1、2020/8/8，生化實驗，Please be quiet，上課！2020/8/8，生物化學(xué)實驗，淀粉酶活性測定，實驗2，時間：3，2020/8/8，生物化學(xué)實驗，1，學(xué)習(xí)和掌握植物體內(nèi)淀粉酶活性測定的原理和方法。2，master，-2淀粉酶理化特性。1，實驗?zāi)康模?020/8/8，生化實驗，2，實驗原理3360淀粉是植物生長過程中作為淀粉顆粒存在于細(xì)胞中的儲藏多糖。種子、塊莖、根器官含量豐富。天然淀粉含有直接鏈和支鏈淀粉兩種茄子成分。大部分淀粉含有直接鏈對支鏈淀粉的比率(2025): (7580)。支鏈淀粉或糖原分叉的結(jié)構(gòu)，-淀粉酶破裂產(chǎn)生自由麥芽糖，2020/8/8，生化實驗，酶是具有效率

2、和特異性的生物催化劑。大多數(shù)酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。特征：1、酶為高效(high catalytic power) 2、酶為特異性(specifity)、2020/8/8、生化實驗、酶活性(emzyme activity)植物有兩種淀粉酶，各有不同的理化特性。-淀粉酶耐熱耐酸，70加熱15min保持活動狀態(tài)，pH3.6時鈍化-淀粉酶耐酸耐熱，70加熱15min鈍化。因此，如果減緩其中一個，就可以測定其他酶的活性。2020/8/8，生化實驗，牙齒實驗使用加熱法鈍化-淀粉酶，測量-淀粉酶激活。具體方法采用3，5-二硝基水楊酸比色法測定淀粉酶水解生成麥芽的含量，以單位時間淀粉酶分解生成的麥芽的量為淀粉

3、酶活性大小。2020/8/8，生化實驗，堿性，加熱條件下還原糖和3，5-二硝基水楊酸(DNS)反應(yīng)，還原糖氧化成唐山，DNS是棕紅色3-氨基-5-硝基水楊酸，2020/8/8(3) 3，5-二硝基水楊酸；(4)麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml) (5)0.1M pH=5.6的檸檬酸緩沖。3，實驗材料、儀器和試劑：2020/8/8，生化實驗，4，實驗階段1麥芽糖濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，A540nm為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(通過Excel線性回歸曲線和回歸方程)，20min/8/8，生物化學(xué)實驗，2，酶液的制備：1.0 g(實際質(zhì)量記錄)，2020/8/8，生化實驗，3，-淀粉酶活性測定：(15min

4、 (2(3)測量管和對照管在40水浴15min中加入2ml 40預(yù)熱淀粉，立即取出40水浴保溫5min，然后迅速在測量管中加入4ML 0.4Mnaoh。2020/8/8，生物化學(xué)實驗，(4)取對照管和測量管中的溶液各2毫升，分別用20毫升的刻度稀釋2毫升3，5-二硝基水楊酸沸騰水浴540nm冷卻，將制作麥芽標(biāo)準(zhǔn)曲線的1號試管制成基準(zhǔn)溶液，進(jìn)行調(diào)整。，2020/8/8，生化實驗，4，淀粉酶總活力測定(1)2個試管，各測定酶液1ml，在對照組中添加4ml 0.4MNaOH，減緩酶活性。(2)在每個管道上添加1毫升檸檬酸緩沖液。(3)測量管和對照管在40水浴15min中加入2ml 40預(yù)熱淀粉，立即

5、取出40水浴保溫5min，然后迅速在測量管中加入4ML 0.4Mnaoh。2020/8/8，生物化學(xué)實驗，(3)將對比管和測量管內(nèi)溶液各取2毫升，分別用20毫升的刻度稀釋2毫升3，5-二硝基水楊酸沸騰水浴540nm冷卻，將制作麥芽標(biāo)準(zhǔn)曲線的1號試管制成基準(zhǔn)溶液，進(jìn)行調(diào)整。2020/8/8，通過生化實驗、標(biāo)準(zhǔn)曲線或線性回歸方程式獲得相應(yīng)的麥芽糖含量(mg/ml)，并根據(jù)以下公式計算-淀粉酶和-淀粉酶活力：-淀粉酶活力(每麥芽的毫克數(shù)/樣本生物重量5分鐘)=(A2-A1)VDW中：A2:試管中-用于測量淀粉酶水解淀粉的麥芽濃度(MG/ML)；A1:對照組中的麥芽糖濃度(mg/ml)。v:酶促反應(yīng)體積；d:酶溶液的總體積。W:樣品新鮮重量，5，實驗結(jié)果和計算：2020/8/8，生化實驗，()總淀粉酶活性(6毫克數(shù)/樣品新鮮重量5分鐘)=(B2-B1)VD樣品新鮮重量B2:v:酶促反應(yīng)體積；d:酶溶液的總體積。-淀粉酶活力淀粉