極大地發(fā)展。 B、但是由于真菌分類存在著無數困難，現有的真菌分類系統(tǒng)還有待進一步發(fā)展與完善（尚未有一個大家供認的系統(tǒng)）。,（1）、真菌的分類,4,5,與醫(yī)學有關的真菌有四個亞門 接合亞門：毛霉、根霉等 子囊霉亞門：酵母菌屬、小孢子霉屬等 擔子霉亞門：新生隱球菌、靈芝、食用菌等 半知霉亞門：假絲酵母菌屬、球孢子菌屬等 最新的真菌分類 接合菌門 子囊菌門 擔子菌門 壺菌門,6,根據菌落形態(tài)分類： 酵母菌 酵母樣菌 霉菌 雙相真菌,7,二、真菌分類及存在形式,（2）、真菌的存在

3、形式,菌絲和孢子,A、真菌的菌絲先端為生長點，通過頂端延長而生長。菌絲生長生出分枝，使其與營養(yǎng)基質接觸面積增大，提高吸收力。菌絲內原生質從衰老部分流向幼嫩部分，使菌絲不斷伸長，這就是生長。 B、在一定條件下由生長轉入發(fā)育階段即產生繁殖體，生長與發(fā)育受環(huán)境控制，多數真菌在貧養(yǎng)和低溫條件下轉入有性階段，少數菌在高溫下轉入有性階段。還有些真菌在其不同的發(fā)育階段，必須在不同的寄主植物上渡過，即轉主寄主（現象）。 C、只要是專門生殖的細胞，正常情況下不需要兩兩結合就可以單個細胞發(fā)育成一個個體，這就是孢子。,8,菌絲的形態(tài)：,螺旋狀、球拍狀、結節(jié)狀、鹿角狀、梳狀等，菌絲形態(tài)有助于鑒別真菌。,孢子的形態(tài)：,

4、有性孢子：同一個菌體或不同菌體上兩個細胞融合成經減數分裂形成。 無性孢子：細胞分化或出芽形成。形態(tài)有分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。,9,菌絲和孢子,10,11,A、氫氧化鉀法,將標本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮載液，蓋上蓋玻片放置510分鐘后或直接在火焰上快速通過23次微加熱，輕壓蓋玻片驅逐氣泡并將標本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)特征、大小和排列等。對于角質標本，必要時可在10%KOH溶液中，加入終濃度為40%二甲亞砜，促進其溶解。此法適用于皮屑、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、糞便等標本的直接涂片檢查。,12,B、膠帶粘貼

5、法,用透明膠帶直接貼于取材部位，數分鐘后揭下，充分展平后，直接置貼于加有一滴浮液的載玻片上此液可以是10%20%的KOH，也可以采用乳酸酚棉藍染液（易于觀察）。該法常用于花斑癬患處的直接檢查。,13,乳酸酚棉藍染色 傳統(tǒng)染色法，酵母菌細胞、菌絲體和產孢結構等皆可被染成亮藍色；背景為暗淡的藍色。 過碘酸-雪夫染色（P.A.S） 在尋找真菌孢子、鑒別真菌、觀看真菌結構、等方面有意義 其他染色法 六胺銀法、愛先藍（alcian blue）法、革蘭氏染色法、以及特殊染色法,14,乳酸酚棉藍染色,15,革蘭染色法 在鑒別細菌、選擇抗菌藥物、研究細菌致病性等方面有意義 （真菌的簡單染色也可以） 所有的真菌

6、、放線菌均為革蘭染色陽性，呈紫黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織胞漿菌、諾卡菌及放線菌等培養(yǎng)物的形態(tài)檢查。,石膏樣小孢子菌,16,17,A、培養(yǎng)特性,B、抵抗力,18,D、培養(yǎng)基種類,E、菌落形態(tài),19,F、鑒定方式,20,A、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同,淺部真菌侵犯表皮角質層、毛發(fā)和甲板 深部真菌侵犯真皮及以下組織、粘膜和內臟。,B、真菌的致病性表現,1. 淺部真菌感染（外源性真菌）:手足癬、體癬、股癬、甲癬 2.條件致病性真菌感染（內源性真菌/機會致病性真菌）如：白假絲酵母菌（白色念珠菌）引起的鵝口瘡 3.深部真菌感染:新生（型）隱球菌：侵犯中樞神經系統(tǒng)引起慢性腦膜炎 4.真菌毒素的致病作用:急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黃曲霉素、青霉素（霉變食物） 5. 真菌超敏反應性疾病:敏感患者吸入真菌孢子，引起型超敏反應醫(yī)學教育網搜集整理。如：尋痲疹、哮喘、變應性鼻炎等。,四、真菌的致病性,21,五、真菌的防治原則,衛(wèi)生、干燥、消毒（福爾馬林） 避免直接或