1、植物葉蛋白研究進展,目錄 1. 葉蛋白簡介 2. 葉蛋白研究進展 3. 存在問題及前景展望,1. 葉蛋白簡介,1.1 葉蛋白定義 葉蛋白是指刈割新鮮的、有利用價值的飼草或其他植物的地上部分（嫩葉或嫩莖葉），經(jīng)壓榨后，通過汁液提取、蛋白凝聚與分離干燥得到的蛋白質(zhì)濃縮物。,綠色植物莖葉中的蛋白質(zhì)一般分為兩類，一類是固態(tài)蛋白，一類是可溶性蛋白。 固態(tài)蛋白包括不溶性的葉綠體及線粒體構(gòu)造蛋白、核蛋白、細胞壁蛋白，一般很難溶于水，主要存在于經(jīng)粉碎、壓榨后分離出的綠色沉淀物中。 可溶性蛋白存在于經(jīng)離心分離出的上清液中，包括細胞質(zhì)蛋白、線粒體蛋白的可溶性部分，以及葉綠體基質(zhì)蛋白，葉蛋白就是這些可溶性蛋白的凝集

2、物。,1.2 葉蛋白營養(yǎng)價值 質(zhì)量高的葉蛋白含有70%的蛋白質(zhì)，豐富的維生素A、E和糖類。葉蛋白的 Ca、P、Mg、Fe、Zn的含量高，是各類種子的5-8倍，胡蘿卜素和葉黃素含量比葉子分別高20-30倍和4-5倍。葉蛋白膽固醇含量低，氨基酸種類齊全且組成比較平衡。 葉蛋白中還含有適量的脂肪、纖維素、可溶性糖和淀粉。,1.3.1 用葉蛋白對人體作食用試驗。結(jié)果表明，葉蛋白在生物學價值方面與牛奶相似。 1.3.2 國內(nèi)外在葉蛋白藥用方面研究的較多，如葉蛋白在抗氧化、預(yù)防心血管病、抗腫瘤、治療關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、老年性白內(nèi)障等方面的作用有研究報道。 1.3.3 飼用葉蛋白可用作雞和豬等的蛋白質(zhì)和維生素補

3、充飼料，在漁牧生產(chǎn)中，葉蛋白濃縮物也可以部分代替魚粉等優(yōu)質(zhì)蛋白飼料，都能取得良好的飼養(yǎng)效果。 1.3.4 葉蛋白還可以用于化妝品、洗滌用品、飲料和植物營養(yǎng)調(diào)節(jié)劑等中，還可將葉蛋白濃縮物作為原料進一步的分離得到葉綠素、葉綠素銅鈉、胡蘿卜素、純蛋白質(zhì)、維生素E和K、食用纖維素和某些活性酶等，并且葉蛋白的應(yīng)用領(lǐng)域還在不斷地拓寬。,1.3 葉蛋白應(yīng)用現(xiàn)狀,2.葉蛋白研究進展,植物綠葉中的蛋白質(zhì)含量頗為豐富，據(jù)測定大多數(shù)植物的綠葉的蛋白質(zhì)含量要比植物的根塊、果實等部位的含量高許多。 牧草和綠肥類主要是利用其新鮮莖葉提取蛋白質(zhì)，以苜蓿的含氮量最高，此外，豆科的紫云英、十字花科的胡蘿卜、茄科的煙草以及一些水

4、生植物如三葉草、水花生、浮萍等樹葉中粗蛋白的含量較高，松葉的粗蛋白高達12.1%。還有槐葉、桑葉、構(gòu)樹葉、柑桔葉、柳樹葉、榆樹葉、楊樹葉、香椿葉等樹葉都富含蛋白質(zhì)，可作為提取葉蛋白的原料。除此之外，一些農(nóng)產(chǎn)品的廢棄物也是葉蛋白的較好來源，如苧麻葉、蘆筍葉、紅薯藤葉等。,2.1 葉蛋白資源,2.2.1樣品預(yù)處理 干打漿法：劉建華等采用該法，將魯梅克斯嫩葉莖在室外風干后，剪切成小段，分數(shù)次用研缽研磨成糊狀，醫(yī)用紗布兩層疊放在一起，每次取少許研磨后的糊狀物放在紗布上，充分擠壓，擠出綠色汁液，從而分離出葉蛋白。該方法簡單，經(jīng)常與其他方法結(jié)合使用。,2.2 葉蛋白的提取,組織搗碎法：通常先用食品加工機將

5、組織打碎，然后再用10000-20000r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機（即高速分散器）將組織的細胞打碎。宋葆華等在ZK高速自控組織搗碎機中，將晾干的107種植物加蒸餾水300mL，搗碎3min，真空抽濾獲得葉蛋白含量。,利用細胞膜為天然的半透膜，在低滲溶液和低濃度的稀鹽溶液中，由于存在滲透壓差，溶劑分子大量進入細胞，將細胞膜脹破釋放出細胞內(nèi)含物。闞歡等用1001的液料比，浸泡60min，從辣木葉中分離葉蛋白。,直接加熱法：鄒文輝等對草坪草屑葉蛋白提取方法進行比較，直接加熱法為水浴加熱，保持溫度在8085，加熱時間5 min，直接加熱法和酸化加熱法提取率較高，但直接加熱法具有較好的絮凝沉淀效果，且

6、容易過濾，因此直接加熱法是提取草坪草屑葉蛋白的一種較好的方法。 酸堿加熱法：酸堿法和加熱法相結(jié)合的一種復合型葉蛋白提取方法。葉蛋白經(jīng)等電點沉淀和熱變性雙重因素共同作用，增加了蛋白質(zhì)凝聚機會，使葉蛋白凝聚快、凝聚物結(jié)構(gòu)緊密易分離，保證了葉蛋白的高提取率。趙希艷等采用酸堿加熱法提取紫花苜蓿葉蛋白，確定獲得葉蛋白高產(chǎn)率的最優(yōu)條件為:pH4.5、溫度80，加熱時間5min。酸堿加熱法的主要優(yōu)點是流程短操作方便、沉淀快、易于過濾收集等，缺點是酸堿等條件造成蛋白水解、影響蛋白活性。,2.2.2 葉蛋白提取方法,發(fā)酵法：利用乳酸菌產(chǎn)生的乳酸等改變漿液的pH 到蛋白質(zhì)的等電點，使蛋白沉淀，再通過離心得到葉蛋白

7、。曾凡枝等用該法從苜蓿中提取葉蛋白。發(fā)酵法提取葉蛋白的優(yōu)點是使植物葉中對動物機體有害的物質(zhì)失去活性，提高了蛋白質(zhì)品質(zhì)，能耗少，提取效率高，是生產(chǎn)葉蛋白的一種節(jié)能環(huán)保的優(yōu)良工藝。 有機溶劑沉淀法：這種方法較為常見，其優(yōu)點是沉淀快、絮凝物結(jié)構(gòu)緊密，易過濾收集。且經(jīng)有機溶劑脫色生產(chǎn)的脫色葉蛋白具有含糖量低、蛋白成分較為單一等高營養(yǎng)價值，可用于抗癌、營養(yǎng)保健食品的開發(fā)。Walter J.Bray 等用聚丙烯酰胺A150可高效的提取紫花苜蓿和黑麥草汁液中的白色葉蛋白。 等電點沉淀法：闞歡等將辣木樣品預(yù)處理后，進行均質(zhì)、離心處理，取上清液，等電點時離心取沉淀，然后調(diào)pH值溶解從而提取分離葉蛋白，等電點分離

8、pH為4.0 - 5.0 時，產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量達68.86%，蛋白質(zhì)提取率達70%。,電泳法：帶電荷的供試品(蛋白質(zhì)粗提液)在惰性支持介質(zhì)(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中，于電場的作用下，向其對應(yīng)的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，達到對不同物質(zhì)的分離。謝正軍等14用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）將苜蓿葉提取的粗蛋白分成不同的組分，確定其分子量大小。Silas Pessini Rodrigues等用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和二維聚丙烯酰胺凝膠電泳（2D-PAGE）從番木瓜葉中提取出15 種蛋白。 離子交換層析：根

9、據(jù)蛋白帶電性質(zhì)的不同，與交換劑發(fā)生交換，改變洗脫液pH 或離子強度，將其洗脫而達到分離的目的。Sharma P等用DEAE從水稻葉中分離出具有活性的兩種蛋白。,2.2.3 葉蛋白分離純化,目前的一般生產(chǎn)技術(shù)生產(chǎn)的葉蛋白還存在種種問題，如由于綠葉中存在非飽和脂肪酸，在空氣和水中長時間加熱, 會引起有效賴氨酸損耗,蛋白質(zhì)變性, 因而使消化率下降, 故常將提取的葉蛋白粉經(jīng)干燥后進行保存。然而干燥后的葉蛋白溶解度極低, 無法作為功能性成分在乳品、飲料、糖果等食品體系中加以利用。另外葉蛋白產(chǎn)品為深綠色, 且含有青草味, 這些都限制了它在食品中的應(yīng)用。,3. 存在問題及前景展望,葉蛋白資源豐富，加工過程簡單，成本低，有利于規(guī)?；a(chǎn)，而國內(nèi)在葉蛋白的深加工方面相對滯后，目前國